甲状腺组织冷冻切片的优化

目的优化冷冻切片的关键条件,以期提高甲状腺组织冷冻制片效率、切片质量与染色效果。方法收集术中新鲜送检的甲状腺标本,通过对比实验,比较冷冻切片制作环节中取材厚度、速冻方法与染色方法等因素对制片质量的影响。结果甲状腺组织冷冻切片取材厚度以0.2~0.3cm为佳;预先制作“冰垫”的托头并于上方加盖冷冻冰锤,有利于提高速冻效率、提高组织结构清晰度、减少组织块崩裂、减少冰晶、减少裂隙;机染有利于提高染色优良率并减少染色时间。结论选择适当的取材厚度、优化速冻方法、采用优质的染色方法,可显著提高甲状腺组织冷冻切片的制片质量,为精准的术中病理诊断奠定基础。     

病理快速冷冻切片染色的质控切片制备

目的探索一种较佳的病理快速冷冻切片染色质控片的制备方法。方法随机抽取60例快速冷冻组织,每例取2块组织,随机分为A、B二组,在-25℃速冻后,A组(标准组)切片放入AAF液(由95%乙醇A、乙酸A、甲醛F按85:5:10的比例配制而成)固定30s后立即进行HE染色,B组切片放入AAF液固定30s后取出室温晾干后放进冷冻切片机内过夜。余下的A组及B组组织进行后续2种不同的操作。C组:得到A组切片后的组织不做任何处理,直接放冷冻切片机机箱内,并将冷冻切片机箱体温度调高至-10℃,第二天上午再次调至-25℃;D组:得到B组切片后的组织于组织上加包埋剂覆盖后放冷冻切片机机箱内,余操作同C组。C、D两组于第二天上午8点再次进行冷冻切片后同B组一同进行HE染色,以十分制评定切片有无裂隙、皱褶或冰晶,染色后组织结构、细胞核着色和核质对比清晰度等6项指标的得分,分别与A组的染色片进行比较。结果 A、B两组切片质量评价指标得分无明显差别,C组切片无裂隙指标得分低于A组,D组无冰晶指标得分低于A组;B、C两组的组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分与A组比较无显著差异;D组组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分均低于A组。结论新鲜的组织冷冻切片后,切片立即放入AAF液固定30s,随后取出,常温晾干后再次放进冷冻切片机机箱内过夜直至第二天上午放入全自动染色机内进行HE染色,观察染液的染色力,适用于每天快速冷冻切片工作开展前的全自动染色机的染色质控。     

乳腺冷冻切片的优化

目的优化乳腺冷冻切片的关键条件,以期提高制片效率与切片质量。方法通过实验,分别比较不同取材大小、速冻方法、切片厚度等条件对乳腺冷冻切片质量的影响。结果乳腺冷冻切片取材大小以1cm×1cm×0.2cm至2cm×1.5cm×0.3cm为佳;预先制作"带垫"的托头有利于提高速冻效率、减少组织块崩裂、减少冰晶;切片厚度以5μm及6μm为佳。结论优化乳腺组织取材大小、速冻方法、切片厚度等条件,可显著提高乳腺冷冻切片的制片效率与切片质量,为术中病理诊断及手术方案的制定提供保障。     

微小组织冰冻快速制片技术

目的摸索提高微小组织冰冻快速制片质量的方法。方法针对小组织冰冻切片中常常出现组织切完、多粒组织切片不全、冰晶、染色不均匀等问题,采用预先制作冷冻平台、快速冷冻等方法来制作优质的冰冻切片。结果组织铺平可使组织切片完整,快速冷冻可减少冰晶形成,使组织结构更清晰,及时固定和加温染色可使细胞核染色更鲜艳,核、质对比明显。结论组织铺平、速冻、固定、染色等都是提高微小组织制片质量的关键。     

两种方法制备的脑组织切片激光共聚焦显微镜成像效果的比较研究

该文比较研究了振动切片法与冰冻切片法制作的脑组织切片的质量及其激光共聚焦显微镜成像的效果。振动切片法通过灌流固定、取小鼠脑、琼脂糖包埋后利用振动切片机连续冠状切片。冰冻切片法通过蔗糖脱水、OCT包埋液氮骤冷后利用冰冻切片机连续冠状切片。制备的脑组织切片进行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察成像效果。结果表明,与冰冻切片相比,振动切片法简单快速,且制片质量较高,脑组织切片无冰晶形成,抗原免遭破坏,组织结构较完整,更适用于脑组织样品的激光共聚焦显微镜的成像观察。     

冰冻切片制作体会及常见问题

目的:探讨冰冻切片制作过程中的影响因素及改进措施,提高切片质量,确保实验结果科学性、稳定性及可靠性.方法:从标本的取材、制片以及固定等多个环节阐述冰冻切片常见问题.结果:通过调整切片机的相应设置并且在冰冻切片多个环节中采取了相应措施,使切片更完整,厚薄均匀,无脱片和冰晶空洞现象产生,切片质量优良.结论:制作出高质量的冰冻切片需在取材处理、切片、固定等诸多环节上精益求精,这对冰冻切片这一专业性很强的实验技术的质控有着重大意义.     

组织块速冻装置

冰冻切片法是生物医学研究中常用的方法之一,其中较为常用的是恒冷箱切片机,此机冷冻组织块要求要速冻以防形成冰晶,影响组织结构.通常采用CO_2、干冰,仪器本身所具有的低温装置等使组织块冷冻,以上方法虽然可以使组织块冷冻,但存在一些缺点,如CO_2下易领取,干冰冷冻也容易受周围空气的影响,尤其是一些较大的组织块,冷冻速度太慢容易形成冰晶,针对这些原因,我们科室设计了一个快速冷冻组织块的装置。(如图所示)     

影响冷冻切片质量因素的分析

冷冻切片 (frozensection)是在低温恒冷条件下 ,使组织迅速冷冻达到一定硬度后制作成切片 ,冷冻切片的组织不需经过任何处理 ,组织中的糖、脂、蛋白质、酶、抗原、抗体等化学成分不受影响而得以保存。它除常用于手术中的快速病理诊断 ,还用于某些组织化学染色 ,酶的显示、抗原、抗体的检测 ,免疫荧光等方面。冷冻切片是一种组织切片快速制作方法 ,存在着多种干扰因素 ,影响冷冻切片质量主要有以下四个方面。1组织冷冻与冰晶形成冰晶的形成是组织在冷冻固化过程中 ,由于冷冻缓慢 ,时间过长 ,细胞胞浆和组织间隙内未结合水逐渐析出所形成 ,融…     

肾移植穿刺标本冰冻切片制作方法及体会

目的介绍一种肾移植穿刺标本冰冻切片的制作方法并分享制片过程中的体会。方法选取2017年武汉大学人民医院手术室提供的肾移植供体穿刺标本10例,分别记录每例冰冻切片的制作方法,切片质量,制片时间。收到标本后,首先在样本托上均匀涂抹一层普通胶水,于冷冻锤下压平成型30s,取出样本托,将标本铺展成一条直线于样品托上之后,在放置好的标本上均匀涂抹一层普通胶水覆盖标本,并用冷冻锤轻轻压平1min,取出进行切片。切片经改良AFA固定液固定,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色制片后,显微镜下观察。结果切片完整平坦,无褶皱、卷缩、刀痕;染色核质分明,红蓝适度,对比度好;制片时间在13min左右。结论肾移植穿刺标本经两步法包埋再切片,联合改良AFA固定液固定及HE染色,大大缩短了制片时间,提高了制片质量,易于观察,且重复性好,可以推广。     

脂肪组织冰冻切片简易操作技术

组织切片的染色与观察是细胞生物学实验中的重要内容之一,在教学过程中,经常用到冰冻切片技术,也就是借助低温冷冻将组织快速冻结达到一定的硬度进行制片的一种方法。由于冰冻切片机购价昂贵,在高等院校教学单位,一般都安排专人管理与操作,因此在细胞生物学教学中,无法让学生真正亲自操作,获得锻炼。     

改良固定方式以提高淋巴瘤组织的制片质量

目的通过改良两种时段接收淋巴结的固定方式,提高淋巴瘤诊断的制片质量。方法随机收集上午10时左右及下午4时左右接收的132例淋巴结标本,每例各切取2块组织,上午切取的组织随机分为2组,分别行短时间固定处理程序(上午短时间组)和延长固定时间处理程序(上午长时间组)进行固定,下午切取的组织也随机分为2组,也分别行短时间固定处理程序(下午短时间组)和延长固定时间处理程序(下午长时间组)进行固定。回顾性分析并筛选出病理诊断为弥漫大B细胞淋巴瘤的58例,其中包括上午10时左右接收的26例及下午4时左右接收的32例。脱水处理后的4组组织进行包埋后,按常规进行切片、HE染色、CD79a免疫组织化学检测、C-MYC双色分离荧光原位杂交实验(fluorescence in situ hybridization, FISH)。通过比较4组切片出现肉眼可见裂隙、皱折及破碎不全发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率,探讨最佳的淋巴结固定方法。结果上午长时间组制片CD79a免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率均不如上午短时间组,切片不完整发生率及HE染色质量与上午短时间组无明显差异;下午短时间组制片切片不完整发生率高且HE染色质量、CD79a免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率明显不如上午短时间组;下午长时间组切片以上指标均与上午短时间组无明显差异。结论上午接收的淋巴结标本应剖开于当天进行隔夜常规脱水,下午接收的淋巴结标本必须剖开后行延长固定程序进行脱水,随后得到的淋巴结组织在切片完整性、HE染色、免疫组织化学检测及FISH检测中能更好地提高淋巴瘤诊断的制片质量。     

不同处理方式及试剂盒对石蜡包埋组织提取DNA影响

目的:比较石蜡包埋组织三种不同的前处理方式用不同试剂盒提取DNA效果,以期达到能根据各自实验室条件差异,选择合适的样本处理方式及相应的试剂盒,获得高质量DNA。方法:在提取DNA前,对石蜡块包埋的组织分别进行三种前处理,形成三种组织形式:切片机连续切片,手动刮取石蜡组织块后获得手刮片和切片后烤片制成的玻片,用Qiagen和Tiangen试剂盒提取DNA,并用琼脂糖电泳,PCR扩增和测序进行鉴定。结论:如果样本是玻片形式的石蜡包埋组织,可以选择改良过的Qiagen试剂盒提取DNA;样本如果是石蜡块包埋的组织,有切片机的,切片之后用Tiangen试剂盒提取DNA;而没有切片机的实验室可以选择用刀片刮取石蜡块组织,用Tiangen试剂盒提取DNA。     

利用冰冻切片机快速制作木质茎显微切片技术

植物的木质茎,因次生维管组织含量多,细胞壁木质化程度高,质地较硬,徒手切片和石蜡切片均难以获得满意的切片效果。冰冻切片机可对一定硬度的组织进行切片,是制件植物木质茎的制片的有效工具之一。【方法】利用冰冻切片机可在不经化学固定,对一些质地均匀,含水量较高的木质茎直接切片;而对木质坚硬、含水量较少的茎,经过FAA等固定剂固定后,OCT包埋,(-30)～(-25)℃切片,用0.1%甲苯胺蓝染色液染色。【结果】木质茎的冰冻切片结构完整,图像清晰、色彩丰富。【结论】冰冻切片机可用于木质茎的显微切片制作,再结合甲苯胺蓝染色,具有简便、高效、易操作的优点。     

乳腺穿刺组织冰冻快速制片及注意事项

乳腺肿瘤是女性最常见的疾病之一,其早期诊断和早期治疗对预后至关重要。目前,对于乳腺肿块,临床常采用细针穿刺获得组织,送病理科进行快速冰冻切片确诊。冰冻切片质量的好坏直接决定诊断的准确率,但由于乳腺穿刺标本组织小,脂肪、纤维成分较多,给制片和诊断带来一定的困难,常出现切片不全、组织切完、脱片、染色不均匀、冰晶等现象,为解决上述问题,近年来,我们经过500多例乳腺穿刺标本的实践摸索,获得了一些经验,现介绍如下：     

植物冰冻切片条件的优化及其与石蜡切片在组织化学应用中的比较

冰冻切片是植物组织学研究中一项重要的实验技术,冷冻温度和冷冻时间是决定切片质量的关键因素。通过比较15种冰冻切片条件,得出植物组织直接冰冻切片较适宜的冷箱温度、冷台温度和冷冻时间。同时,通过对5种植物的不同组织进行组织化学染色,比较了新鲜材料直接冰冻切片与常规石蜡切片在不同化学成分鉴定上的异同及各自的适用范围。结果表明,对于多糖、蛋白质和角质,两种切片方法的鉴定结果比较一致,但对于脂肪只能采用冰冻切片技术。研究结果对植物组织学实验和研究方法的改进具有一定的参考价值。     

微小组织石蜡切片制作体会

目的探讨提高微小组织石蜡制片质量的方法,明确微小组织的内涵。方法针对微小组织石蜡切片制作过程中常常出现组织遗漏、切完和多粒组织切片不全等问题,通过伊红标记、预包埋等方法来精心制作切片。结果伊红标记可避免微小组织遗漏,预包埋可以使多粒微小组织处于同一水平面来防止切不全或切完组织的情况发生,整个制片过程中仔细操作也是必不可少的条件。结论伊红标记和预包埋等方法能够很好地解决微小组织切片制作中的遗漏、切完和"切不全"等问题,并进一步明确了微小组织的内涵。     

活体肺癌组织玻璃化保存的研究

保存活体的肺癌组织将为肺癌发病基因筛查和靶向药物筛选等体外实验研究提供更完整的样本信息. 本文对活体肺癌组织的玻璃化保存方法进行研究，首先采用针浸法玻璃化保存单块肺癌组织，对所需低温保护剂的浓度和平衡时间进行了优化；其次采用冻存管对多块肺癌组织样本进行玻璃化保存，对低温保护剂溶液体积以及平衡时间进行了优化；最后对慢速冷冻、不加低温保护剂快速冷冻、玻璃化冷冻3种冷冻方法的冻存效果进行比较并通过低温显微分析其冰晶损伤机理.结果表明，20% EG+20% DMSO+0.5 mol/L海藻糖作为低温保护剂，在平衡溶液和玻璃化溶液分别加载3 min和1 min时，针浸法和0.25 ml冻存管内玻璃化冻存，复苏后组织活力最高，分别约为79.96%与80.44%. 免疫组化显示玻璃化保存肺癌组织经过复苏后，相比慢速冷冻和无保护剂快速冷冻，组织结构损伤较小，组织内细胞TUNEL阳性表达较少. 低温显微结果表明，玻璃化保存组织内部及周围只出现少量细小冰晶，而慢速冷冻、快速冷冻组织皆出现明显冰晶.     

淋巴结组织切片HE染色的体会

目前,组织化学、免疫组织化学、电镜和ＰＣＲ等先进技术虽已用于淋巴系统疾病,尤其是淋巴系统肿瘤的诊断、鉴别诊断和研究,但是,石蜡切片ＨＥ染色仍然是临床病理诊断最常用的有效方法。由于淋巴组织结构复杂,组织处理不当时,常常难以获得理想的切片质量,给准确诊断带来许多困难,有时甚至造成误诊。影响淋巴结石蜡切片质量的因素较多,但我们认为关键应注意以下几个环节。１　淋巴结活检石蜡切片的应用淋巴结石蜡切片主要用于活检和穿刺组织的制片,为了获得准确的病理诊断、疗效判断和某些研究工作,需要高质量的ＨＥ染色切片。诊断…     

品制备对超薄切片的影响

电镜超薄切片的质量与组织块的硬度,组织的固定,清洗、脱水、浸透、包埋、包埋块的修整形状,切片机、玻璃刀、架刀角度和收集槽液面等因素都有密切的关系,标准的超薄切片应是厚度适中、均匀、平整、无刀痕、无颤纹和皱折。要想获得理想的超薄切片,作者认为     

利用恒冷切片机制作肾穿石蜡切片的简易方法

我们在日常工作中,经常会接收到肾穿标本,由于病理诊断的特殊要求,组织切片的厚度只有达到2一3微米才能满足诊断的需要,而且标本取材不易,数量极其有限,肾组织除了要经过特殊慢脱水处理外,在切片之前,蜡块必须要在冰箱里冷却。在切片过程中,还需冰块冷却．在达到适宜温度下,才能切成一张完整切片。过去这种方法,受外界环境温度影响很大．温度的高低都直接影响切片的薄厚,质量和数量,既麻烦又费时效果不理想。为了弥补这一缺陷,我们改用恒冷切片机切制肾穿石蜡切片．根据切片机能随意调节温度而可恒定的特点,首先把蜡块修切整…