乳腺恶性肿瘤标本固定方法比较

目的 通过对比3种乳腺根治术标本的取材方式和固定时间,摸索制备高质量乳腺根治术标本切片的最佳固定方法。方法 随机收集上午、下午接收乳腺根治术标本50例,上午每例标本各取一块肿物、腺体组织和淋巴结组织,固定9 h后放入脱水机;下午每例肿物、腺体和淋巴结各取2块,1块固定4 h后放入脱水机,另1块固定28 h后放入脱水机。各组织常规脱水、石蜡包埋、切片后,进行HE染色、E-cadherin酶标法免疫组织化学检测和Her-2荧光原位杂交染色。比较3种固定方法的制片质量,探讨乳腺根治术标本最佳固定方法。结果 固定4 h即开始脱水的肿物和腺体组织的切片不完整发生率显著高于固定9 h和28 h;固定4h和9h的淋巴结切片不完整发生率高于固定28 h;固定4 h、9 h、28 h肿物、腺体HE染色质量无明显差异,但固定9 h与28 h的肿物、腺体E-Cadherin酶标法免疫组织化学正常率高于固定4 h,固定28h淋巴结染色质量高于固定4 h与9 h;固定4 h肿物Her-2荧光原位杂交成功率低于固定9 h与28 h。结论 乳腺根治术标本的肿物与腺体固定9 h后即可放入脱水机,淋巴结则需延长固定时间...     

周末组织处理程序的改进

目的探讨周末切取组织处理程序的改进方法。方法收集40例乳腺癌根治术标本,每例连续取3块组织,随机分为日常程序处理组(常规组)、延时程序处理组(延时组)和改进程序处理组(改进组),比较3组切片裂痕或脱片的发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测质量、荧光原位杂交实验结果。结果切片裂痕或脱片的发生率在延时组明显高于常规组,改良组与常规组基本相同;改良组与常规组切片核质对比清晰,红蓝适度,延时组稍不清晰,组织结构稍模糊;免疫组织化学检测阳性率在3组基本相同,但常规组和改良组切片染色更强,背景清晰,而延时组切片染色强度较弱、背景欠清晰;FISH结果阳性率在常规组和改良组相同,而延时组显著低于常规组和改良组。结论改进的周末切取组织处理程序固定、透明、浸蜡3个环节与标准程序相同,而将多余的时间分配给脱水环节,组织脱水彻底,有利于后期制片,特别是有利于后期的HE染色、免疫组织化学检测或FISH检测,值得推荐。     

病理冷冻切片组织速冻与解冻方法的优化

目的优化病理冷冻切片组织速冻与解冻的方法,以期提高冷冻组织制片的效率和切片质量。方法随机抽取50例术中快速冷冻切片诊断为乳腺浸润性导管癌病例,每例取3块组织,分3组进行速冻处理:不加盖冰锤组,冰冻切片机配置冰锤组,专利冰锤组。分析比较3组的速冻时间和冷冻切片HE染色质量。将冷冻制片后剩余的组织用不同的方法分两组进行解冻处理:固定剂融冰组,流水融冰组;将解冻处理后的组织与新鲜标本直接固定的组织行人表皮因子受体(HER-2)免疫组织化学染色,比较3组在免疫组织化学染色效果方面的差异。结果运用专利冰锤组件速冻,冷冻速度快,运用专利冰锤组件制出的冷冻切片组织结构形态良好,冰晶、褶皱现象少。三组不同方式处理的组织HER-2免疫组织化学染色阳性率一致,但组织新鲜固定组和固定液融冰组在阳性细胞定位和阳性染色强度方面均强于流水融冰组。结论推荐运用专利冰锤组件速冻组织,速度快且冷冻切片质量佳;冷冻制片后剩余组织的解冻处理,推荐在固定液中解冻,边溶化边退冰,最大限度的保存组织抗原以利于后续的工作。     

应用VAN-Clear与低甲醛的病理组织处理改良方法的评价

目的探索一种可靠、稳定、高效、环保、可替代传统病理组织处理与制片方法的改良方法。方法选取10只实验大鼠,每只大鼠选取14种组织,每个组织均匀切成3块,第一块采用4%中性甲醛固定(改良中性甲醛组),第二块采用4%多聚甲醛固定(改良多聚甲醛组),第三块采用4%中性甲醛固定(传统中性甲醛组);两个改良组的组织经相应固定液固定后均用流水及75%酒精祛除组织的固定液,然后进入梯度酒精及VAN-Clear进行脱水透明;传统中性甲醛组在固定后不进行祛除固定液处理而直接入梯度酒精及二甲苯进行脱水透明。对比3组实验的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果和HE染色评分;比较取材室及技术室的甲醛、二甲苯及噪声污染的数据。结果两个改良组与传统组的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果及HE染色评分基本一致,3组HE切片的优良率均为100%,优级率均大于85%;甲醛及二甲苯检测结果远远低于我国的最高容许浓度,噪声监测优于中国环境噪声容许的夜间噪声标准。结论采用VAN-Clear以及低甲醛的病理组织处理改良方法可靠、稳定、高效、环保,可替代传统病理组织处理方法。     

褪色HE染色切片ALK基因融合检测可行性探索

目的 探索利用HE染色切片褪色样本进行ALK基因融合检测的可行性。方法 选取3例ALK基因融合阳性的福尔马林固定石蜡包埋（formalin fixed and paraffin embedded,FFPE）组织样本的HE染色切片,分别经盐酸乙醇褪色法和高锰酸钾草酸氧化漂白法褪色后,提取RNA,采用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术,检测ALK基因融合。结果 从经盐酸乙醇褪色法或高锰酸钾草酸氧化漂白法褪色的HE染色切片中提取的RNA的纯度与从对照切片中提取者无显著差异,但其浓度较从对照切片中提取者显著降低。在模板量相同的条件下,经盐酸乙醇褪色的HE染色切片与对照组切片均检测到明确的ALK基因融合阳性,而经高锰酸钾草酸褪色的HE染色切片无任何曲线升起。从经盐酸乙醇褪色的HE染色切片中提取的RNA的完整性与从对照切片中提取的RNA的完整性无差异,但显著高于从经高锰酸钾草酸褪色的HE染色切片中提取者。为保证研究的准确性,本研究采用免疫组织化学与荧光原位杂交法对选取的ALK基因融合阳性样本进行验证,结果发现所选样本均为明确阳性。结论 HE染色切片经盐酸乙醇褪色后提取的RNA可以用于ALK...     

淋巴结组织切片HE染色的体会

目前,组织化学、免疫组织化学、电镜和ＰＣＲ等先进技术虽已用于淋巴系统疾病,尤其是淋巴系统肿瘤的诊断、鉴别诊断和研究,但是,石蜡切片ＨＥ染色仍然是临床病理诊断最常用的有效方法。由于淋巴组织结构复杂,组织处理不当时,常常难以获得理想的切片质量,给准确诊断带来许多困难,有时甚至造成误诊。影响淋巴结石蜡切片质量的因素较多,但我们认为关键应注意以下几个环节。１　淋巴结活检石蜡切片的应用淋巴结石蜡切片主要用于活检和穿刺组织的制片,为了获得准确的病理诊断、疗效判断和某些研究工作,需要高质量的ＨＥ染色切片。诊断…     

成年贵州小型猪淋巴结组织形态学观察及免疫组化研究

目的对成年贵州小型猪淋巴结进行形态学观察及免疫组化研究,为其用于建立人类免疫相关疾病模型提供参考。方法分别取24只成年贵州小型猪淋巴结组织进行固定、切片、HE染色,光镜下观察组织形态,免疫组化SP法检测CD3、CD4、CD8及CD20阳性细胞的比例和分布。结果成年贵州小型猪淋巴结皮质、髓质分布不规则,皮质、髓质并非完全倒置。皮质由淋巴小结和弥散性淋巴组织构成,髓质内可见髓索和髓窦。CD3、CD4、CD8阳性细胞主要分布在副皮质区,CD20阳性细胞主要分布在淋巴小结和髓质内。结论成年贵州小型猪淋巴结组织结构与其他哺乳动物有所不同,淋巴结内可见皮质、髓质倒置分布,但并非完全倒置。淋巴结中T、B细胞分布与人和其它哺乳动物之间没有明显的差异。     

大鼠睾丸组织固定法的优选研究

目的选择一种最优势、合理的固定方式以提高对睾丸组织制片效果,以配合不同种类的科学研究。方法选用10％甲醛溶液、NBF—Bouin’s、Bouin’s和改良Davidson’s四种不同的固定液对大鼠睾丸进行充分固定后,制作石蜡切片,进行HE染色,比较不同固定液中的睾丸组织学形态的差异;利用糖原特殊染色（PAS）,探讨不同固定液对睾丸糖原观察的影响;采用免疫组织化染色,测评睾丸组织内雄激素受体的固定效果。结果改良Davidson’8固定液较NBF—Bouin’s引起的曲细精管萎缩轻,形态更为清晰,用免疫组织化学方法检测雄激素更为敏感,并且改良Davidson＇s固定液在需要对精子发生进行分期时,其PAS染色的效果与Bouin＇s液固定后等同。结论与苴守圈常浦相№曲冉David0Rnn浦对女宙奥由的圈索特罩掂杯     

快速褪黑色素方法在免疫组织化学染色中的应用

目的 探讨在恶性黑色素瘤组织中如何快速褪除黑色素,便于进行免疫组织化学检测和观察.方法 选取20例恶性黑色素瘤组织石蜡切片,分别应用0.5％高锰酸钾水浴法、0.25％高锰酸钾溶液滴入法、15％过氧化氢浸泡法和传统过氧化氢脱色法进行褪黑色素处理,处理过的切片分别进行免疫组织化学和HE染色,比较染色结果.结果 以0.25％...     

两种操作方法在EBER原位杂交染色中的比较与应用

目的比较全自动免疫组织化学染色机染色和手工染色在EBER原位杂交技术中的应用。方法收集EBER染色阳性表达的不同组织标本35例,每例切片2张,分别采用罗氏Ventana免疫组织化学染色机染色和手工染色两种方式进行EBER原位杂交染色,对染色结果进行比较和分析。结果 35例手工组与仪器组染色结果一致,但仪器组阳性细胞着色深,与背景染色对比鲜明,且仪器组节省时间11h。结论两种方法在EBER染色中结果一致,但仪器组图像质量更好,且操作方法简便,更适合临床推广。     

乳腺癌中EGFR蛋白表达和基因扩增的检测结果比较

目的：比较免疫组织化学技术检测乳腺癌中EGFR蛋白表达和荧光原位杂交检测EGFR基因扩增的结果的符合率,为EGFR靶向治疗病例的选择提供依据。方法：随机选取2005年1月到2011年12月冷水江市人民医院和湖南省肿瘤医院病理科的147例乳腺癌档案病例,采用免疫组织化学技术检测乳腺癌组织中EGFR蛋白表达,荧光原位杂交检测EGFR的基因扩增,比较两种方法阳性结果的符合率。结果：免疫组化染色结果显示EGFR在原发性和转移性乳腺癌中的阳性表达率分别为85%（105/123）和79%1（9/24）,两组比较无显著差异（P〉0.05）。FISH检测结果显示原发性和转移性乳腺癌中分别有12%（15/123）和8%（2/24）存在EGFR基因扩增,两组比较结果无显著差异（P〉0.05）。所有存在EGFR基因扩增的原发性和转移性乳腺癌的EGFR免疫组织化学结果均为阳性。在原发性和转移性乳腺癌中,免疫组化阳性和基因扩增程度间呈显著正相关（P〈0.05）,但免疫组化结果预测基因扩增的特异性较低。结论：免疫组织化学检测EGFR只能作为EGFR靶向治疗病例选择的初步筛选,进一步进行荧光原位杂交检测EGFR基因扩增是必须的。     

乳腺癌中EGFR蛋白表达和基因扩增的检测结果比较

目的:比较免疫组织化学技术检测乳腺癌中EGFR蛋白表达和荧光原位杂交检测EGFR基因扩增的结果的符合率,为EGFR靶向治疗病例的选择提供依据。方法:随机选取2005年1月到2011年12月冷水江市人民医院和湖南省肿瘤医院病理科的147例乳腺癌档案病例,采用免疫组织化学技术检测乳腺癌组织中EGFR蛋白表达,荧光原位杂交检测EGFR的基因扩增,比较两种方法阳性结果的符合率。结果:免疫组化染色结果显示EGFR在原发性和转移性乳腺癌中的阳性表达率分别为85%(105/123)和79%1(9/24),两组比较无显著差异(P0.05)。FISH检测结果显示原发性和转移性乳腺癌中分别有12%(15/123)和8%(2/24)存在EGFR基因扩增,两组比较结果无显著差异(P0.05)。所有存在EGFR基因扩增的原发性和转移性乳腺癌的EGFR免疫组织化学结果均为阳性。在原发性和转移性乳腺癌中,免疫组化阳性和基因扩增程度间呈显著正相关(P0.05),但免疫组化结果预测基因扩增的特异性较低。结论:免疫组织化学检测EGFR只能作为EGFR靶向治疗病例选择的初步筛选,进一步进行荧光原位杂交检测EGFR基因扩增是必须的。     

FISH检测快速诊断曲霉菌感染的临床价值

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测曲霉菌感染的可行性和特异性,以期早期病原学诊断临床真菌感染。方法采用地高辛末端标记的18S-1寡核苷酸探针与27例经HE及PAS染色诊断为可疑真菌感染的石蜡包埋组织切片进行FISH检测。结果 HE及PAS染色可疑真菌感染分别为23例和27例。27例可疑真菌感染标本14例检出FISH阳性信号。结果 FISH可以特异性地检测出组织石蜡切片中的曲霉菌,设计不同菌属探针进行靶DNA杂交可以快速检测各种临床标本中的真菌感染,从而作为IFI早期病原学诊断的一种新策略。     

病理快速冷冻切片染色的质控切片制备

目的探索一种较佳的病理快速冷冻切片染色质控片的制备方法。方法随机抽取60例快速冷冻组织,每例取2块组织,随机分为A、B二组,在-25℃速冻后,A组(标准组)切片放入AAF液(由95%乙醇A、乙酸A、甲醛F按85:5:10的比例配制而成)固定30s后立即进行HE染色,B组切片放入AAF液固定30s后取出室温晾干后放进冷冻切片机内过夜。余下的A组及B组组织进行后续2种不同的操作。C组:得到A组切片后的组织不做任何处理,直接放冷冻切片机机箱内,并将冷冻切片机箱体温度调高至-10℃,第二天上午再次调至-25℃;D组:得到B组切片后的组织于组织上加包埋剂覆盖后放冷冻切片机机箱内,余操作同C组。C、D两组于第二天上午8点再次进行冷冻切片后同B组一同进行HE染色,以十分制评定切片有无裂隙、皱褶或冰晶,染色后组织结构、细胞核着色和核质对比清晰度等6项指标的得分,分别与A组的染色片进行比较。结果 A、B两组切片质量评价指标得分无明显差别,C组切片无裂隙指标得分低于A组,D组无冰晶指标得分低于A组;B、C两组的组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分与A组比较无显著差异;D组组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分均低于A组。结论新鲜的组织冷冻切片后,切片立即放入AAF液固定30s,随后取出,常温晾干后再次放进冷冻切片机机箱内过夜直至第二天上午放入全自动染色机内进行HE染色,观察染液的染色力,适用于每天快速冷冻切片工作开展前的全自动染色机的染色质控。     

链脲佐菌素糖尿病小鼠睾丸内生精细胞减少与PCNA和Ki67表达降低

目的通过检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Ki67在正常及糖尿病小鼠睾丸组织中表达的差异,探讨糖尿病对生精细胞增殖的影响。方法 30只正常雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组(10只)和糖尿病组(20只)。采用腹腔注射链脲佐菌素的方法建立糖尿病小鼠模型,对照组注射相同体积的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液。造模成功3周后处死动物,取睾丸组织,常规固定、石蜡包埋、切片HE染色观察睾丸组织的形态学变化;免疫组织化学SP法检测PCNA及Ki67在睾丸组织中的表达;图像分析技术分析组织中PCNA及Ki67免疫组织化学表达水平。结果 HE染色显示,糖尿病小鼠睾丸内处于精子发生前半期的生精小管内生精细胞排列疏松,细胞层数偏少,附睾管内精子密度相对较低;免疫组织化学染色显示,PCNA和Ki67在糖尿病小鼠睾丸生精小管中的表达均明显降低。结论高糖可能通过降低生精细胞的增殖进而影响睾丸精子的发生。     

FISH检测宫颈脱落细胞与宫颈组织中hTERC基因制片方法的研究

目的:探讨FISH实验中用直接涂片法、盐水制片法、TCT制片法、低渗滴片法制片法和宫颈切片组织取材方法对于FISH成功率的影响.方法:收集2008年3月至2009年3月青岛大学医学院附属医院妇科162例宫颈脱落细胞标本及2008年5月至2009年3月手术切除或活检的宫颈组织63例,用荧光原位杂交(FISH)方法检测hTERC基因.结果:直接涂片法、盐水制片法、生理盐水法、TCT制片法和石蜡包埋组织切片法hTERC基因杂交成功率分别为58.3%,65%,55%,87.1%,85.7%,TCT制片高于其它四组;低渗滴片法背景干净度、细胞形态、裸核数量满意度最高;TCT制片法细胞数量满意率最高;石蜡包埋组织切片法荧光信号满意率最高.结论:在检测hTERC基因的宫颈癌筛查中,TCT制片法明显优于其他方法,而在指导宫颈病变及宫颈癌的治疗中,石蜡包埋组织切片法的染色体破坏最小,实际意义更大.     

Smo 蛋白在肝癌和肝硬化中的表达及临床意义

目的:研究Smoothened(SMO)在肝癌和肝硬化中的表达及临床意义。方法:选取组织标本后,运用石蜡包埋,切片后,HE染色,构建组织芯片,免疫组织化学和原位杂交方法检测Smo蛋白在肝癌和肝硬化中的表达。结果:Smo蛋白在肝癌细胞浆、良性肝肿瘤组织细胞浆、肝硬化组织中强染色,在正常组织中无染色。并且在典型肝硬化中强染色,在中度肝硬化中弱阳性。结论:Smo蛋白表达与肝癌的发生有关,Smo基因的高表达可能激活某种机制而参与诱导肝癌的发生。可能是通过异常激活Sonic hedgchog信号通路,从而诱导肝癌的发生与发展。     

转录因子STAT5A、STAT5B在T淋巴母细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的 探索信号转导和转录激活因子STAT5A及STAT5B蛋白在T淋巴母细胞淋巴瘤(T-cell lymphoblastic lym-phoma,T-LBL)组织中的表达情况,分析其与患者疾病发生、发展及生存预后的相关性.方法 应用免疫组织化学染色检测确诊的104例T-LBL组织和40例反应性增生淋巴结组织(对照)中的...     

不同固定液对豚鼠免疫器官石蜡切片质量的影响

摘要 目的：比较不同固定液对SPF级豚鼠免疫器官的固定效果,为筛选适用于脾脏、淋巴结和骨髓的固定液提供参考。方法：将21只300～350 g雄性SPF级豚鼠随机分为7组,每组3只,摘取脾脏、肠系膜淋巴结、髂骨骨髓,各组分别使用4 %多聚甲醛溶液、10 %中性福尔马林溶液、Bouin''s溶液、Carnoy溶液、Davidson''s溶液、Zenker溶液、Helly溶液固定48 h。髂骨骨髓在固定前浸泡于EDTA脱钙液（pH7.2）中并置于37 ℃孵箱进行脱钙。通过制作石蜡切片并进行HE染色,从切片龟裂程度、细胞形态、染色效果等方面比较7种固定液对切片质量的影响。结果：10 %中性福尔马林溶液固定后的脾脏未出现龟裂,白髓和红髓着色清晰,淋巴细胞形态易辨。Carnoy溶液固定后的淋巴结生发中心明区暗区分明,红蓝染色适中,淋巴细胞形态清晰。4 %多聚甲醛溶液固定后的骨髓着色适中,清晰可辨。结论：常温条件下对组织固定48 h,经HE染色后想要达到理想的切片质量,建议使用10 %中性福尔马林溶液固定脾脏,使用Carnoy溶液固定淋巴结,首选4 %多聚甲醛溶液固定骨髓,如果考虑固定的同时完成脱钙建议选择Bouin''s溶液固定骨髓。     

慢性移植肾病中高内皮微静脉新生与树突状细胞的关系

目的探讨慢性移植肾病肾组织内树突状细胞(dendritic cell,DC)与高内皮微静脉(high endothelial venlues,HEVs)新生的相关性。方法收集20例经病理确诊为慢性移植肾病并行移植肾切除的肾组织标本,免疫组织化学检测HEVs及DC、CD5~+/CD19~+B淋巴细胞等各自标志物的免疫反应性;根据PAS、HE染色,用肾移植Banff1997标准进行病理评分。统计分析3类细胞和各病理变化指标在HEVs(+)组和HEVs(-)组间的差异。结果 20例样本中有3例呈HEVs标志物MECA-79免疫反应阳性,即HEVs(+),占15%;17例MECA-79免疫反应阴性,即HEVs(-),占85%。HEVs(+)组CD5+B淋巴细胞、CD19~+B淋巴细胞数量比HEVs(-)组相应阳性细胞多,但差异无显著性;标志物CD208阳性的DC数在HEVs(+)组较HEVs(-)组明显增多。移植肾Banff 1997病理评分显示,HEVs(+)组所有病变指标评分虽均高于HEVs(-)组,但亦无统计学意义。结论慢性移植肾病肾组织存在HEVs的新生,可能参与肾脏炎症微环境的形成;DC可能与HEVs的生成有关。