大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的“碱基选择”作用

用双脱氧核苷酸研究了大肠杆菌ＤＮＡ聚合酶Ⅰ的Ｋｌｅｎｏｗ片段的“碱基选择”作用．当引物末端为３’ＯＨ时,Ｍｎ２＋代替Ｍｇ２＋对ｄＮＴＰ的Ｋｍ影响不大,而使ｄｄＮＴＰ的Ｋｉ大大降低,非配对的ｄｄＮＴＰ仍无抑制作用。当引物末端为ｄｄＮＭＰ且与模板配对时是ＤＮＡ合成的抑制剂,与模板配对的下一个ｄＮＴＰ可增强这一抑制作用,Ｍｎ２＋代替Ｍｇ２＋使ｄＮＴＰ的诱导作用大大增强而ｄｄＮＴＰ无诱导作用。这些结果表明引物末端对于酶选择核苷酸起着重要作用,ＤＮＡ聚合酶Ⅰ选择核苷酸的过程应是个有序的构象变化的过程。下一互补核苷酸的结合抑制３＇→５＇外切活性对引物末端ｄｄＮＭＰ的水解作用为此提供了又一证据。     

DNA聚合酶I的发现与意义

DNA聚合酶I是在DNA双螺旋结构模型提出后被发现的,阿瑟·科恩伯格在研究过程中起到至关重要的作用。在其研究成果的推动下,大肠杆菌DNA聚合酶I得到进一步揭示,并催生了PCR技术的问世,同时也促进了其他DNA聚合酶的发现。     

真核细胞DNA聚合酶

近年来,真核细胞ＤＮＡ体外复制模型的建立及蛋白纯化技术的提高,ＤＮＡ聚合酶基因的克隆,真核细胞ＤＮＡ聚合酶研究取得了很大进展。     

大肠杆菌编码区碱基片段的分析研究

对大肠杆菌1231个编码开始区域和1307个编码终止区域内的6碱基片段、4碱基片段和3碱基片段进行了统计,发现绝大多数4碱基和3碱基模式出现在盯对频率小于2的范围之内;在这两个区域中,出现最多的碱基片段是多聚A;编码开始区域和编码终止区域的碱基构成模式有明显区别;编码开始区域里GGA类的稀有片段恰恰是SD区域最偏好的碱基片段;以TAG或CTA构造的3碱基模式为编码开始区和编码终止区的禁用模式。     

DNA聚合酶Ⅰ的发现与意义

DNA聚合酶Ⅰ是在DNA双螺旋结构模型提出后被发现的,阿瑟·科恩伯格在研究过程中起到至关重要的作用。在其研究成果的推动下,大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ得到进一步揭示,并催生了PCR技术的问世,同时也促进了其他DNA聚合酶的发现。     

高速PCR用DNA聚合酶

ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术自创始至今还不到１５年的时间 ,但它已以惊人的速度渗透到了工业、农业、医学、药学等各个领域〔１ ,２〕。ＰＣＲ技术的发明无疑给生物工程带来了历史性的转折 ,促进了生物工程 ,特别是基因工程研究的飞速发展〔３〕。近期 ,随着人类基因组计划等的实施 ,并伴随着生物芯片技术的推广 ,快速、高效的ＰＣＲ已成为ＰＣＲ技术发展的必然趋势。ＴａＫａＲａ推出的Ｚ ＴａｑＤＮＡ聚合酶（Ｚ是指Ａ、Ｂ……排列的最后一个字母 ,指最快的意思 ,为商品名）是为快速ＰＣＲ而研制成功…     

关于DNA复制的引物和DNA聚合酶

DNA复制是由DNA聚合酶催化的,反应需要四种脱氧核苷三磷酸和引物-模板;在引物的3′-羟基上,按模板的指令逐个添加脱氧核苷酸,生成碱基序列与模板互补的新DNA。复制时,DNA双链先打开,形成复制叉,随着复制叉的移动完成复制过程。双链DNA的复制是半不连续的,即先导链是连续合成滞后链则为不连续合成;后者先生成若干短片段(冈崎片段),再连在一起。 DNA复制在基因组的加倍、DNA重组以及修复DNA所受损伤等方面都对生命有决定性的作用。     

耐热DNA聚合酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

用PCR法从水生栖热菌菌株YT－1中扩增耐热DNA聚合酶基因,得到2．5kb的DNA片段t扩增片段重组到pUCl8中测序证实为Taq DNA聚合酶基因,将该片段重组到pBV221温控表达质粒中,在大肠杆菌中表达出94kDa的重组蛋白,100ml培养物的细胞产酶为1．5×10⁵u,表达的蛋白能催化PCR反应的进行。     

动物细胞DNA聚合酶的研究新进展

本文主要介绍动物细胞中四种依赖于DNA的DNA聚合酶(简称DNA聚合酶)的结构、功能及其在DNA复制和修复作用中的研究现状。     

关于计算DNA中各种碱基比例试题类型分析

不论是国际生物学奥林匹克竞赛还是国内生物学奥赛乃至各个省区生物学奥赛的试题中 ,遗传学部分占的比例越来越大 ,其中涉及利用查格夫定则计算DNA结构中各种碱基比值方面的试题几乎每年的试卷中都有 ,出题的角度不同 ,类型各异 ,但是认真分析可以归纳为以下 1 1种类型 :1　知道DNA分子中碱基比值关系 ,推断该DNA分子是双链还是单链　　例如 :在 1个DNA分子中 (A +G) /(T +C) =1 ,A =T ,G =C。此DNA是双链还是单链 ?根据查格夫定则认为该DNA分子可能是双链 ,而不能认为一定是双链。在双链DNA分子中一定是 (A +G) /(T +C) =1 ,…     

Taq DNA耐热聚合酶在大肠杆菌中的克隆和高表达

从水生栖热菌(Thermus aquaticus)YT-1中分离得到的Taq DNA 聚合酶是一种广泛应用于PCR的耐热DNA聚合酶。由于天然菌株酶产量较低,培养条件要求严格,酶的纯化过程极为繁琐而使产品成本较高,因而促使人们构建适合于大规模生产的基因工程菌株。已有人分别通过不同的途径,使用不同的载体,成功地在大肠杆菌菌株中表达了Taq 耐热DNA聚合酶基因。我们通过与前人不同的途径,把这一基因克隆到大肠杆菌的载体质粒pJLA503上并使其得以高表达,为降低生产成本和进一步研究该酶的各种特性提供了有利条件。     

几种耐热DNA聚合酶的比较

耐热DNA聚合酶广泛应用在PCR技术。本文将常用的几种耐热DNA聚合酶分为三大类,对它们的性质、差异、用途做一个简单的介绍。     

大肠杆菌RNA聚合酶的分子研究进展

大肠杆菌是生物工程研究中最重要的外源基因表达系统,许多真核生物及病毒基因表达的早期研究都是在大肠杆菌中进行的,在外源基因表达的全过程中,依赖于DNA的RNA聚合酶在基因的转录中担负了重要的角色,随着＊＊A聚合酶各亚单位结构和功能研究的深入,人们对于RNA聚合酶的研究取得了今人瞩目的进展,本文就RNA聚合酶的分子水平研究进展作～介绍。IRNA聚合酶全酶（H010－enzyme）原核生物的依赖｝yDNA的RNA的聚合酶（以下简称ANA…一般由几种不同的亚单位组成。大肠杆菌RNAP至少含有四种不同的亚单位a、p、日’和a,一般以两…     

真核细胞DNA聚合酶δ的结构与功能

DNA聚合酶δ(Polδ)在真核细胞的DNA复制过程中具有核心酶的作用,同时还参与DNA的修复。Polδ是一种由多个亚基组成的复合体,目前已从哺乳动物、裂殖酵母和芽殖酵母等多种真核生物细胞中分离出,并对它们的亚基组成进行了分析,但还未得到确切一致的结果。Polδ在DNA复制中的具体作用已基本了解,它参与催化整个前导链的复制以及一些或大部分滞后链的复制。此外,Polδ还参与DNA的修复,此酶的这一功能可减少DNA的变异,但目前对其作用机理还知之较少。在Polδ活性调控方面,主要研究了一些相关蛋白因子对Polδ活性的调控作用以及转录因子对催化亚基表达的调控作用。     

线粒体DNA聚合酶的起源与演化

随着新的DNA聚合酶A家族成员的加入,家族内部的系统发育关系需要重新检查,来自大肠杆菌DNA聚合酶I(DNA Pol I)和它的细菌、噬菌体和真核细胞同源物被用来重建这个家族的系统发育史.分析显示:在真核生物演化的不同阶段,线粒体DNA聚合酶基因可能通过水平基因转移方式起源于不同类群的生物.原始真核生物线粒体DNA聚合酶基因可能来源于细菌,植物线粒体DNA聚合酶基因可能从质粒获得,而真菌和动物线粒体DNA聚合酶基因可能起源于T3/T7相关噬菌体.     

再谈关于DNA中碱基计算的规律及其应用

拜读了《生物学通报》2003年第38卷第5期54页卢龙斗等老师撰写的“关于计算DNA中各种碱基比例试题类型分析”一文后，颇有顿悟，现将本人的有关想法整理出来，以供各位老师商酌。