槲皮苷生物活性的研究进展

黄酮类物质广泛分布于中草药、蔬菜、水果、茶叶、葡萄酒等中,在人类健康、疾病的预防治疗中起着不可代替的作用。在人类流行病学调查研究中发现,人们日常饮食中黄酮类物质的摄入量与心血管疾病的发生存在一定的负相关[1],黄酮类物质可以显著降低心血管疾病的发生率。大量的体外实验表明,黄酮类物质通过直接清除各种活性氧自由基、螯合金属离子、抑制LDL及DNA氧化损伤等途径,发挥抗氧化清除自由基的作用[2],且某些黄酮抗氧化能力甚至强于典型的还原剂维生素C和维生素E。     

蒙药材刺柏叶中槲皮苷的含量测定

本实验建立了蒙药材刺柏叶中槲皮苷的HPLC含量测定方法.色谱条件为:Diamonsil C18(4.6 mm ×250 mm,5μm)和Shim-Pack C18(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相:甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸(40∶ 60∶ 1.5),检测波长:254 nm,流速:1.0 mL/min,柱温:30℃.槲皮苷进样量在40.2 ng ～603.0 ng范围内线性关系良好(r =0.9998),其平均加样回收率为100.45％,RSD为0.69％(n=6).本方法简便易行,结果准确,重复性好,可用于刺柏叶中槲皮苷的含量测定.     

异槲皮苷调控线粒体动力学逆转造影剂所致大鼠急性肾损伤

探究异槲皮苷对造影剂所致大鼠急性肾损伤的治疗作用及机制,通过建立碘普罗胺370注射液诱发的大鼠造影剂所致肾病模型,采用每天25、50 mg/kg异槲皮苷和阳性药N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行预处理治疗,检测大鼠肾脏血肌酐水平、组织形态学、丙二醛(MDA)和H₂O₂水平、还原性谷胱甘肽(GSH)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)水平;采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)、半胱天冬酶3(caspase-3)活性检测肾脏组织的凋亡情况;免疫组织化学检测多腺苷二磷酸多聚酶(Cleaved PARP)、线粒体融合蛋白2(MFN2)和线粒体动力相关蛋白1(DRP1)的表达和免疫印迹法检测肾脏组织MFN2和DRP1的表达。结果表明：异槲皮苷可以有效减轻造影剂碘普罗胺所致的急性肾损伤,缓解肾脏组织的氧化应激状态,改善线粒体动力学失衡。本研究结果将为异槲皮苷进一步被开发成为造影剂所致肾病急性肾损伤的治疗药物提供理论基础。     

RP-HPLC法同时测定藏药珠芽蓼中牡荆素、槲皮苷和槲皮素的含量(英文)

采用RP-HPLC法建立了同时测定珠芽蓼中牡荆素、槲皮苷、槲皮素三种黄酮的方法,色谱柱为kromasilC18(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(含0.25%磷酸)为流动相梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长360 nm。结果表明,牡荆素、槲皮苷和槲皮素质量浓度在8～40、5～50μg/mL和5.33～52μg/mL范围内与色谱峰面积均呈良好的线形关系,平均回收率分别为100.3%、98.9%和100.4%,日内稳定性偏差分别为0.78%,0.51%和0.38%,日间稳定性偏差为2.6%,1.9%和2.1%。该方法简单、准确,可为珠芽蓼的质量控制提供科学依据。     

槲皮苷:一种抑制钙调蛋白磷酸酶(CN)的新型免疫抑制剂

目的 以钙调蛋白磷酸酶(CN)为靶酶,从中草药中寻找高效、低毒的免疫抑制剂.方法 以CN为靶点,筛选并分离能够抑制其活性的天然化合物.在细胞和动物水平评价该化合物的免疫抑制效果及毒副作用,并通过荧光猝灭、分子对接、免疫印迹、双荧光素酶报告基因、实时定量PCR等实验探究天然化合物与CN的作用机理及可能的免疫抑制作用机制....     

氧化应激对肠屏障功能障碍发病的影响

机体累积过量的活性氧自由基所导致的氧化应激是多种肠道疾病发生的共同病理生理基础。肠上皮细胞间的紧密连接是维持肠屏障功能的重要结构基础之一。近年来研究表明,氧化应激能通过多种途径破坏肠上皮细胞间的紧密连接,导致肠上皮屏障功能障碍。本文对蛋白激酶C、丝裂原活化蛋白激酶、蛋白质的修饰以及缺氧诱导因子-1(HIF-1)在肠屏障功能障碍中的作用机制进行简要概述,旨在为肠屏障功能障碍的治疗和预后提供新的思路。     

TNF-α在癌症中的作用研究进展

肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF—OL）是具有多种生物学效应的细胞因子。机体内适量的TNF-α在抵抗病原菌和肿瘤防御中起着重要的作用,但当其超过一定量时,TNF-α与其他炎性因子一起反而能促进癌症的发生发展及产生多种病理性损伤。就TNF-α在癌症中的双重作用及其临床研究现状作一综述。     

研究报告：槲皮苷： 一种抑制钙调蛋白磷酸酶（CN）的新型免疫抑制剂

目的以钙调蛋白磷酸酶(CN)为靶酶,从中草药中寻找高效、低毒的免疫抑制剂。方法以CN为靶点,筛选并分离能够抑制其活性的天然化合物。在细胞和动物水平评价该化合物的免疫抑制效果及毒副作用,并通过荧光猝灭、分子对接、免疫印迹、双荧光素酶报告基因、实时定量PCR等实验探究天然化合物与CN的作用机理及可能的免疫抑制作用机制。结果槲皮苷在体外和细胞内均能抑制CN的活性,并且能够有效抑制小鼠脾细胞的增殖,缓解小鼠迟发超敏反应。毒理研究结果显示,槲皮苷对实验小鼠无急性毒性,且毒副作用很小。荧光猝灭实验和分子对接分析表明,槲皮苷可能与CN上的两个位点相结合,并通过CN-NFAT通路参与调节免疫反应。结论通过筛选获得了新型CN抑制剂槲皮苷。槲皮苷具有成为新型低毒免疫抑制剂的潜在可能。     

哺乳动物肠上皮屏障中非编码RNAs的调控作用

哺乳动物肠上皮是一种拥有快速自我更新能力的组织,在维持机体免疫稳态与肠道应激后的损伤修复中发挥重要作用。源于隐窝底部的多能肠干细胞不断进行增殖、迁移与分化,并沿隐窝 绒毛轴向上移动,从而维持肠上皮完整性。该过程受严格而复杂的基因调控网络参与。越来越多的数据表明,肠上皮完整性受到广泛的非编码RNA的调控,主要包括肠黏膜再生、保护与上皮屏障功能等方面。本文重点讨论了两类非编码RNA(包括microRNAs和lncRNAs)转录后调控肠上皮屏障功能的研究进展。其中,miR-503、miR-146和lnc-uc.173、lnc-SPRY4-IT1、lnc-plncRNA1、lnc-Gata6等,能够促进肠黏膜的更新,增强上皮屏障功能;相反,miR-222、miR-29b、miR-195和lnc-H19与lnc-BC012900等,抑制肠上皮再生并破坏肠上皮屏障功能。miRNAs、mRNAs与lncRNAs间构成复杂的分子网络,共同调控肠上皮稳态。深入研究与肠上皮相关的miRNAs和IncRNAs分子及其作用机制,探寻引起肠黏膜炎症的关键分子靶标,为肠道炎症临床诊治提供新方向与新方法。     

哺乳动物肠上皮屏障中非编码RNAs的调控作用

哺乳动物肠上皮是一种拥有快速自我更新能力的组织,在维持机体免疫稳态与肠道应激后的损伤修复中发挥重要作用。源于隐窝底部的多能肠干细胞不断进行增殖、迁移与分化,并沿隐窝 绒毛轴向上移动,从而维持肠上皮完整性。该过程受严格而复杂的基因调控网络参与。越来越多的数据表明,肠上皮完整性受到广泛的非编码RNA的调控,主要包括肠黏膜再生、保护与上皮屏障功能等方面。本文重点讨论了两类非编码RNA(包括microRNAs和lncRNAs)转录后调控肠上皮屏障功能的研究进展。其中,miR-503、miR-146和lnc-uc.173、lnc-SPRY4-IT1、lnc-plncRNA1、lnc-Gata6等,能够促进肠黏膜的更新,增强上皮屏障功能;相反,miR-222、miR-29b、miR-195和lnc-H19与lnc-BC012900等,抑制肠上皮再生并破坏肠上皮屏障功能。miRNAs、mRNAs与lncRNAs间构成复杂的分子网络,共同调控肠上皮稳态。深入研究与肠上皮相关的miRNAs和IncRNAs分子及其作用机制,探寻引起肠黏膜炎症的关键分子靶标,为肠道炎症临床诊治提供新方向与新方法。     

异槲皮苷对Aβ25-35导致的PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

探讨异槲皮苷对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)导致的PC12细胞氧化损伤的保护作用.首先通过分子对接技术分析异槲皮苷与AMPK的结合情况.采用Aβ25-35(20 μmol/L)损伤PC12细胞建立细胞氧化损伤模型,采用甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,通过试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、活性氧(ROS)含量、...     

热休克预处理对TNF-α诱导的RAW264.7巨噬细胞迁移的影响

热休克反应是机体中一个重要的内源性保护机制,但其对TNF-α诱导的单核/巨噬细胞迁移有无影响目前尚不清楚.采用酶联免疫吸附实验观察TNF-α(20μg/L)刺激RAW264.7巨噬细胞4h后炎症因子IL-1β、IL-6、IL-15的表达情况;Western blot验证热休克预处理诱导热休克蛋白表达的增加;利用细胞趋化实验观察热休克预处理(42℃,1h)对TNF-α所致巨噬细胞迁移的影响.研究发现,TNF-α可明显促进RAW264.7细胞株中IL-1β、IL-6、IL-15等炎症因子的释放;热休克预处理诱导热休克蛋白HSP70、HSP90、HSP25表达增加;细胞趋化实验发现TNF-α处理的RAW264.7细胞迁移能力较正常对照组明显增强,而热休克预处理组巨噬细胞的迁移能力较单纯TNF-α处理组明显减弱.上述结果表明,热休克预处理抑制TNF-α所致巨噬细胞的迁移.     

利用TNF-α诱导建立结肠癌细胞HCT116体外侵袭模型

该研究利用TNF-α诱导建立肿瘤细胞体外侵袭模型,为进一步的研究提供基础。利用20 ng/mL TNF-α刺激结肠癌细胞HCT116 7 d后,使用流式细胞术检测HCT116细胞的CCR7和CXCR4受体表达量的变化,并利用Transwell小室检测TNF-α刺激对CCL21、SDF-1介导的细胞迁移与侵袭能力的影响。实验结果显示,20 ng/mL TNF-α刺激7 d后的HCT116细胞的CCR7和CXCR4表达量均显著增加,侵袭能力也增强,且使CCL21、SDF-1介导的细胞迁移与侵袭能力显著增强。结果说明了本实验利用TNF-α诱导HCT116细胞,成功建立了HCT116的体外侵袭模型,为接下来的研究提供了细胞模型基础,也为进一步的药物筛选提供了基础。     

抗TNF-α单链抗体的表达及其纯化

克隆抗人肿瘤坏死因子(TNF-α)鼠源单抗的可变区基因以构建其单链抗体(ScFv)表达载体,实现在大肠杆菌的表达,并进行ScFv的可溶性纯化与鉴定。采用RT-PCR技术,以前导肽序列的引物从1个分泌抗人TNF-α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆抗体轻链、重链可变区基因(VL,VH),构建ScFv基因,将ScFv基因片段与pGEX-4T-1表达载体连接,在大肠杆菌中表达并采用十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)进行可溶性纯化,最后鉴定其生物活性。结果显示,得到了功能性重排的轻、重链可变区基因,分别构建了VH和VL不同连接顺序的HLL(VH-Linker-VL)和LLH(VL-Linker-VH)两种ScFv,LLH的表达量较HLL的高,但亲和力不及HLL。采用Sarkosyl溶解包涵体,对目的蛋白进行可溶性纯化,蛋白纯度达到90%,纯化后的蛋白经ELISA和WB证明ScFv维持了亲本抗体与TNF-α特异性结合的能力,且具有细胞毒中和活性。实验中研究探索了一种新颖的,操作简单,省时的裂解、纯化方案,实现了单链抗体经原核系统的表达后得以可溶性纯化。     

真菌竹黄双向调节TNF-α诱导的L929细胞凋亡过程

真菌竹黄是我国特有的菌类药物,应用前景广阔,具有抗肿瘤和抗炎功效,但作用机理仍不十分清楚。我们以TNF-α诱导小鼠成纤维细胞(L929细胞株)为模型,深入探讨竹黄发挥药效的作用机理。研究发现,竹黄可以双向调节TNF-α诱导的L929细胞凋亡过程,高浓度竹黄可以促TNF-α诱导的细胞凋亡,低浓度竹黄具有抗TNF-α诱导的细胞凋亡作用。在竹黄抗凋亡过程中,信号网络中所涉及的关键蛋白COX-2表达下降,BCL-2表达上升,而NF-κB基本无明显变化。我们推测竹黄中含有药理作用相反的物质,通过调节信号网络中关键蛋白COX-2和BCL-2等的变化,进而改变信号网络平衡,发挥抗肿瘤与抗炎功效。相关研究有利于深入理解竹黄抗肿瘤与抗炎的药效作用,为运用生物活性导向和天然药物提取分离技术,进行相关新药的研发提供理论依据。     

曲美他嗪对大鼠放射性心肌损伤后TNF-α表达的影响

目的:放射性心肌损伤是纵膈及胸腔等部位恶性肿瘤放射治疗后发生的严重并发症,目前尚无有效防治方法,而本实验拟探索曲美他嗪对放射性心肌损伤的保护作用。方法:将45只SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、单纯照射组(X组)、曲美他嗪治疗组(T组),每组15只,其中X组、T组予以10 Gy/d,共3天。大鼠照射完毕处死后测定血清cTnI浓度,心肌组织TNF-αmRNA及蛋白的表达。结果:1.X组与C组相比,血清cTnI浓度,心肌组织TNF-αmRNA及蛋白的表达均明显升高(P0.05);2.T组与C组相比,血清cTnI浓度,心肌组织TNF-αmRNA及蛋白的表达均明显升高(P0.05);3.T组与X组相比,血清cTnI浓度,心肌组织TNF-αmRNA及蛋白的表达均明显降低(P0.05)。结论:曲美他嗪能够通过减少心肌组织TNF-αmRNA及蛋白的表达,从而有效减轻大鼠放射后心脏炎症反应,以减轻心肌损伤。     

紫菜多糖对小鼠TNF-α、NO的诱生作用

探讨紫菜多糖对小鼠免疫功能的刺激作用。以不同浓度的紫菜多糖及生理盐水(NS)经BALB/C小鼠腹腔连续注射7 d(1次/d)后,通过结晶紫染色法及Griess法分别测定小鼠的脾细胞分泌TNF-α、NO水平。0.15 g/kg紫菜多糖注射组小鼠脾细胞分泌TNF-α、NO的水平高于NS对照组(P<0.05)。结果可见,适宜浓度的紫菜多糖具有增强小鼠免疫功能的效应。     

尿激酶对急性脑梗塞患者血清中TNF-α表达的影响

目的:分析尿激酶对急性脑梗患者血清中TNF-α表达水平的影响.方法:选取48例急性脑梗塞患者随机分为两组,对照组采取常规治疗方法,观察组采取尿激酶溶栓治疗,观察两组患者的临床疗效,探讨尿激酶对急性脑栓塞患者血清中TNF-α表达水平的影响.结果:与对照组相比,观察组患者治疗效果明显,在溶栓后2小时及6小时TNF-α表达水平明显下降,与其临床疗效和预后具有密切相关性.结论:尿激酶能够降低TNF-α,减轻患者的脑细胞损伤,提高患者的临床疗效.     

HPLC法测定牙膏中柚皮苷的含量

建立了高效液相色谱测定牙膏中柚皮苷含量的方法。采用的色谱条件:Hypersil BDS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温为40℃;以水(A相)和乙腈(B相),梯度洗脱程序为:0～15 min,10%～100%B;流速为1.0 mL/min;检测波长为283 nm;进样量为20μL。结果表明,柚皮苷的质量浓度在14.55～116.40μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加标回收率为97.56%。该方法稳定、准确,重现性好,可作为牙膏中柚皮苷的含量测定和质量控制方法。