抑瘤素McDNA的克隆及表达研究

抑瘤素M（onecostatinM,OSM）是一种多功能的细胞生长调节因子．从PMA刺激后的U937细胞系提取总RNA,采用逆转录-PCR方法分离到了抑瘤素M的cDNA;将抑瘤素M的cDNA克隆到质粒pUC19中,筛选三个阳性克隆进行序列分析,与国外报导序列完全一致;将抑癌素M的cDNA克隆到质粒pBV220后再转化DH5a进行模拟表达,SDS-PAGE分析表明有OSM表达,表达量约占细菌总蛋白5％,经过初步纯化的OSM能明显抑制A375细胞的生长．     

抑瘤素M cDNA的克隆及表达研究

抑瘤素Ｍ是一种我功能的细胞生长调节因子,从ＰＭＡ刺激后的Ｕ９３７细胞系提取总ＲＮＡ,采用逆转录－ＰＣＲ方法分离到了抑瘤素Ｍ的ＣＤＮＡ;将抑瘤素Ｍ的ＣＤＮＡ克隆到质粒ＰＵＣ１９中,筛选三个阳性克隆进行序列分析,与国外报导序列完全一致;将抑瘤素Ｍ的ＣＤＮＡ克隆到质粒ＰＢＶ２２０后再转化ＤＨ５α进行模拟表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明有ＯＳＭ表达,表达量约占细菌总蛋白５％,经过初步纯化的ＯＳＭ能明显抑制Ａ     

抑瘤素-M(OSM)在GST融合表达系统中的表达、纯化和活性测定

抑瘤素Ｍ是一种具有多种生物活性的细胞因子,具有重要的研究价值和潜在的应用前景。基于ＧＳＴ融合表达载体,构建了一个ＯＳＭ的高效表达系统,诱导表达后融合蛋白占全菌蛋白的５０％以上,在低温诱导的条件下,可溶性蛋白中融合蛋白的含量可达１５％。在对包涵体形式的融合蛋白变复性的基础上,通过亲和层析一步纯化达到９０％左右的纯度。对融合蛋白进行了活性测定,结果提示了Ｎ端的头两个氨基酸对ＯＳＭ的生物活性是重要的。     

抑瘤素-M(OSM)在GST融合表达系统中的表达、纯化和活性测定

抑瘤素Ｍ是一种具有多种生物活性的细胞因子,具有重要的研究价值和潜在的应用前景。基于ＧＳＴ融合表达载体,构建了一个ＯＳＭ的高效表达系统,诱导表达后融合蛋白占全菌蛋白的５０％以上,在低温诱导的条件下,可溶性蛋白中融合蛋白的含量可达１５％。在对包涵体形式的融合蛋白变复性的基础上,通过亲和层析一步纯化达到９０％左右的纯度。对融合蛋白进行了活性测定,结果提示了Ｎ端的头两个氨基酸对ＯＳＭ的生物活性是重要的。     

人内皮生长抑制素基因克隆表达及其抑瘤作用

内皮生长抑制素（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ是最近报道具有抑制肿瘤生长和铁蛋白质,为此,从正常人肝细胞株Ｌ０２中抽提总ＲＮＡ,以ＲＴ－ＰＣＲ法获得了人内皮生长抑制素编码序列,序列分析表明,内皮生长抑制素ＣＤＮＡ开放阅读框架全长５５５ｂｐ,此基因（ＧｅｎＢａｎｋ登录号为Ａ地８４０６０）,共编码１、８４个氨基酸残序列为５个碱基与文献报道不同,蛋白质序列中有３个氨基酸残基与文献报道不同,说明存在人种间差异。将人     

淋巴抑瘤素对五株肿瘤细胞株的体外抑瘤效应的分析研究

淋巴细胞经刺激后分泌一种多肽类物质,这种细胞因子被称为淋巴抑瘤素。在体外培养中发现不同来源的肿瘤细胞对淋巴抑瘤素的敏感性是不同的,表现为三种类型:强反应株,此类细胞对其抑瘤效应反应强烈,抑制率达90％以上;弱反应株,此类细胞的抑制率在70％左右;另一类为负反应株,此类细胞对淋巴抑瘤素不但不表现出抑瘤效应,反而出现助长肿瘤细胞生长的效应。由于体外测定中有上述现象,所以建议在体内应用这类细胞因子时,应像抗菌素测抗菌谱一样测定其抗瘤谱,以利于对症用药。     

抑瘤素M受体对慢性自身免疫性荨麻疹发病机制的影响

本研究旨在探讨抑瘤素M受体(OSMR)在慢性自身免疫性荨麻疹(CAU)发病机制中的作用。本研究分别检测30例CAU患者及30名健康受试者的皮肤组织中OSMR、JAK和STAT3的表达,研究显示OSMR、JAK和STAT3在CAU患者皮肤组织中高表达(p<0.05)。转染OSMR-siRNA可显著降低CAU模型小鼠血清炎症因子IL-1、IL-6和IFN-γ水平,而转染JAK/STAT3信号通路激动剂Tyr705则可显著升高炎症因子水平(p<0.05)。转染OSMR-siRNA可显著降低CAU小鼠瘙痒次数、瘙痒时间和嗜酸性粒细胞计数,而转染Tyr705则可显著升高CAU小鼠瘙痒次数、瘙痒时间和嗜酸性粒细胞计数(p<0.05)。转染OSMR-siRNA促进了CAU小鼠上皮细胞的增殖能力,并抑制了细胞凋亡(p<0.05)。而转染Tyr705则抑制了CAU小鼠上皮细胞的增殖能力,并促进了细胞凋亡(p<0.05)。转染OSMR-siRNA下调了上皮细胞中OSMR、JAK和STAT3的表达,而转染Tyr705则上调了OSMR、JAK和STAT3的表达(p<0.05)。总之,本研究表明OSMR基因在CAU患者皮肤组织中高表达。OSMR基因沉默可通过抑制JAK/STAT3信号通路来抑制炎症因子表达及嗜酸性粒细胞数量,促进上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡。     

腺病毒介导的人抑瘤素M基因对A375人黑色素瘤细胞的抑制作用

目的:构建抑瘤素M(OSM)重组腺病毒载体,研究其对人黑色素瘤细胞A375的抑制作用。方法:以PEGZ-OSM重组质粒为模板,通过PCR技术扩增出OSM片段,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人OSM氨基酸序列相同的重组腺病毒子Ad-OSM,感染A375细胞,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot法检测OSM在A375细胞中的转录和表达;荧光显微镜观察A375细胞的形态学改变;MTT法和流式细胞术(FCM)检测Ad-OSM对A375细胞的生长抑制和细胞周期的抑制效应;半定量RT-PCR法检测OSM基因表达对A375细胞中的Bax、Bcl-2基因表达的影响。结果:基因测序和PCR分析结果显示,成功构建了Ad-OSM腺病毒表达载体;RT-PCR和Western blot法检测到OSM基因在A375细胞中的转录和表达;OSM基因的表达对A375细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,OSM基因可通过上调细胞中Bax和下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。结论:成功构建了Ad-OSM腺病毒表达载体,感染OSM基因可明显抑制A375人黑色素瘤细胞的生长,诱导其凋亡,该现象可能是通过改变Bax、Bcl-2基因表达水平来发挥抗肿瘤作用。     

一个新鼻咽癌抑瘤候选基因的克隆及其功能初步分析

从cDNA 代表差异分析法（cDNA representational difference analysis, cDNA RDA）分离的新cDNA片段入手,进一步采用RT-PCR验证,其中发现AF152605片段在74%鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)活检组织中表达下调和缺失,DNA印迹显示其代表一转录本为2.1 kb的基因,结合生物信息学,运用文库筛选克隆该基因,命名为NAG4基因,GenBank登录号AF179285,定位于6q22.1～22.33,至少含有两个外显子,并在第一外显子的上游有TATA盒样序列,编码一个508个氨基酸组成的、分子质量为57.4 ku的蛋白质;功能预测NAG4基因产物与小鼠溴区蛋白BP75有84%同源,是含有多个磷酸化位点和溴区结构域的核内转录因子;突变分析表明NAG4基因在HeLa细胞株中发生整码突变.以上结果说明NAG4基因是鼻咽癌抑瘤基因的良好候选者,其表达的下调参与了鼻咽癌的发生.