NMR法研究天花粉蛋白TDK肽片段的溶液构象

用ＨＮＭＲ法测定ＴＤＫ肽在Ｈ２Ｏ（ＨＯＤＫ）,５０％六氟丙醇（ＦＰＤＫ）和２ｍｏｌ／ＬＧｕ．ＨＣｌ（ＧＵＤＫ）溶液构象。在ＨＯＤＫ和ＦＰＤＫ中,ＴＤＫ肽的两段序列Ａｓｐ０－Ｉｌｅ４,Ｓｅｒ９－Ｉｌｉ１７分别具有较稳定的α－螺旋含量;而ＧＵＤＫ的ＳＡＬＳ序列仍能检测到有序残存结构。并假设ＳＡＬＳ序列是肽链形成二级结构的原始核心。     

NMR法研天花粉蛋白T14肽片段的溶液构象

本文报道用ＨＮＭＲ法测定Ｔ１４肽在ＤＭＳＯ（ＭＳ１４）,Ｈ２Ｏ（ＨＯ１４）,５０％甲醇（ＭＥ１４）和５０％六氟异丙醇（ＦＰ１４）中的溶液构象。通过ＮＯＥ效应,偶合常数,Ｈ／Ｄ交换速率表征和定位二级结构和疏水域,计算两面角φ和螺旋形成几率。结果表明序列Ｓｅｒ９－Ｉｌｅ１７在ＨＯ１４中较为有序,存在强疏水作用,推测是类似螺旋样的亚稳结构;而在ＤＭＳＯ中序列ＳＡＬＳＫＱ存在形成α－螺旋结构的可能性,且六     

天花粉蛋白小结构域N端同源片段的溶液构象,T18肽的圆二色性…

应用圆二色性,内源荧光和疏水荧光探针法进一步研究Ｔ１８肽的溶液构象及其相互转化,发现Ｔ１８肽在水溶液中为β折叠结构,且在高浓度（〉１ｍｇ／ｍｌ）时形成疏水聚合物,Ｌｙｓ１５和Ｉｌｅ３－Ｉｌｅ４是形成β折叠疏水簇的关键因素,并讨论了蛋白质链和溶剂环境对肽段二级结构的调制作用。     

天花粉蛋白T18肽片段的溶液构象及T14、TDK和T18肽构象比较

用１ＨＮＭＲ法测定Ｔ１８肽在ＤＭＳＯ（ＭＳ１８）和５０％六氟异丙醇（ＦＰ１８）中的溶液构象．ＭＳ１８含有Ｉｌｅ３～Ｇｌｎ７和Ａｌａ１２～Ｇｌｎ１６两段β－折叠链;而ＦＰ１８则转变为α－螺旋结构。综合分析Ｔ１４,Ｔ１８和ＴＤＫ三个模型肽的结构性质和稳定性,比较肽链序列和溶剂作用,提出肽链局部优势结构的概念,并据此讨论天花粉蛋白小结构域折叠起始过程．     

NMR法研究天花粉蛋白T14肽片段的溶液构象

本文报道用１ＨＮＭＲ法测定Ｔ１４肽在ＤＭＳＯ（ＭＳ１４）,Ｈ２Ｏ（ＨＯ１４）,５０％甲醇（ＭＥ１４）和５０％六氟异丙醇（ＦＰ１４）中的溶液构象。通过ＮＯＥ效应,偶合常数,Ｈ／Ｄ交换速率表征和定位二级结构和疏水域,计算两面角φ和螺旋形成几率。结果表明序列Ｓｅｒ９～Ｔｌｅ１７在ＨＯ１４中较为有序,存在强流水作用。推测是类似螺旋样的亚稳结构;而在ＤＭＳＯ中序列ＳＡＬＳＫＱ存在形成α－螺旋结构的可能性,且六氟异丙醇（ＨＦＰ）促进α－螺旋的稳定性,并综合分析Ｈ２Ｏ,ＤＭＳＯ,ＭｅＯＨ和ＨＦＰ４种溶剂对Ｔ１４肽二级结构形成的作用。     

HMR法研究天花粉蛋白TDK肽片段的溶液构象

用１ＨＮＭＲ法测定ＴＤＫ肽在Ｈ２Ｏ（ＨＯＤＫ）,５０％六氟丙醇（ＦＰＤＫ）和２ｍｏｌ／ＬＧｕ·ＨＣｌ（ＧＵＤＫ）中的溶液构象。在ＨＯＤＫ和ＦＰＤＫ中,ＴＤＫ肽的两段序列Ａｓｐ０～Ｉｌｅ４,Ｓｅｒ９～Ｉｌｅ１７分别具有较稳定的α－螺旋含量;而ＧＵＤＫ的ＳＡＬＳ序列仍能检测到有序残存结构。并假设ＳＡＬＳ序列是肽链形成二级结构的原始核心。     

天花粉蛋白小结构域N端同源片段的溶液构象：T18肽的圆二色性和荧光研究

应用圆二色性,内源荧光和疏水荧光探针法进一步研究Ｔｌ８肽的溶液构象及其相互转化。发现Ｔ１８肽在水溶液中为β折叠结构,且在高浓度（＞１ｍｇ／ｍｌ）时形成疏水聚合物;Ｌｙｓ１５和Ｉｌｅ３－Ｉｌｅ４是形成β折叠疏水簇的关键因素。并讨论了蛋白质肽链和溶剂环境对肽段二级结构的调制作用。     

天花粉蛋白小结构域N端TCS182—200同源片段的构象研究

以天花粉蛋白小结构域Ｎ端ＴＣＳ１８２－２００同源片段序列为基础,设计Ｔ１４,Ｔ１８和ＴＤＫ３个模型肽。本文分析了模型肽的肽链柔性和侧链两亲性,预测二级结构形成势,并通过多肽固相合成和圆二色性研究模型肽的溶液二级结构,比较理论预测和实测结果。在水溶液中,Ｔ１８为β－折叠,ＴＤＫ含有一定量α－螺旋;而Ｔ１４基本上为无规卷曲,但在碱性条件下有类似螺肇的亚稳结构存在。     

大鼠TCF—a修饰16肽的溶液构象

已知大鼠ＴＧＦ－ａ的抗原部位于Ｃ环,且大鼠的ＴＧＦ－ａ（３４－４３）和ＴＧＦａ（４４－５０）均有较强的活性以转化正常细胞。为了提示其结构与功能关系,合成了大鼠ＴＧＦ－ａ修饰１６肽。在前文用二维核磁共振技术归属质子谱并验证其一级结构的基础上,本文测定了不同混合时间的二维ＮＯＥＳＹ谱。根据所得的数据原始斜率法求出距离约束。通过约束分子动力学计算定出该分子溶液构象。其中还用ＤＱＦ－ＣＯＳＹ的数据求出二面     

大鼠TGF－α修饰16肽的溶液构象

已知大鼠Ｔ０Ｆ－α的抗原部位干Ｃ环,且大鼠的ＴＧＦ—α（３４－４３）和ＴＧＦ－α（４４－５０）均有较强的活性以转化正常细胞。为了揭示其结构与功能关系,合成了大鼠ＴＧＦ－α修饰１６肽。在前文用二维核磁共振技术归属质子谱并验证其一级结构的基础上,本文测定了不同混合时间的二维ＮＯＥＳＹ谱。根据所得的数据因原始斜率法求出距离约束。通过约束分子动力学计算定出该分子的溶液构象。其中还用ＤＱＦ－ＣＯＳＹ的数据求出二面角作为决定溶液构象的参考。     

天花粉蛋白诱发人体免疫抑制中单核细胞和T细胞的相互作用

本文研究天花粉蛋白诱发人体免疫抑制过程中,单核细胞的功能及其与T 细胞的相互作用。结果表明:单核细胞能介导天花粉蛋白诱发的免疫抑制;纯化的T 细胞则不能单独介导。但是T 细胞在单核细胞存在的情况下能获得介导免疫抑制的能力。抗原加工阻断剂Antipain能减弱单核细胞介导天花粉蛋白诱发免疫抑制的能力。证实天花粉蛋白的免疫负调节作用依赖单核细胞的抗原提呈功能。     

集胞藻类金属硫蛋白的纯化,性质和溶液构象的研究

集胞藻Synechocysitissp.PCC6803光照培养,加入100μmol/LZnCl2诱导藻内类金属硫蛋白（MT-like）的表达。离心收集鲜藻,超声波破碎细胞,离心除沉淀。上清液72℃加热3min去杂蛋白,离心,上清液依次经过分子筛层析柱,阴离子交换柱和脱盐柱,可得蓝藻类金属硫蛋白。5L培养液收集鲜藻7.6g,一次上样1．52g鲜藻的裂解物,冻干后得15mg纯化的蛋白样,为鲜藻重的0．1％．经分析其等电点为pH4．5,分子量为6．986kD,由58个氨基酸残基组成。其序列中含有较多疏水氨基酸残基（36％）,但其半胱氨酸含量仅为5％。CD（圆二色性）图谱表明其二级结构主要为无规卷曲,不含α－helix和β-sheet,无哺乳动物的金属硫蛋白所具有的典型双结构域结构。紫外吸收光谱表明Zn结合的类金属硫蛋白在220nm也有较高的吸收值。红外光谱分析的结果表明,此类金属硫蛋白的吸收光谱与高等动物的金属硫蛋白的吸收光谱类似。     

天花粉蛋白Lys和Arg残基的化学修饰对其与IgE反应…

用马来酸酐及环己二酮分别对天花粉蛋白上的Ｌｙｓ,Ａｒｇ残基侧链进行修饰,并以竞争性酶免疫测定检查了化学修饰对ＴＣＳ与小鼠抗ＴＣＳ单抗ＴＥ－１（ＩｇＥ）反应活性的影响。两种修饰均使ＴＣＳ与单抗ＴＥ－１反活性下降,推测Ｌｙｓ残基可能直接参了与单抗ＴＥ－１的结合,热变性实验提示ＴＣＳ上单抗ＴＥ－１识别部位需要一定的空间构象。     

天花粉蛋白胰酶肽图谱的毛细管区带电泳法分析

目的:以天花粉蛋白胰蛋白酶解肽段为测定对象,用毛细管区带电泳法(CZE)研究天花粉蛋白的肽图谱分离条件。方法:采用未涂层石英毛细管(长50cm,内径75μm,有效长度42cm),以50mmol/L磷酸盐和150mmol/L三氟乙酸溶液为运行缓冲液,在25℃、pH2.0和压力为3447.4Pa(×10s)的条件下进样,以12kV恒压电泳分离,检测波长214nm。结果:运用CZE也能较好地对天花粉蛋白进行肽图谱分离,在缓冲体系中加入离子对试剂三氟乙酸,可极大地改善多肽的峰形和分辨率;同时运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)技术,也很好地鉴定了部分肽段在CZE和RP-HPLC肽图谱中的对应关系。结论:与传统的RP-HPLC分析天然或重组蛋白肽图谱相比,CZE也不失为一种鉴定蛋白肽图谱的有效、快速和简单的方法。     

集胞藻类金属硫蛋白的纯化、性质和溶液构象的研究

集胞藻Synechocystis sp.PCC 6803光照培养,加入100 μmol/L ZnCl     

Fe-Co杂化血红蛋白E11-Val甲基质子~1H NMR谱峰归属及蛋白溶液构象的研究

在500MHz~1H NMR仪上对HbA,CoHb和对称与不对称的Fe-Co杂化血红蛋白在去氧和一氧化碳配位时环形电流效应对蛋白Ell-Val甲基共振峰的影响进行了研究,将-1.0ppm峰归属于β(Co)的二个甲基质子,-1.55ppm和-2.35ppm的峰归属于α(Co)γ_1CH_3和γ_2CH_3,-1.15ppm与-2.05ppm的峰归属为α(Fe-Co)的γ_1CH_3与α_2CH_3共振峰,-1.52ppm与-2.15ppm的峰指定为β(Fe-Co)的γ_1CH_3与γ_2CH_3.根据归属对蛋白在去氧和一氧化碳配位时其溶液构象变化进行了研究,发现CO配位于β(Fe)比配位于α(Fe)使E11-Val甲基质子化学位移发生更大改变.     

冠心病患者血浆和肽素、白细胞介素18的表达及临床意义

目的:探讨血浆hs-CRP、IL-18及和肽素(copeptin)与冠心病类型的关系及临床意义.方法:36例对照组,41例稳定型心绞痛(SA)组,43例不稳定性心绞痛(UA)组,48例急性心肌梗死(AMI)组,均符合缺血性心肌病的诊断标准.采用免疫比浊法测定hs-CRP水平;采用放射免疫法测定血浆和肽素;采用双抗体夹心ELISA法测定血浆IL-18水平.结果:UA组与AMI组WBC、NEU、hs-CRP、IL-18、和肽素水平显著高于正常对照组(P＜0.05);与UA组比较,AMI组的hs-CRP、IL-18水平显著升高;IL-18与TG、LDL-c、hs-CRP及和肽素呈正相关(P＜0.05),与HDL-c呈负相关(P＜0.05).结论:血浆和肽素与IL-18水平随着冠心病严重程度的增加而升高,其水平变化对冠心病的诊断、病情的严重程度、临床危险分层具有一定的临床意义.     

p18~(INK4C)调控小鼠T细胞的发育及功能

p18INK4C属于细胞周期蛋白激酶抑制剂,其突变或缺失与某些肿瘤的发生密切相关,如T细胞白血病,但目前关于p18调控T细胞发育及功能的研究还鲜有报道,其调控机制仍不明确.本研究利用p18基因敲除(p18KO)小鼠,系统地研究了胸腺中T细胞的早期发育及成熟T细胞的增殖和活化功能,并利用逆转录病毒的方法在Lin?造血干祖细胞上过表达p18,移植4个月后检测其对T细胞的影响.结果表明,p18的缺失对胸腺T细胞的早期发育影响不明显,但随着p18KO小鼠周龄的增加会促进CD4+CD8+双阳性T细胞的数量,此外,p18还通过影响CD3+成熟T细胞的细胞周期进程及IFN-?,GATA3,Tbx21和Foxp3等的表达增强脾脏T细胞的增殖和活化;进一步在造血干祖细胞上过表达p18后会影响T细胞的发育和成熟,进而纠正T细胞在数量上的异常.本研究阐释了p18在T细胞早期发育及后期活化中的调控机制,并证实可通过在干祖细胞水平改变p18的表达进而影响T细胞的分化,这对p18调控T细胞功能异常及参与T细胞白血病的发生提供了新的理论依据和重要的研究价值.     

心力衰竭患者心肌肌钙蛋白T和超敏C反应蛋白的动态变化及预后价值

目的：探讨充血性心力衰竭（CHF）患者cTNT和hs-CRP的动态变化及对预后判断的临床意义。方法：检测89例不同病因、不同心功能分级的心力衰竭患者及42例正常对照组cTNT、hs-CRP及LVEF变化,并进行治疗前后对比观察并随访。结果：不同病因、不同心功能分级心力衰竭患者cTNT、hs-CRP及LVEF与对照组比较均有显著性差异（p〈0．01）,不同分级的患者治疗前、后cTNT、hs-CRP水平有有显著性差异（p〈0．01）,cTNT、hs-CRP水平越低预后越好。结论：联合检测血清cTnT及hs-CRP对于判断CHF患者病情严重程度及预后具有重要的临床意义。