苦荞胰蛋白酶抑制剂的纯化及特性研究

利用固相胰蛋白酶亲和色谱及离子交换色谱,从苦荞种子中分离纯化了三个具有抑制胰蛋白酶活力的组份(BTI-Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ)。经聚丙稀酰胺凝胶等电聚焦测定,三种抑制剂的等电点为6.87,6.7,5.14。根据Sephadex G-75凝胶过滤,SDS-PAGE测定,以及由当量抑制比值和氨基酸组份的推算,它们的分子量范围分别为5200-5700(Ⅰ),5500—6000(Ⅱ),5000—5600(III)。三者对胰蛋白酶的抑制常数分别为2.12×10~(-8),4.78×10~(-9),1.22×10~(-8)。氨基酸分析结果表明,它们均含有很高的极性氨基酸。在酸性条件下,它们均具有很高的热稳定性。化学修饰的结果表明,它们活性中心的氨基酸残基为Lys。     

用高效液相色谱法测二酪氨酸、磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸

<正> 4’—二甲氨基偶氮苯—4磺酰氯化物,是一个发色剂,通常用它测氨基酸在P级。本文研究了单柱反相高效液相色谱系统,该系统描述了几种变形氨基酸的丹磺酰氯衍生物的分离和分析。高衍生的G_8(22%和31%)柱来自phenomenex公司,在pH8.1时分离二酪氨酸;磷酸代氨基酸(磷酸丝氨酸,磷酸苏氨酸和磷酸酪氨酸)和正常存在     

用DANS反应-聚酰胺薄膜层析-荧光方法对小鼠尾壳核γ-氨基丁酸和牛磺酸的超微量测定

本工作将DANS反应和微量薄膜层析技术与荧光测量加以修改后联用,并注意了组织样品的去蛋白和DANS-牛磺酸洗脱剂的改进,获得了满意的定量测定氨基酸的结果。GABA、牛磺酸的浓度(GABA:0—60×10~(-12)克分子;牛磺酸:0—300×10~(-12)克分子)与其相应的DANS衍生物的荧光强度成线性关系。回收率分别为95—113％和82—94％。灵敏度比原有荧光方法提高了近100倍(10~(-12)克分子数量级)。用此法测得小鼠尾壳核中的GABA和牛磺酸分别为1.26±0.06和15.5±1.0微克分子/克湿重,组织样品只需0.5毫克或更少些。这为测定微量神经组织中的自由氨基酸提供了一种简便的超微量方法.     

单扫描极谱法快速测定胱氨酸

用单扫描极谱法研究了胱氨酸在乙醇胺-HCl介质中产生的吸附还原波,并应用该方法测定了头发样品及胱氨酸片剂中胱氨酸的含量。结果表明,极谱波高与8.2×10~(-7)～1.2×10~(-5) mol/L的胱氨酸呈线性关系,检测限为3.5×10~(-7)mol/L,且多种氨基酸在较高浓度共存的情况下不干扰胱氨酸的测定。     

非水相中脂肪酶催化甘油三酯转酯反应动力学

本文研究了脂肪酶在己烷中催化甘油三丁酸酯与硬脂酸之间的转酯反应动力学。转酯反应分为二个连续的反应步骤:由酯生成的酰基酶复合物的水解和由酸生成的酰基酶复合物的醇解,整个反应符合乒乓反应机制,动力学参数为:K_m(酯)=3.2×10~(-2)mol/L,K_m(酸)=6.9×10~(-2)mol/L,V_m=1.7×10~(-4)mol/L·min。     

印楝种核提取物AZAL-S对致倦库蚊幼虫的毒性和生长调节活性(英文)

在实验室条件下,测试了印楝种核提取物AZAL-S对致倦库蚊幼虫的毒力,其LC_(50)为0.78×10~(-6)。分别用0.3×10~(-6)和0.5×10~(-6)的AZAL-S处理致倦库蚊4龄幼虫120小时,死亡率为46.2％和67.5％,并出现各种畸形。用0.4×10~(-6)—1.0×10~(-6)的AZAL-S处理致倦库蚊1龄幼虫7天,发现其幼虫期显著延长。AZAL-S对蚊幼虫的生长调节作用与某些昆虫生长调节剂对蚊幼虫的作用相似。     

O-丹磺酰基小檗胺与钙调蛋白的相互作用

粉防己碱和小檗胺等一些双苄基异喹啉化合物是一类新型的钙调蛋白(CaM)拮抗剂。为了研究这些化合物同CaM的相互作用,我们用化学修饰的方法将疏水性荧光探针丹磺酰基团接到小檗胺上生成O-丹磺酰小檗胺(DB)。发现这种新的化合物不仅具有荧光特性,而且也是一种较强的CaM拮抗剂。DB抑制依赖CaM的红细胞膜Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase的活性,其IC_(50)值(半抑制数)为2.4×10~(-6)mol/L。     

麻黄碱对兔主动脉和心房作用机制的研究

麻黄碱(E,×10~(-4)—3.3×10~(-3)M)和去甲肾上腺素(NA,6×10~(-8)—6×10~(-5)M)均能引起离体兔主动脉条浓度依赖性收缩。可卡因能明显地增强 NA 的作用,但明显地减弱麻黄碱的作用,用可卡因后麻黄碱的作用为用可卡因前的10—92.6%。利血平处理后,麻黄碱和 NA的作用都明显增强,但利血平对前者的增强作用比后者更甚。在利血平处理及未处理肌条上,麻黄碱的作用均可被酚妥拉明阻断。麻黄碱(3.3×10~(-6)—3.3×10~(-5)M)和异丙肾上腺素(ISP,10~(-9)—10~(-5)M)均能引起离体兔心房率的增加。可卡因明显地减弱麻黄碱的这一作用,即为对照组的8.8—29.1%,但不影响 ISP 的作用。利血平处理后,麻黄碱对兔心房的作用也明显减弱,为对照纽的15.4—28.4%;而 ISP 作用则略增加。3×10~(-4)麻黄碱可明显增加[3~H]NA 从兔主动脉条的流出量,此作用在给药后5min内即开始,可持续30 min 以上。上述结果提示,对于兔主动脉和心房,麻黄碱兼具直接作用于效应器细胞和通过释放末梢中 NA 的间接作用;直接作用在主动脉占优势,间接作用在心房占优势。     

新疆伊犁五个少数民族的近亲结婚

1983年4月至1984年5月,对新疆伊犁哈萨克自治州五个民族的近亲结婚情况进行了调查。调查的婚姻数为维吾尔2553起,哈萨克1079起,回1235起,锡伯1222起,蒙古446起。近亲结婚率与平均近交系数分别为:维吾尔——8.23％与 46.74×10~(-4),回——8.10％与45.07×10~(-4),锡伯——4.66％与24.93×10~(-4),哈萨克——2.87％与11.31×10~(-4)。蒙古——0.45％与 2.80×10~(-4)。解放以来,维吾尔族与回族的近亲结婚率有上升趋势,而锡伯族的则有下降趋势。各族近亲结婚中大部分为亲表亲结婚,但堂亲结婚在维吾尔族的近亲结婚中竟占26.18％,在回族中也占16.00％。1303名近亲结婚子女中的七岁前死亡率(12.89％)及先天性缺陷与遗传性疾病发生率(2.99％)显著高于6370名非近亲结婚子女的相应值(7.65％及0.38％)。     

荧光光谱法研究稀土离子与钙调素的作用

本文研究了稀土离子与钙调素(CaM)的反应.使用丹磺酰氯(Dansyl-cl)作为标记物,通过对丹磺酰基Cam(D-Cam)荧光光谱的研究可了解Cam构象之变化.本文得到了在单个稀土离子存在时D-Cam之荧光光谱,实验结果得出,在所有情况下荧光谱之峰值均产生了兰移,不仅兰移Δλ由15.7至40.7nm,而且峰的强度也由1.22到3.33倍增加不等(100μMNd~(3+)除外).作原子序数对Δλ的图时,可知有两峰出现,相应于Nd~(3+)(4f~(3+))及比H_0~(3+)(4f(7+3))的位置.由以上可知,当存在有镧系离子时,发生了Cam构象之变化及相应的反应.     

氨基酸的气相色谱(续三)

<正> 4.6.为GC选择酰基氨基酸酯(参看第7.2及7.5节)。对于GC分析来说,特殊衍生物的选定决定于一些相关的因素:诸如制备简单,高产率,稳定性以及衍生物的挥发性等。还要选择适于它们分辨力的层析柱和层析条件。有几个小组比较了几类酰基化氨基酸及其酯的挥发性。测定了一些N—TFA—氨基酸的融点,更适当的升华温度以及蒸汽压;在0.02—0.06Torr(毫米汞柱)真空下,几种氨基酸在70—80℃之间     

阿魏酸在缺氧条件下促进人脐静脉内皮细胞血管形成的实验研究

目的:研究阿魏酸(ferulic acid,FA)在缺氧条件下对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移和管腔样结构形成的影响。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,在缺氧实验条件下,细胞被分为7组,即1个对照组和6个实验组。对照组采用1%酒精处理,实验组用不同浓度(1×10~(-8)、1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)、1×10~(-4)及1×10~(-3) mol/L)的阿魏酸处理。分别采用MTS法、划痕法、Matrigel法分析不同浓度阿魏酸处理对人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移和管腔样结构形成的影响。结果:缺氧条件下,浓度为1×10~(-6)~1×10~(-4)mol/L的阿魏酸处理能明显促进HUVECs的增殖(P0.05),以1×10~(-5) mol/L处理的效果最好(P0.01);与对照组相比,1×10~(-6)mol/L(P0.05)、1×10~(-5) mol/L(P0.01)及1×10~(-4) mol/L(P0.01)阿魏酸处理均能明显促进HUVECs横向迁移,以1×10~(-5) mol/L处理迁移的细胞数量最多;1×10~(-8)~1×10~(-4) mol/L阿魏酸处理能不同程度地促进HUVECs管腔样结构的形成,以1×10~(-5) mol/L处理形成管腔样结构的数量最多(P0.01)。结论:阿魏酸在缺氧条件下能促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移和管腔样结构形成。     

离体绿豆胚轴在吸胀过程中蛋白质合成与ATP水平及能荷值的关系

绿豆胚轴吸胀过程中 ATP 水平及能荷(E.C.)值的上升伴随着蛋白质合成速率的增加。用5×10~(-5)M 和5×10~(-4)DNP 处理后,组织中 ATP 水平及能荷值降低,同时也抑制了~3H-亮氨酸参入 TCA 不溶性蛋白质的量。并观察到 CCCP(1×10~(-3)M 和1×10~(-4)M)有类似作用。以0.2μg/ml 亚胺环己酮处理,蛋白质合成下降69%,ATP 和 E.C.都略有增加;用1μg/ml 和5μg/ml 处理,蛋白质合成接近停止(占总合成量的6—7%),ATP 水平稍有下降,E.C.值仍保持不变。用每毫升含1μg 和10μg 放线菌素 D 处理,使蛋白质合成分别降低23%和48%,而 ATP 水平及 E.C.值不受任何影响。这些结果表明绿豆胚轴吸胀初期,其蛋白质合成受 ATP 水平及能荷值的调节,而腺苷酸库和能荷变化都不受放线菌素 D 的影响。     

核糖核酸一级结构微量分析方法的研究——Ⅳ.寡核糖核苷酸3′-端的显色标记微量测定法

本文报告用甲基橙为原料合成了甲基橙的两种衍生物:4-二甲氨基偶氮苯-4'-磺酰-甘氨酰肼(DABS-Gly-NHNH_2,Ⅰ)和4-二甲氨基偶氮苯-4'-磺酰肼(DABS-NHNH_2,Ⅱ),并用(Ⅰ)成功地标记了高碘酸氧化的核苷二醛。标记产物在聚酰胺薄板上分离得很好,其灵敏度达到10~(-9)～10~(-10)克分子,比紫外吸收法灵敏数十倍。我们用试剂(Ⅰ)标记测定了四种不同的寡核糖核苷酸的3'-端,用量为0.08～0.12A_(260)。     

多巴胺类似物抑制二氢蝶啶还原酶的研究

多巴胺类似物对二氢蝶啶还原酶有明显的非竞争性抑制作用(Ki或I_(50)值为10~(-5)—10~(-6)mol/L)。其中阿朴吗啡是最强的抑制剂之一(Ki或I~(50)=1-2×10~(-6)mol/L)。由于酪氨酸羟化酶和二氢蝶啶还原酶包含于同一酶促反应过程中,且限制了多巴胺合成的决定速度的那一步。这些结果可能提示出被多巴胺抑制的酪氨酸羟化作用包含着对这二种酶的抑制作用。     

UPLC-MS法测定羊耳菊中6种成分的含量

建立了UPLC-MS/MS同时测定羊耳菊药材中东莨菪苷、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸6个成分含量的方法。采用Waters BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,用0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液作流动相,梯度洗脱,电喷雾电离源(ESI),以多反应离子监测(MRM)检测。6种成分分别在0.058~42.000、0.178~129.630、0.087~63.400、0.288~69.930、0.172~125.500、0.184~134.130μg/m L浓度范围线性良好,平均回收率为97.84%~105.67%(RSD1%)。稳定性,重复性及精密度良好,本方法能简便、快捷、有效的测定羊耳菊药材中多种成分含量,为羊耳菊药材的全面质量控制提供了新的方法。     

粉防已碱与钙调蛋白相互作用的荧光光谱研究

粉防已碱Tet是一种新的钙调蛋白(CaM)拮抗剂,它抑制CaM活化的Ca~(2 )—Mg~(2 )—ATP c。利用丹磺酰钙调蛋白(D—CaM)可方便地鉴测Tet与CaM的相互作用,直接证明了在CaM与Tet之间生成复合物CaM—Tet 我们制备的D—CaM,每个蛋白分子含1.3个丹磺酰基团,活化红细胞膜Ca~(2 )—Mg~(2 )—ATP c的生物活性与天然CaM基本相同。 当Ca~(2 )与D—CaM结合时,丹磺酰基团环境疏水性增加,该荧光团产生较高的量子产率(增加1.6倍),最大发射兰移(从512移兰至495nm)。存在Ca~(2 )时,Tet使D—CaM的荧光强度进一步增加,谱线继续兰移,表明Ca~(2 )及Tet诱导蛋白构象变化,改变了丹磺酰基团的微环境。 荧光滴定实验证明CaM与Tet结合的解离常数为1.8μM,两者的结合是绝对依赖Ca~(2 )的。 药物Tet与CaM的结合可增强结合在CaM上的荧光探剂NPN的荧光,提示CaM不同疏水结合位之间存在变构相互作用。     

乙酸苯汞对棉花气孔开放、蒸騰作用和光合作用的影响

1.以1×10~(-4)、3.3×10~(-4)和10×10~(-4)M三种浓度的乙酸苯汞(PMA)分别喷洒在棉叶上,1小时后即可使气孔接近完全关闭,这种影响3、5日后消失。 2.用PMA处理的叶片,蒸腾作用显著降低。浓度越高,影响越大;而作用的时间也越长。10×10~(-4)MPMA处理的叶子,19天以后还比对照部位的蒸腾作用降低约10％。 3.3.3×10~(-4)M PMA对光合作用的影响不太明显。浓度为10×10~(-4)M时,初期的影响也不大;但3日后使光合作用降低1/3,叶缘素的含量也下降;甚至处理后的第10天,处理部位的光合作用强度仍然显著地比对照低。 4.对PMA作用的性质、使用的适宜浓度以及存在的问题提出了初步的讨论。     

中国禽源新城疫病毒(NDV)流行株F和HN基因的遗传演化和变异频率

【目的】新城疫(ND)是中国流行最严重的疫病之一,对家禽业可造成巨大的经济损失,疫苗防控是控制ND的重要措施。新城疫病毒(NDV)流行株的遗传演化一直是研究NDV的焦点。本文利用分子信息学手段,通过比较近20年间NDV流行株不同基因型F和HN基因的分子特征和遗传变异频率,解析免疫压力下NDV的演化规律。【方法】利用Lasergene 7.1和MEGA5.1软件,选取本实验室89株NDV分离株,结合从Gen Bank下载的364株NDV流行株以及15株NDV经典毒株的基因序列,对其进行系统发育、分子特征和替代频率分析。【结果】系统发育表明,NDV已经演化为15个基因型。一致性比较显示,NDV流行株相同基因型之间核苷酸(氨基酸)高度同源,而不同基因型之间差异较大且存在明显的氨基酸变异积累。NDV基因型的分布与时间、地域密切相关,VII d亚型为中国NDV优势流行株。为评估NDV变异的频率,以Go/GD/QY/1997株(中国较早发生的基因VII亚型)为参照,1997-2015年间NDV的F/HN基因的年平均核苷酸(氨基酸)替代率为2.31×10~(-3)(2.26×10~(-3))/3.37×10~(-3)(2.35×10~(-3))。其中,1997-2001年(未使用基因VII型疫苗)F/HN基因核苷酸年平均替代率为4.72×10~(-3)/8.28×10~(-3);2002-2015年(疫苗使用后)为1.6×10~(-3)/1.84×10~(-3),显示出基因VII型疫苗在控制NDV变异速度方面具有明显的效果。【结论】生物信息学分析证实:研制出与NDV流行毒株相匹配的新型疫苗是控制当前NDV变异的关键。     

忽地笑多糖分子量及单糖组成研究

研究忽地笑多糖PBL1、PBL2和PBL3的分子量和单糖组成。分别采用凝胶排阻色谱-多角度激光光散射-示差检测法(GPC-MALLS-RI)和高效液相法(HPLC)测定忽地笑多糖的分子量及单糖组成。PBL1的重均分子量(Mw)为3.642×10~3g/mol;PBL2的Mw为1.206×10~4g/mol;PBL3的Mw为3.992×10~5g/mol。多糖PBL1由D-Man、D-Glu和D-Gal组成,摩尔比为1∶0.34∶0.036;多糖PBL2由D-Man、Rha、D-Gal UA、D-Glu、D-Gal和Ara组成,摩尔比为1∶0.29∶0.78∶21.89∶2.69∶0.63;多糖PBL3由D-Man、Rha、D-Glu UA、D-Gal UA、D-Glu、D-Gal和Ara组成,摩尔比为1∶2.63∶0.47∶1.63∶0.83∶6.92∶1.34。忽地笑多糖PBL1、PBL2和PBL3均主要由D-Man、D-Glu和D-Gal组成,它们的分子量大小差异明显。