介导巨噬细胞摄取氧化修饰极低密度脂蛋白的受体

用未标记氧化修饰极低密度脂蛋白（ｏｘ－ＶＬＤＬ）、ｎ－ＶＬＤＬ、乙酰ＬＤＬ竞争１２５Ｉ－ｏｘ－ＶＬＤＬ与巨噬细胞的结合。在浓度为２００μｇ蛋白／ｍｌ时,分别抑制标记ｏｘ－ＶＬＤＬ结合量的７０～７８％、６０～７０％和２５～３５％。用未标记ｏｘ－ＶＬＤＬ竟争１２５Ｉ－ｎ－ＶＬＤＬ与巨噬细胞的结合,能抑制７７％。结果说明ｏｘ－ＶＬＤＬ主要通过ｎ－ＶＬＤＬ受体进入巨噬细胞。以ｏｘ－ＶＬＤＬ与ｏｘ－ＬＤＬ进行交叉竞争时,ｏｘ－ＶＬＤＬ与ｏｘ－ＬＤＬ自身可抑制标记ｏｘ－ＶＬＤＬ或ｏｘ－ＬＤＬ的７５～８２％,而ｏｘ－ＶＬＤＬ或ｏｘ－ＬＤＬ的交叉竞争仅３８～４０％。表明ｏｘ－ＶＬＤＬ与ｏｘ－ＬＤＬ有部分共同的构象与巨噬细胞的脂蛋白受体结合,但ｏｘ－ＶＬＤＬ不是经ｏｘ－ＬＤＬ受体被巨噬细胞摄取。     

氧化修饰极低密度脂蛋白增强其致动脉粥样硬化作用

研究了氧化修饰极低密度脂蛋白（ｏｘ－ＶＬＤＬ）对小白鼠腹腔巨噬细胞内脂质堆积作用及其机制。经Ｃｕ~（２＋）修饰后ＶＬＤＬ的电泳迁移率及脂质过氧化物含量均显著增加。ｏｘ－ＶＬＤＬ更易导致小鼠腹腔巨噬细胞内脂质堆积。以相同浓度（３００μｇＴＧ／ｍＬ）或不同浓度（２００─５００μｇＴＧ／ｍＬ）的ｏｘ－ＶＬＤＬ及正常ＶＬＤＬ（ｎ－ＶＬＤＬ）与巨噬细胞温育２４ｈ,前者使巨噬细胞内ＴＧ堆积均比后者显著（Ｐ＜０．０１）。同时,随ｏｘ－ＶＬＤＬ的脂质过氧化物含量（ＴＢＡＲＳ水平）增加,巨噬细胞内ＴＧ含量的百分率相应增加。以５０μｇ蛋白／ｍＬ的ｎ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＬＤＬ,ｎ－ＶＬＤＬ及ｏｘ－ＶＬＤＬ与巨噬细胞温育６０ｈ。细胞内ＣＥ堆积中氧化组均比正常组高（Ｐ＜０．０１）。巨噬细胞对~（１２５）Ｉ－ｎ－ＶＬＤＬ与~（１２５）Ｉ－ｏｘ－ＶＬＤＬ的结合、降曲线均有饱和趋势。两结合曲线无明显差异,但细胞对后者降解的量比前者多。结合的竞争实验表明,ｎ－ＶＬＤＬ能抑制大部分~（１２５）Ｉ－ｏｘ－ＶＬＤＬ与细胞结合,而Ａｃ－ＬＤＬ只能抑制小部分。结果表明ｏｘ－ＶＬＤＬ主要通过受体途径：大部分经过ｎ－ＶＬＤＬ受体,小部分经过清道夫受体被巨噬细胞摄     

巨噬细胞新型氧化低密度脂蛋白结合蛋白的研究

小鼠腹腔巨噬细胞（ＭＰＭ）膜上存在能结合氧化低密度脂蛋白（ｏｘ－ＬＤＬ）的Ａ类清道夫受体（ＳＲ－Ａ）,但用配体印迹技术研究制备ＭＰＭ膜蛋白,发现还存在一种新型ｏｘ－ＬＤＬ膜结合蛋白,其分子量低于ＳＲ－Ａ,为９２ｋＤ它不结合乙酰化低密度脂蛋白ａｃ－ＬＤＬ）,与配体的结合也不受还原剂的影响,但唾液酸酶处理则明显减弱其与ｏｘ－ＬＤＬ的结合,未标记ｏｘ－ＬＤＬ能竞争性抑制（＾１２５Ｉ）ｏｘ－ＬＤＬ与９２ｋ     

蛋白激酶C抑制剂对U937细胞清道夫受体功能的影响

为了解细胞内蛋白质磷酸化水平对清道夫受体功能的影响,用蛋白激酶Ｃ抑掉剂形孢菌素（ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ,ＳＴＡ）处理人Ｕ９３７细胞,分别测定对照组和处理组细胞对碘标记的氧化低密度脂蛋白（＾１２５Ｉ）ｏｘ－ＬＤＬ的降解,结合,细胞表面受体复合物的内移以及细胞内脂质蓄积的程度,并利用放射自显影方法观察药物对细胞表面受体表达的影响,结果发现ＳＴＡ可以促进细胞结合（＾１２５Ｉ）ｏｘ－ＬＤＬ增加细胞表面     

I型胶原对巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白的作用

为探讨胶原的存在对细胞摄取氧化低密度脂蛋白（ｏｘ－ＬＤＬ）的影响,本研究在体外制成Ｉ型胶原凝胶和巨噬细胞实验体系,ＬＤＬ经Ｃｕ＾２＋催化氧化,丙二醛（ＭＤＡ）及乙酰化修饰后,与胶原的结合能力明显增强,但４－羟基壬烯醛（ＨＮＥ）修饰的ＬＤＬ与胶原的结合能力反应不如天然ＬＤＬ。当小鼠腹腔巨噬细胞培养在胶原凝胶上时,其对ｏｘ－ＬＤＬ的摄取明显减少,这时大部分ｏｘ－ＬＤＬ为胶原凝胶所结合,如用细胞松弛素Ｄ     

Ⅰ型胶原对巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白的作用

为探讨胶原的存在对细胞摄取氧化低密度脂蛋白（ｏｘ－ＬＤＬ）的影响,本研究在体外制成Ⅰ型胶原凝胶和巨噬细胞实验体系。ＬＤＬ经Ｃｕ２＋催化氧化,丙二醛（ＭＤＡ）及乙酰化修饰后,与胶原的结合能力明显增强,但４－羟基壬烯醛（ＨＮＥ）修饰的ＬＤＬ与胶原的结合能力反而不如天然ＬＤＬ。当小鼠腹腔巨噬细胞培养在胶原凝胶上时,其对ｏｘ－ＬＤＬ的摄取明显减少,这时大部分ｏｘ－ＬＤＬ为胶原凝胶所结合。如用细胞松弛素Ｄ（细胞非特异性吞噬抑制剂）处理巨噬细胞,在无胶原存在时,可见细胞对ｏｘ－ＬＤＬ的降解明显减少;而有胶原时,细胞的降解量则无明显变化,其水平与无胶原时的细胞处理组相当。上述结果提示,Ⅰ型胶原的存在可能阻止了巨噬细胞通过非特异性吞噬途径摄取ｏｘ－ＬＤＬ。     

氧化HDL2在大肠肝窦状隙细胞内代谢

大鼠肝窦状隙细胞培养结果显示：氧化高密度脂蛋白２对异硫氰酸荧光素荧光标记ｏｘ－ＨＤＬ２的细胞结合有竞争抑制作用,而ＨＤＬ２则无。细胞内ＦＩＴＣ－ｏｘ－ＨＤＬ２的荧光强度和「＾３Ｈ『ＣＥ－ｏｘ－ＨＤＬ２的的４５．５％和ｒＨＤＬ２的６１．４％。内吞ＦＳ主要存在于三氯醋酸沉淀部分,而放射强度主要存在于ＴＣＡ上清液部分。     

氧化HDL_2在大鼠肝窦状隙细胞内代谢

大鼠肝窦状隙细胞培养结果显示：氧化高密度脂蛋白２（ｏｘ－ＨＤＬ２）对异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）荧光标记ｏｘ－ＨＤＬ２的细胞结合有竞争抑制作用,而ＨＤＬ２则无。细胞内吞ＦＩＴＣ－ｏｘ－ＨＤＬ２的荧光强度（ＦＳ）和［３Ｈ］ＣＥ－ｏｘ－ＨＤＬ２（ｒ－ｏｘ－ＨＤＬ２）的放射强度分别是内吞ＦＩＴＣ－ＨＤＬ２的４５．５％和ｒＨＤＬ２的６１．４％。内吞ＦＳ主要存在于三氯醋酸（ＴＣＡ）沉淀部分,而放射强度主要存在于ＴＣＡ上清液部分。细胞释放的ＦＳ和放射活性分别是内吞量的６７．７％和１０．９％,且主要存在于ＴＣＡ可沉淀部分。结果提示：（１）大鼠肝窦状隙细胞可能存在着ｏｘ－ＨＤＬ受体,该受体不同于ＨＤＬ受体。（２）ｏｘ－ＨＤＬ２在细胞内代谢方式与ＨＤＬ２相似,均没有经历溶酶体分解途径。在细胞内载脂蛋白与胆固醇酯（ＣＥ）组分经历一个解离过程。细胞截留大部分ＣＥ后,将载脂蛋白（Ａｐｏ）与剩余ＣＥ重组成脂蛋白并以逆向胞饮方式释放到胞外。（３）氧化修饰减弱ＨＤＬ２逆向转运胆固醇能力     

心肌缺血时腺苷对绵羊浦肯野纤维If电流的影响

目的和方法：用双微电极电压钳技术,观察腺苷（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ,Ａｄ）对绵羊心室浦肯野纤维起搏离子流Ｉｆ的影响。结果：在正常台氏液中加入１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ Ａｄ灌流１５ｍｉｎ和３０ｍｉｎ后,在－７０￣－１２０ｍＶ所有膜电位,Ｉｆ离子流幅值均降低（ｎ＝１２,Ｐ〈０．０５￣０．０１）,引起激活曲线向超极化方向移位,但Ｉｆ稳态激活时间无明显改变。“缺血”１５ｍｉｎ和３０ｍｉｎ后,在－７０￣－１２０ｍＶ     

天然及氧化修饰脂蛋白对人动脉平滑肌细胞原癌基因表达的影响

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ＡＳ）的形成过程中极其重要。我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上,观察了ＬＤＬ,ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,Ｈ－ｒａｓ原癌基因及Ｒｂ抗癌基因转录表达的影响。结果表明：（１）ＨＤＬ对ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,ｒａｓ基因表达无影响;（２）ＬＤＬ和ＶＬＤＬ有使这些基因表达增加的趋势;（３）ｏｘ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＶＬＤＬ和ｏｘ－ＨＤＬ具有使ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,和ｒａｓ基因表达显著增强的作用（Ｐ＜０．０１）,且其作用较相应的天然脂蛋白大（Ｐ＜０．０１）;（４）天然和氧化修饰型脂蛋白对Ｒｂ基因表达均无影响。据上述结果推测：ＬＤＬ,ＶＬＤＬ,ｏｘ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＶＬＤＬ和ｏｘ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与刺激ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ和ｒａｓ原癌基因表达增加有关。     

[B3—Lys]—胰岛素的研究：受体结合及生物活性

本文用＾１２５Ｉ－［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和＾１２５Ｉ－胰岛素研究了［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和胰岛素与人胎盘细胞膜胰岛素受体结合物性并进行了比较。实验结果表明［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＨＰＭ胰岛素受体结合能力比天然猪胰岛素高。由竞争取代曲线得到的［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和猪胰岛素的ＩＣ（５０）值分另为０．６５和１．１１ｎｍｏｌ／Ｌ。经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分别得出［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＨＰＭ胰岛素     

N42—A神经生长因子诱导PC12细胞分化的抑制作用

研究表明,缺乏神经生长因子（ＮＧＦ）的营养支持是Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓ等神经元退行性疾病发生发展的重要原因,而ＮＧＦ和／或ＮＧＦ受体的过度表达则与一些神经系统肿瘤的发生发展有着十分密切的因果关系。采用＾１２５Ｉ－ＮＧＦ受体特异结合实验作为ＮＧＦ受体活性物质筛选实验模型从中药牛膝中筛选出了能强烈地抑制＾１２５Ｉ－ＮＧＦ受体结合的活性成分Ｎ４２－Ａ（ＩＣ５０＝６．１８±３．４３,ｎ＝４）;细胞培养实验     

缓激肽对大鼠背根神经节分离神经元ATP激活电流的调制作用

在新鲜分离大鼠背根神经节（ＤＲＧ）的５６个细胞标本上,应用全细胞膜片箝技术进行记录。胞外加缓激肽（ＢＫ,１０＾－６￣１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ）引坊的ＤＲＧ细胞膜反应结果如下：（１）７１．４％的细胞为内向电流,其电流反应的幅值具有明显的浓度信赖性;（２）１２．５％的细胞为外向电流;（３）１６．１％的细胞未引起可检测的膜反应,单独给予ＡＴＰ（１０＾－６￣１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ）在大多数受栓细胞（５４／５６）     

动脉壁细胞氧化修饰极低密度脂蛋白

将正常极低密度脂蛋白（ｎ－ＶＬＤＬ）分别与动脉壁的三种主要细胞：巨噬细胞（Ｍφ）、内皮细胞（ＥＣ）、平滑肌细胞（ＳＭＣ）温育２４小时后,ＶＬＤＬ的ＴＢＡＴＳ值明显增高,琼脂糖电泳速度加快,溶血卵磷脂与卵磷脂（ＰＣ）的比值明显升高,载脂蛋白的Ｂ１００（ａｐｏＢ１００）发生降解,未见集中的降解区带,ａｐｏ遥相对含量在各组无明显变化,加入抗氧化剂２,６－叔丁基甲苯能抑制上述变化,这些结果表明：动脉壁的三     

天然及氧化修饰脂蛋白对人动脉平滑肌细胞原癌基因…

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ＡＳ）的形成过程中极其重要。我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上,观察了ＬＤＬ,ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣ ｓｉｓ,ｊｕｎ,Ｈ－ｒａｓ原癌基因及Ｒｂ抗癌基因转录表达的影响。结果表明：（１）ＨＤＬ对ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,ｒａｓ基因表达无影响;（２）ＬＤＬ和ＶＬＤＬ有使这些基因表达增加的趋势;（３）ｏｘ－ＬＤＬ,ｏｘ－Ｖ     

钙通道阻滞剂对肾上腺素能受体激动剂促血管平滑肌细胞增殖的抑制

本工作观察到１０＾－６－１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ去甲明上腺素（ＮＥ）用１０＾－７－１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ异丙基肾上腺素（ＩＳＯ）可明显促进离体培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的增殖和ＤＮＡ的合成,并呈剂量依赖效应,该效应可为相应的受体阻断剂ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ（１０＾－６ｍｏｌ／ｌ）和ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ（１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）所抑制;ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ（１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）和ｖｅｒａｐａｍｉ     

表达强毒pp38决定簇的马立克病病毒疫苗毒CVI988点突变株的构建和特性

用鸡马立克病病毒（ＭＤＶ）强毒ＧＡ株的３８ｋＤ磷蛋白（ｐｐ３８）基因克隆ＤＮＡ转染Ｉ型弱毒疫苗ＣＡＩ９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ株ＭＤＶ感染的鸡胚成纤维细胞,再用能识别Ｉ型强毒ｐｐ３８的单克隆抗体Ｈ１９做免疫荧光试验,筛选到能在ｐｐ３８基因上表达强毒株特异性抗原决定簇的定向点突变弱毒株ＣＶＩ／ｒｐｐ３８。用＾３５Ｓ－蛋氨酸标记的细胞裂解物做免疫沉淀反应表明,单抗Ｈ１９不能识别天然ＣＶＩ９８８株ＭＤＶ中的     

促肾上腺皮质激素释放激素放射免疫测定法的建立及其应用

用本室制备的兔抗羊促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ）多克隆抗体和￣（１２５）Ｉ标记的Ｔｙｒ°－ｒＣＲＨ建立了ＣＲＨ放射免疫测定法。并用该方法测定了人胎盘组织和大鼠脑及胸腺组织ＣＲＨ含量。所得抗体与ｒＣＲＨ的亲合常数Ｋａ＝５．３×１０￣９Ｌ／ｍｏｌ,与促肾上腺皮质激素、血管紧张素Ｉ、β－内啡肽、生长激素释放因子、血管活性肠肽、胆囊收缩素、加压素等１８种肽没有交叉反应。￣（１２５）Ｉ－ｒＣＲＨ的比放射性为４１６３ｋＢｑ／μｇ。建成的ＣＲＨ放射免疫测定法取代比率为２．２９,灵敏度为４０ｐｇ,ＥＤ＿（５０）约为６５０ｐｇ,百分精密度和百分准确度分别为３．８４％和１０．３６％。用该法所测人胎盘和大鼠组织ＣＲＨ含量的结果表明,分娩胎盘组织ＣＲＨ含量远高于妊娠６─７周者,约相当于后者的１５倍;大鼠组织ＣＲＨ含量以下丘脑最高,垂体次之,然后依次是海马、胸腺和大脑皮质;且下丘脑和垂体的ＣＲＨ含量雄鼠明显高于雌鼠。     

糖链结构不同的纤连蛋白与HT1080细胞结合研究

人血浆纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,Ｆｎ）与人胎盘纤连蛋白两者在肽链结构上基本相同,但人血浆Ｆｎ的Ｎ－糖链结构为二天线结构,而人胎盘Ｆｎ不仅Ｎ－糖链的数量增加,同时还含有多天线结构,分别用~（１２５）Ｉ标记这两种具有不同糖链结构的Ｆｎ,观察两者与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合的亲和性,结果发现,在４℃,人血浆Ｆｎ与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合为１２９ｎｇ／１０~５细胞,解离常数为２．８３×１０~（－８）ｍｏｌ／Ｌ,人胎盘Ｆｎ与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合为１３３ｎｇ／１０~６细胞,解离常数为２．６４×１０~（－８）ｍｏｌ／Ｌ．因而,人血浆Ｆｎ与人胎盘Ｆｎ上Ｎ－糖链的不同并未影响其与受体的结合．     

2,4—D和乙烯利对辣椒花柄离区DNA和蛋白合成的影响

乙烯利处理后０￣４ｈ,辣椒花柄离区ＤＮＡ和蛋白质合成显著增加;２５０ｍｇ·Ｌ＾－１乙烯利处理后３２ｈ辣椒落花率达１００％,２,４－Ｄ处理的离区ＤＮＡ合成量降低,处理后０￣４ｈ促进离区蛋白质合成,４￣２４ｈ蛋白质合成量逐渐降低,１０ｍｇ·Ｌ＾－１ ２,４－Ｄ处理可抑制落花。