用平板透明圈法测定延胡索酸酶活力

将黄色短杆菌培养在含有延胡索酶的平板培养基上,该菌产生的延胡索酸酶能转化延胡索乱Ｌ－苹果酸。用６Ｎ硫酸处理平板后,其菌落周围便会出现清晰的透明圈。     

苎麻细菌脱胶试验

苎麻脱胶是麻纺工业的重要工序之一,历来采用高压碱煮法,该法耗碱耗汽量多,污染环境,为此从1972年下半年起,我们进行了苎麻细菌脱胶的研究。细菌脱胶主要是利用细菌分泌的各种酶,将果胶等胶质从苎麻中分解除去,代替生产上的碱煮。三年来,在毛主席无产阶级革命路线指引下,经过批林批孔和学习无产阶级专政的理论,提高了继续革     

苎麻细菌脱胶研究概况

脱胶是苎麻纺织工业中的一项重要工艺,目前基本上仍沿用化学脱胶法。化学脱胶法操作条件艰苦,且排出大量废水,易引起公害。用细菌脱胶的方法,目前仍处于研究阶段,本文试图概述国内外的研究情况,以说明这项研究的必要性和可能性。     

用管碟法测定碱性蛋白酶活力

参照抗生素效价生物测定法,用管碟法测定碱性蛋白酶活力,可大大提高菌种筛选的工作效率。待测样品在２％酪蛋白平板上的水解圈直径被效正后,从标准曲线上可查得相应的酶活。管碟法测得的酶活与Ｆｏｌｉｎ法测得的酶活相差一般小于２０００ｕ／ｍｌ。管碟法测定酶活时,操作要求认真仔细,操作误差可使一样品的水解圈直径相差２．９ｍｍ,但一般误差在０．２～０．３ｍｍ,相应酶活误差小于１０００ｕ／ｍｌ。     

苎麻酶法脱胶的研究进展*

苎麻酶脱胶法是一种高效能、优质量、无污染的脱胶方法,它是直接利用微生物发酵后期产生的胞外酶或酶制剂降解苎麻的胶质,使得苎麻纤维释放出来。到目前为止,国内外的科研人员在这方面已经进行了大量的研究,筛选了许多不同的脱胶菌,包括需氧菌和厌氧菌等用于苎麻的脱胶。相比化学脱胶,苎麻的酶脱胶具有提高精干麻的质量、大幅度降低环境污染等显的优点,是苎麻脱胶未来的主要发展方向,有着不可估量的前途。同时,随着酶脱胶技术在工业化生产中的推广应用,酶的使用量势必大幅度增加,从而将带动酶工业的发展。     

苎麻脱胶菌群RAMCD407中优势菌的分离、鉴定及脱胶能力分析

【目的】以苎麻生物脱胶菌群RAMCD407为研究材料,分析其菌种功能,初步阐明菌群的种间协作机理。【方法】利用4种不同的培养基,对该菌群中的微生物进行分离培养,通过16S r RNA基因序列比对鉴定,将分离得到的菌株进行果胶酶活力、木聚糖酶活力和胶质去除率的测定与筛选。筛选得到的菌株重新组合成为复合菌系JHY,并分析各菌种对JHY的功能影响。【结果】共获得25个菌株,这25个菌株分别属于芽孢杆菌属、假单胞菌属、肠杆菌属、鲁梅利杆菌属、鞘氨醇杆菌属和微小杆菌属。从中筛选出6株细菌,分别为Y1、2H3、Y2、JY31、2H2和2H1,组成复合菌系JHY。经测定,2H2在复合菌系JHY中发挥重要作用,能提高复合菌系的果胶酶活力、木聚糖酶活力和胶质去除率;JY31的存在抑制了其它菌株的生长,降低了复合菌系JHY的酶活力和胶质去除率。【结论】2H2为复合菌系JHY的重要菌种,去除JY31可提高复合菌系JHY的脱胶效率。     

DNA提取方法对苎麻脱胶菌群PCR-DGGE结果偏移的影响

为筛选和优化出较适宜的苎麻脱胶菌群DNA提取方法,本文分别以来自苎麻沤麻环境的6种纯培养菌等丰度混合物和苎麻自然沤麻菌群为材料,研究"溶菌酶-SDS"法、"超声波-溶菌酶-SDS"法、"蛋白酶K-SDS"法以及"冻融-蛋白酶K-SDS"法4种DNA提取方法对菌群16Sr DNA基因PCR-DGGE偏移结果的影响。结果表明,4种方法均能从2类材料中提取出了超过1600ng/μL的DNA,不同方法之间DNA产率略有差异,经过超声波处理或反复冻融处理的DNA有明显的降解,但4种方法提供的DNA模板均扩增出了450bp的16Sr DNA基因片段。4种DNA提取方法对DGGE结果有明显影响,且只有"冻融-蛋白酶K-SDS"法检测到了纯培养菌混合物中的全部6种细菌,4种方法获得的自然沤麻菌群的DGGE指纹图谱也明显不同,最多产生17条带("冻融-蛋白酶K-SDS"法),最少只有9条带("溶菌酶-SDS"法),增加超声波或冻融等物理处理可以使部分弱带变强。因此,组合应用物理、生物和化学等细胞裂解方法可以提供更有代表性的DNA,可减少PCR-DGGE结果的偏移。     

细菌平板菌落计数的改进方法

细菌平板菌落计数是微生物教学、科研及生产实践中最常用的活细菌总数测定方法。由于它是根据固体平板上一个菌落代表一个细菌的原理而设计的,因此深层菌落的存在、菌落的大小及疏密程度等因素均影响观察者观察计数。为便于观察.提高菌落的检出率,对常规平板菌落计数法做如下改进: 在倒平板之前,向装有150ml牛肉膏蛋白胨固体培养基的三角瓶内加入1/1000浓度的氧化还原染料     

用热变性温度法测定细菌DNA中GC含量

用热变性温度法测定细菌DNA中GC含量,是一种重复性高,仪器较易解决,操作较简便的方法。本文介绍此方法中所用仪器的改装,测定操作过程和应注意事项。     

小麦根圈细菌铁载体的检测

本文报道微生物铁载体定性与定量测定的方法,以及小麦根圈细菌铁载体的室内检测结果。２２株小麦根圈耐寒细菌和２株固氮菌在定性检测平板上产生铁载体,另有３株固氮菌不产。定量测定结果表明：３６株水溶性色素产生菌合成铁载体的量在０．７１５－０．１０６（Ａ／Ａｒ）之间,其中属于荧光假单胞菌群的２５个菌株铁载体产量的测定值（Ａ／Ａｒ）在０．１８４－０．１０６之间,达极高量水平。     

用热变性温度法测定五个细菌新种DNA的GC含量

利用林万明等建立的实验方法测定了五个细菌新种DNA的GC含量,同时对未见报道GC含量的两种细菌进行了测定,现将结果报告如下。     

固体平板磁泳分离细菌新方法的研究

氧化亚铁硫杆菌（Acidithiobacillus ferrooxidans）能够在胞内形成电子致密的磁性颗粒,它的这种特性使利用氧化亚铁硫杆菌合成生物纳米磁性材料成为了可能。本课题组为了筛选出合成磁性颗粒能力强的菌株,对原有的液体磁泳进行了改进,采用了新的固体平板磁泳方法来筛选纯化目的菌株。经过磁泳分离后,细菌中含磁性颗粒的细胞比例由原始菌群的30％上升到90％,胞内含有的磁颗粒数目也由1~2颗增加至2~5颗,筛选得到的细菌在人工磁场下会进行趋磁运动。实验结果表明,氧化亚铁硫杆菌具有较弱的趋磁性,在人工磁场下会进行趋磁运动,但仅在地磁场作用下不能定向运动,利用固体平板磁泳筛选纯化含有磁性颗粒的氧化亚铁硫杆菌的方法是切实可行的,磁泳分离技术的进一步完善和改进为传统的微生物菌种分离提供了新的途径,为研究纯氧化亚铁硫杆菌菌株胞内磁性颗粒的形成条件及机理提供了前提条件,也为今后从浸矿细菌中分离筛选更多的含有磁性颗粒的菌株打下基础。     

芽胞杆菌苎麻脱胶酶-甘露聚糖酶的纯化及酶学性质

研究了苎麻高效脱胶菌株Bacillus subtilisNo.16A甘露聚糖酶的产生条件,纯化过程以及酶学性质。其优化的培养基为魔芋胶30 g/L,蛋白胨9 g/L,酵母膏2 g/L,KH2PO45 g/L,MgSO4.7H2O 0.25 g/L。优化的培养条件为起始pH 8.0,装样量50 mL,接种量10 mL,发酵72 h。进一步通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤3步从Bacillus subtilisNo.16A发酵液中纯化了甘露聚糖酶。结果表明,该酶分子量约为38.5ku,最适作用pH为7.0,最适作用温度为60℃,在55℃以下、中性pH(6.0~8.0)范围内稳定,Ca2 、Mn2 和A l3 、Mg2 对该酶有激活作用,Cu2 、Zn2 有抑制作用。     

基于高通量测序的稀释平板计数细菌群落变化研究

【目的】明确平板计数法中不同稀释梯度对土壤细菌数量和组成的影响规律,比较稀释平板计数法和高通量测序研究土地利用方式变化下土壤细菌群落的差异。【方法】针对不同土地利用方式下的4种土壤(次生林、健康蕉园、发病蕉园和水稻土),设置5个土壤悬液10^-1-10^-5稀释梯度开展平板计数,获得平板上可培养细菌富集物并提取总DNA;同时直接提取原位土壤微生物总DNA,高通量测序细菌富集物DNA和土壤总DNA中的16S rRNA基因,研究不同土壤悬液稀释梯度下的可培养细菌群落和背景土壤细菌多样性,明确可培养细菌占土壤总细菌的比例以及多样性差异。【结果】次生林垦殖为蕉园土壤后土壤呼吸增幅最高,细菌数量降幅最高,稀释平板计数与实时荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR)结果一致,但其他土地利用方式变化的稀释平板计数与实时荧光定量细菌数量的结果并不完全一致。连续稀释显著降低了可培养细菌多样性。与原位土壤总细菌相比,土壤可培养细菌群落Chao 1指数降幅高达86%-98%。与土壤悬液稀释10倍(10^-1...     

用细菌生产酒精的优缺点

酒精可添加在汽油中一起使用,因为它具有改善汽油的抗爆性、减少汽车排气中的CO等作用。由于石油价格上涨,人们对这种添加物非常重视。     

双加氧酶活力对细菌降解菲的指示作用

在液体培养基中选用两种石油降解细菌进行菲降解实验,研究了菲降解率和双加氧酶活力的变化。结果表明,菲降解率受其浓度的影响,当菲浓度为100mg·L-1时,其降解率为最高。而菲浓度高于100mg·L-1时,其降解率下降。实验发现在菲浓度为50～250mg·L-1条件下,细菌的双加氧酶活力与其菲的降解率存在较好的相关性,对细菌降解菲具有指示作用,可将双加氧酶活力作为菲降解率变化的评价指标。