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本文利用ESR技术研究了心肌线粒体酶修饰下的脂质过氧化和脂类自由基,以及(-)-EGCG的抑制作用。结果表明:4-POBN能捕集lipoxygengse诱发心肌线粒体产生的自由基,得到6条线谱的脂类自由基和4条线谱捕集物,(-)-EGCG对该体系中使用的1ipoxyenase活性无影响,对所产生的自由基有明显的清除作用,并呈量效关系。对脂质过氧化的抑制作用,在本试验浓度范围内随浓度增加变化不大,最大抑制率约20%。 相似文献
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钙过负荷和丹参酮对线粒体脂质过氧化的影响 总被引:17,自引:0,他引:17
用ESR自旋捕集技术捕捉到Fe2+启动的心肌线粒体膜脂质过氧化过程中产生的脂类自由基L·(aN=15.6G,aH=2.97G)。钙过负荷时,钙离子使线粒体产生的脂类自由基增加,当钙浓度为30μmol/L·mgPr时,产生的脂类自由基约增加32%。丹参酮可清除Fe3+启动的线粒体膜脂质过氧化过程中产生的脂类自由基。当丹参酮浓度为0.8mg/mgPr时,清除率达到70%左右。钙过负荷时丹参酮仍能有效清除脂类自由基。另外,还发展了用自旋探针CTPO测量线粒体氧消耗的方法,检测氧消耗所需样品量比Clark电极少几十倍。用此方法测量小鼠心肌线粒体不同状态的氧消耗和呼吸控制率,证明一定浓度的Ca2+和Fe2+影响线粒体的呼吸功能. 相似文献
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化学修饰具有底物谷胱甘肽(GSH)结合部位的单克隆抗体(4A4),使其结合部位上的丝氨酸(Ser)转变成谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的催化基团硒代半胱氨酸(Se-Cys),因而产生高活力的含硒抗体酶(Se-abzyme).突变的4A4(m4A4)的GPX活力达到了天然酶活力的19%,并对m4A4的酶学性质和动力学性质进行了研究;硒代谷胱甘肽(GSeH)连到4A4结合部位,其GPX活力由3.86U/μmol提高到598.9U/μmol用黄嘌呤氧化酶/次黄嘌呤为中心的心肌线粒体自由基损伤模型证明Se-abzyme(m4A4)可减轻活性氧对线粒体的损伤。 相似文献
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羟自由基对心肌线粒体膜的影响及硒的效应 总被引:6,自引:0,他引:6
由H2O2和FeSO4体系产生的羟自由基(OH·)作用于大鼠心肌线粒体后,其膜脂双层内产生了脂类自由基。在观测时间内,其脂类自由基与自旋捕捉剂形成的自旋加合物的电子自旋共振(ESR)信号强度随着孵育时间的延长而加强。一定浓度的硒代蛋氨酸(Se—Met)或Na2SeO3可明显清除OH·并抑制脂类自由基的产生。在OH·的影响下,荧光探针DPH在心肌线体膜脂中的荧光寿命和膜脂流动性的测试结果发生了明显变化。与此同时,心肌线粒体膜的能量转换过程(氧化磷酸化效率和呼吸控制率)也发生了显著的改变。1.0μmol/L的Se—Met或2.3μmol/L的Na2SeO3可明显拮抗OH·的上述影响。前者的作用更为显著。 相似文献
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GPX—abzyme对受XO/HX系统损伤的心肌线粒体的保护作用 总被引:1,自引:0,他引:1
探讨了研制的具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含硒抗体酶(GPX-abzyme)对于受损心肌线粒体的保护作用。利用牛的心肌线粒体为实验材料,通过线粒体的膨胀度、脂质过氧化物含量、CCO活力变化及电镜观察等几个方面证明GPX-abzyme能抵抗XO/HX系统产生的自由基的损伤作用,ESR研究也表明GPX-abzyme能明显降低XO/HX损伤系统中的自由基含量。 相似文献
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本工作观察了体外环境中不同水平的维生素E和微量元素Se对人肝癌细胞株(SMMC-7721)生长、分化和其癌基因(N-ras、c-myc)表达水平的影响。实验结果表明:高水平维生素E(2.4、9.2、24.0nmol/L)和Se(0.15、0.30、0.60nmol/L)对肝癌细胞的集落形成率具有明显的抑制作用;生化分析显示高水平维生素E和微量元素Se均可明显抑制环境中脂质过氧化的水平,Se对癌细胞甲胎蛋白的分泌有明显的抑制作用,而维生素E作用不明显。细胞原位杂交发现维生素E浓度为2.4和9.2nmo1/L时对细胞癌基因N-ras的表达具有明显抑制作用;Se浓度为0.15和0.30nmol/L时对癌基因c-myc的表达明显抑制。实验还观察了维生素E和Se之间的叠加效应,结果显示除对环境中脂质过氧化的抑制作用具有叠加效果外,对其他指标没有明显作用。 相似文献
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南方丘陵山区农业生态环境的改善──以五华县新一村为例钟继洪,唐淑英,谭军(广东省土壤研究所,广州510650)ImprovemcntofAgro-ecologicalEnvironmentinHIillyandMountainousArcasofSouthChina:TakingXinyiVillageofWuhuaCountyasanExample¥.ZhongJihong,TangShuying,TanJun(GuangdongInsti-tuteofSoilScience,Guangzhou510650).ChineseJournalofEcology,1993,12(4):52-54.XinyivillagerepresentsatypicalhillyandmountainousareainGuangdongprovince.Asaresultofpro-longedextensiveexploitationofnaturalresources,itsagro-ecologicalenvironmentwasworsened.Throughharnessingthelandresourcesoft 相似文献
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硒拮抗超氧阴离子导致的心肌线粒体膜损伤 总被引:6,自引:0,他引:6
由黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶体系产生的超氧阴离子作用于心肌线粒体后,其膜脂双层内产生了脂类自由基。在一定时间内,脂类自由基与自旋捕捉剂形成的加合物的ESR信号强度随着孵育时间的增加而加强。1.0μmol/L硒代蛋氨酸(Se-Met)或2.3μmol/LmNa2SeO3可显著清除并抑制脂类自由基的产生。在的影响下,荧光探针DPH在膜脂双层中的荧光寿合和膜脂流动性发生了明显改变。一定浓度的Se-Met或Na2SeO3可明显拮抗的上述影响,前者的作用更为显著。 相似文献
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在含有较高浓度底物反式肉桂酸(trans-cinnamic acid,CA)和氨反应介质中,研究了β-环糊精(β-CD)对红醇母苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase,PAL,EC4.3.1.5)催化反应的影响。加入适量β-CD可以克服高浓度CA对PAL活性的抑制作用,显著增加产物L-苯丙氨酸(L-phe)的产量,β-CD最适用量随CA浓度升高而增加,其摩尔数量约为 相似文献
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探讨了研制的具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含硒抗体酶(GPX-abzyme)对于受损心肌线粒体的保护作用,利用牛的心肌线粒体为实验材料,通过线粒体的膨胀度、脂质过氧化物含量、CCO活力变化及电镜观察等几个方面证明GPX-abzyme能抵抗XO/HX系统产生的自由基的损伤作用,ESR研究也表明GPX-abzyme能明显降低XO/HX损伤系统中的自由基含量。 相似文献
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外源钙调素(CaM)对粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)细胞增殖的影响。实验结果表明外源CaM能明显抑制粟酒裂殖酵母细胞的增殖,其作用方式是延长了粟酒裂殖酵母细胞生长的延滞期,抗粟酒裂殖酵母CaM抗体,TFP及Phenyl-SepharoseCL-4B能降低CaM对细胞生长的抑制作用,而Ca^2+及Ca^2+螯合剂EGTA对CaM的抑制作用均无影响。以上结果提示,外 相似文献
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家蚕滞育生物钟蛋白质Ease A4的纯化及其分子结构分析 总被引:2,自引:0,他引:2
EaseA4是家蚕卵的一种滞育生物钟蛋白质.产下后2d的家蚕C108品种滞育性卵,经过丙酮脱脂、85℃热处理、硫酸铵沉淀和SephadexG-25凝胶过滤层析初步分离,进一步经过Sep-PakC18脱盐浓缩,HPLC(柱为YMC-PackProtein-RP)分离,通过SDS-PAGE和MALDIMS方法鉴定,纯化得到EaseA4蛋白质.从10g蚕卵最终得到了11.8μgEaseA4.EaseA4由从His到Tyr的155个氨基酸残基构成,蛋白质部分的分子量为16601.其22位氨基酸残基Asn处有一个Asn-X-Thr糖基化场所,并有糖基结合在该部位,糖基的分子量约为760.EaseA4的61位和150位的两个Cys氨基酸残基之间存在二硫键.糖基和二硫键的存在不仅有利于酶蛋白的分离,还可能与酶活性有关 相似文献
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本文发现线粒体H^+-ATPase复合体先用0.5ug/ml的DCCD(二环已基碳二亚胺预保温处理,再经12.5%(V/V)乙醇进一步保温处理,则乙醇可完全消除DCCD引起的H^+-ATPase的抑制效应。若H^+-ATPase用DCCD和乙醇同时预保温处理,则DCCD同样消失其抑制作用。用相同浓度的甲醇代替乙醇,则仅可部分的消除DCCD的抑制作用。用相同浓度的DMSO(二甲基亚砜)代替乙醇,则不 相似文献
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采用8-(6-氨己基)-氨基-5'-AMPSepharose亲和层析法和DEAE-Sepharose离子交换层析法从大熊猫心肌中分离纯化出了乳酸脱氢酶同工酶H4.纯化的大熊猫LDH-H4,比活为445U/mg蛋白,经SDS-PAGE,PAGE,等电聚焦电泳鉴定均为一条带,其亚基分子量为36000,等电点为5.45.经测定大熊猫LDH-H亚基N端被封闭,C端氨基酸残基经测定为Leu.氨基酸组成分析表明每个亚基含有5个Cys,9个Met. 相似文献
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大熊猫乳酸脱氢酶同工酶H4的分离纯化和某些性质的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用8-(6-氨己基)-氨基-5-AMPSepharose亲和层分析法和DEAE-Sepharose离子交换层析法从大熊猫心肌中分离纯化出乳酸脱氢酶同工酶H4,纯化的大熊猫LDH-H4,比活为445U/mg蛋白,经SDS-PAGE,APGE,等电聚焦电泳鉴定均为一条带,其亚基分了量为36000,等电点为5.45。经测定大熊猫LDH-H亚基N端被封闭,C端氨基酸残基经测定为Leu。氨基酸组成分析表明 相似文献
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本工作观察了体外环境中不同水平的维生素E和微量元素Se对人肝癌细胞株(SMMC-7721)生长,分经和其癌基因(N-ras,c-myc)表达水平的影响,实验结果表明:高水平维生素E(2.4、9.2、24:0nmol/L)和Se(0.15,0.30,0.60nmol/L)对肝癌细胞的集落形成率具有明显的抑制作用;生化分析显示高水平维生素E微量元素Se均可明显抑制环境中脂质过氧化的水平,Se对癌细胞甲 相似文献
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L—山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究 总被引:12,自引:2,他引:10
从5L罐发酵L-山梨糖的Gluconibacter oxydans SCB329和Bacillus thuringiensis SCB933混合菌株中差速离心收集SCB329菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经DEAE Cellulose 52和Q Sepharose FF柱层析分得到了L-册梨糖脱氢酶(SDH),它能将L-册梨糖脱氢氧化为L-册梨酮,SDS-PAGE电泳测 相似文献
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慈菇(Sagittaria safittifolia)α—半乳糖苷酶的纯化与性质 总被引:1,自引:0,他引:1
以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的12种糖苷酶,其中α-甘露糖苷酶,α-和β-半乳糖苷酶活力较高,经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-150分子筛层析,ConA-Sepharose4B亲和层析,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α-半乳糖苷酶,纯化酶的比活提高1072倍,活力回收15.6%,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE上均显示了1条蛋白质带,在 相似文献
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昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法 总被引:4,自引:0,他引:4
周先碗 《中国生物化学与分子生物学报》1999,15(2):269-273
谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferases,GST)是一类具有多种生理功能的同功酶.从蜡螟幼虫(Galeriamelonela)的提取液中分离纯化谷胱甘肽S-转移酶的基本方法如下:首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨,经10000g和100000g分级离心;取上清液通过QAE-SephadexA-25离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白;然后采用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶亲和层析(GSH-QT4),四溴酚酞二磺酸盐-琼脂糖凝胶亲和层析(BSP-QT4),铜离子-琼脂糖凝胶螯合层析(Cu2+-QT4)及PBE94-Sepharose(PBE94)聚焦层析等层析技术进一步分离纯化.将上述方法获得的色谱峰以CDNB和DCNB为底物检测生物活性.具有生物活性部分的蛋白质,通过SDS-PAGE测定其分子量.实验结果表明,采用GSH-QT4亲和层析法获得的活性峰,在SDS-PAGE图谱上呈现出两条带,分子量为24kD,24.5kD左右;Cu2+-QT6螯合层析法分离的活性峰,呈现出一条带,分子量为24kD左右;PBE94-聚焦层析法分离获得三个活性峰:第一色谱峰,呈现出一条带,分子量为23kD左右 相似文献