健康与感染青枯病烟株根际土壤与茎秆细菌群落结构与多样性

【目的】了解健康烟株与感染青枯病烟株在根际土壤、茎杆发病部位、茎杆病健交界部位以及未发病茎杆的细菌群落结构与多样性。【方法】分别对土壤与茎杆样品中细菌的16S rRNA基因V3-V4区进行扩增,采用Illumina MiSeq测序技术对扩增片段进行高通量测序,然后对健康烟株与感染青枯病烟株不同部位细菌群落结构与多样性进行分析。【结果】感染青枯病烟株发病茎杆及根际土壤的细菌群落多样性高于健康烟株茎杆及其根际土壤样品,病健交界茎杆样品细菌群落多样性低于健康烟株。变形菌门(Proteobacteria)在所有样品中均为优势菌门;所有烟株根际土壤的优势菌门为拟杆菌门(Bacteroidetes)、酸杆菌门(Acidobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)和绿弯菌门(Chloroflexi);健康烟株茎杆部位的优势菌门为蓝细菌门(Cyanobacteria);感染青枯病烟株发病茎杆和病健交界茎杆部位的优势菌门为蓝细菌门(Cyanobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)。所有根际土壤样品的优势菌属为劳尔氏菌属(Ralstonia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)、黄杆菌属(Flavobacterium)和代尔夫特菌属(Delftia),而感染青枯病烟株根际土壤的劳尔氏菌属(Ralstonia)和假单胞菌属(Pseudomonas)相对丰度显著高于健康烟株根际土壤,鞘脂单胞菌属相对丰度显著低于健康烟株根际土壤。烟株茎杆的优势菌属为劳尔氏菌属和假单胞菌属等。感染青枯病烟株病健交界茎杆中劳尔氏菌属、肠杆菌属(Enterobacter)和泛菌属(Pantoea)相对丰度显著低于健康烟株样品。【结论】健康与感染青枯病烟株茎杆样品细菌群落的丰富度和多样性明显低于相应的根际土壤样品。较健康烟株而言,感染青枯病烟株根际土壤和茎杆样品细菌群落丰富度和多样性均表现出不同程度地增加,且根际土壤细菌群落结构变化较茎杆样品明显,而病健交界茎杆样品细菌群落丰富度和多样性降低。烟草青枯病为典型土传病害,其病原茄科劳尔氏菌尽管能在烟株维管束中蔓延扩增,但主要还是分布于土壤中;它的存在似乎对土壤细菌群落的影响大于茎杆样品的。该研究结果提示对于青枯病的防治不能局限于烟株本身,田间土壤也应加大防治力度。     

精恶唑禾草灵对不同品种柴胡茎秆力学特性的影响

为应用茎秆生物力学性质指标研究不同剂量除草剂对柴胡安全性的影响,以南柴胡和北柴胡茎秆为试验材料,精恶唑禾草灵为试验除草剂,分别在拔节期和开花期利用非金属材料万能试验机对茎秆基部第2节间的最大荷载、应力、应变、弹性模量、拉伸强度、剪切强度等力学指标进行测定和统计分析.结果表明:北柴胡的茎杆直径、最大荷载、抗拉强度等均高于南柴胡,最大荷载高了约13%,抗拉强度与茎杆直径呈线性相关关系(R=0.9194);南柴胡和北柴胡拔节期的茎杆拉伸强度和剪切强度均高于开花期;柴胡茎经中低剂量(0-1500ml/hm~2)的精恶唑禾草灵处理后,其抗拉强度和剪切强度无明显变化,但高剂量(3000ml/hm~2)的精恶唑禾草灵施用后显著降低了柴胡茎杆的抗拉强度和剪切强度,会直接导致柴胡抗倒伏能力降低,造成柴胡产量和品质下降.该结果可为柴胡田除草剂的安全施用及药材机械化收割技术的研发提供参考依据.     

香蕉茎纤维提取微生物初筛的一种新策略

我国是香蕉的主产国之一,随着香蕉茎杆的综合处理、利用技术的不断深化,香蕉纤维的开发和利用在我国呈现出良好的应用前景。然而目前香蕉纤维开发利用程度不高,主要原因是还没有获得高效的微生物提取菌株。本文以香蕉茎杆纤维脱胶为背景,采用脱胶菌侵染新鲜土豆片的方法,探讨了一种香蕉茎纤维提取微生物初筛的新策略,为香蕉纤维产业的开发利用提供了一个可资利用的新思路。     

迎春花植物茎叶中黄酮类物质初步研究

采用硝酸铝——亚硝酸钠比色法对迎春花茎叶内的黄酮类物质含量进行了初步测定,确定了总黄酮含量提取的适宜溶剂浓度和提取的适宜时间。结果表明,用60％甲醇溶剂提取5h总黄酮含量最高,茎杆中的含量为10．42mg/g DW,叶片中的含量为18．31mg／g DW。此外,还对迎春花叶提取液进行了各种黄酮定性颜色反应,初步确定其中的黄酮类物质主要为双氢黄酮类及查尔酮类。     

正交试验法优选舒心胶囊原料药中挥发油的提取工艺

目的:探索舒心胶囊原料药中挥发油的提取工艺.方法:采用高效液相色谱法,用70%甲醇回流提取制样用作阿魏酸含量测定的方法学考察;用水蒸气蒸馏法提取挥发油,以挥发油提取率和阿魏酸含量为指标,采用L9(34)正交试验设计,筛选挥发油的最佳提取工艺.结果:舒心胶囊原料药中阿魏酸含量为0.070%.影响提取的主次因素为:浸泡时间>加水量>提取时间;优选得到的最佳提取条件为:药材不必浸泡,加10倍量水(v/w)后提取3h.结论:该工艺准确、稳定,重复性好.     

两种方法制备模板DNA在PCR-SSCP中的应用研究

目的:比较两种方法(DNA试剂盒提取法和FTA卡法)提取的DNA在PCR-SSCP反中的可靠性.方法:用DNA试剂盒从全血中提取DNA和用NaOH方法从FTA卡中提取DNA后,用分光光度计检测两种方法提取DNA的浓度及纯度,进行PCR反应之后,用2％的琼脂糖凝胶电泳检测其质量,接着进行SSCP检测,观测其效果.两种方法提取的样品相同,进行PCR反应和SSCP检测的条件完全一致.结果:用DNA试剂盒提取法和FTA卡法提取的DNA纯度分别为OD260/280=1.817,OD260/280=1.806.48份贵州荷斯坦奶牛DNA后续PCR反应和SSCP的检测结果表明,两种方法提取的DNA用于PCR反应和SSCP检测其效果没有明显差别,成功率为100％.结论:FTA卡结合DNA较稳定,用NaOH法提取DNA效果可靠且比试剂盒方法简便、快捷、经济,值得推广.     

多效唑和矮壮素对盆栽彩色马蹄莲的矮化实验

采用200～400 mg*L-1多效唑(PP333)和1 000～2 000 mg*L-1矮壮素(CCC)对处于生长中期的2个彩色马蹄莲(Zantedeschia antedeschia)盆栽品种进行矮化处理,结果显示彩色马蹄莲的株型明显矮化,茎杆增粗.统计分析表明:PP333处理的矮化效果较明显,其中以300 mg*L-1效果最佳,说明PP333对设施栽培条件下彩色马蹄莲的防徒长、抗倒伏的矮化处理有实用价值.     

DNA提取方法对一串红不同部位DNA提取的比较

本文以一串红的叶片、茎段、花为材料,分别采用高盐低pH法、十二烷基硫酸钠(SDS)法、改良十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法、核DNA法和十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)区室法等5种不同方法对其进行了基因组DNA提取效果的比较分析.结果表明,除用高盐低pH法在一串红花中未提取出DNA外,其它均可提取出DNA,都能进行RAPD扩增.5种方法在一串红DNA提取中,提取效果由高到低依次为:核DNA法、改良CTAB法、SDS法、CTAB区室法、高盐低pH法;3个部位提取结果显示:叶片较容易得到高质量的DNA,茎段次之,花最差.     

大豆的综合利用[Ⅰ]从大豆油渣提取蛋白质的研究

提取豆油后的大豆残渣(简称大豆油渣),用1—12％的碱溶液提取数次,油渣和碱溶液的比例(W/W)为1/10,混合物在50℃的温度下搅拌30分钟,减压过滤,合并几次滤液(滤渣保留待分析),用0.5N的HCl溶液中和,用饱和(NH_4)_2SO_4溶液沉淀,减压过滤,用无离子水洗沉淀几次,真空干燥,粉碎过筛,得到有香味的褐黄色的粉末状产物.得率23.54％;产物的蛋白质的平均含量为71.46％. 分别用IR,UV,HLC和电泳等现代技术对上述产物进行了分析鉴定. 本文还讨论了pH,温度,时间和“配比”等因素对提取效率的影响.     

适用于微卫星标记的湿地松、加勒比松DNA快速提取法

以湿地松(Pinuselliottii,PEE),包括古巴加勒比松(P.caribaea var.caribaea,PCC)、洪都拉斯加勒比松(P.caribaea var.hondurensis,PCH)、巴哈马加勒比松(P.caribaeavar.bahmaensis,PCB)3个变种在内的加勒比松,侧枝顶芽为试验材料,使用RETSCHMM400混合球磨仪破碎植物组织,然后利用改良CTAB法提取基因组DNA,完成48个样品仅用1h,1个工作日可提取300个样品以上,DNA分子量大于20kb,0.3g样品可提取DNA20-60μg,能够满足几百次PCR反应;利用所提DNA进行SSR分析,条带清晰,多态性好,说明该方法提取的DNA完全可以满足SSR反应的需要。本研究为SSR标记用于湿地松、加勒比松分子标记辅助选择育种提供了经济、高效、可靠的DNA提取方法。     

裸长角(虫兆)线粒体COI基因扩增的研究

目的:为研究跳虫的遗传多样性和探讨跳虫线粒体基因提取与扩增的简易方法,对裸长角(虫兆)线粒体细胞色素氧化酶亚基COI基因进行了提取和扩增.方法:通过采集裸长角(虫兆)、提取裸长角虫兆基因组DNA,并用特异性引物对COI基因进行PCR扩增,用琼脂糖凝胶电泳来检验扩增产物,最后用软件对结果进行分析.结果:结果显示扩增产物的为一明亮条带,长度约为477bp,符合预期.结论:用基因组DNA作为扩增模板是可行的,所选用的引物对跳虫线粒体细胞色素氧化酶基因的扩增具有参考价值.     

Effect of Different Extraction Methods on Osmanthus Oil Quality

用超临界流体萃取法(SCFE)、可食用石油醚和酒精抽提蒸馏三种不同的抽提方法,提取了咸宁桂花品种——银星的花精油;气质联用(GC-MS)分析不同方法提取精油的香气成分及其相对含量.结果表明:SCFE提取的精油得率最高(0.19％),紫罗兰酮、醇类的相对含量高达36.99％;石油醚浸提结果次之(0.13％),酒精抽提法不可取(0.07％).     

烟草青枯病拮抗内生细菌的分离、鉴定及其田间防效

从病区健康烟草植株茎杆内分离到一株对烟草青枯罗尔氏菌(Ralstonia solanacarum)有强拮抗作用的内生细菌,命名为B-001菌株.拮抗性研究表明,B-001菌株对多种革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌以及病原真菌均有较强的抑制作用.形态和生理生化特征初步表明菌株B-001为芽孢杆菌属(Bacillus)细菌.经扩增、测序得到B-001的16S rDNA序列,GenBank接收号为DQ444283.用ClustalX进行多重序列对比,并通过MEGA3方法构建16S rDNA系统发育树,表明:菌株B-001与Bacillus subtilis (DQ415893)的相似性为99.2%,并处于同一分支;结合形态和生理生化指标,将其鉴定为枯草芽孢杆菌(B. subtilis).2005和2006年在湖南省桂阳县、宁乡县进行了田间试验,防效在40.03%～78.14%,防治效果良好,且明显优于农用链霉素.     

不锈钢和氧化钛薄膜刺激内皮细胞释放NO和MCP-1的研究

目的:探讨不锈钢和氧化钛(Ti-O)薄膜对内皮细胞释放细胞因子的影响,评价生物材料表面的内皮细胞的功能.方法:用非平衡磁控溅射的方法制备Ti-O薄膜,提取人脐静脉内皮细胞(mrVEC)并种植到材料表面进行培养.第1、3、5天提取培养上清液,用NO检测试剂盒和酶联免疫吸附实验的方法进行一氧化氮(NO)和单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte Chemotactic Protein 1,MCP-1)的检测,采用环境扫描电子显微镜(SEM)进行细胞形态观察.结果:内皮细胞在Ti-O薄膜表面上生长形态保持较好,其培养上清液NO和MCP-1因子释放量都要略小于不锈钢表面的.结论:Ti-O薄膜具有较好的促进内皮化和组织相容性,有望成为血管支架的新型生物材料.     

三种花生幼胚蛋白质提取方法比较研究

植物组织(或细胞)的蛋白质提取效率与效果直接影响蛋白质双向凝胶电泳等实验的结果。为探索建立适用于花生幼胚蛋白质(双向凝胶电泳用)提取的最佳条件,尝试了磷酸缓冲液直接提取法、改良的荔枝胚胎蛋白提取法和Trizol(附加)提取法等3种提取方法,根据蛋白提取得率、试剂成本、双向电泳图谱的质量(蛋白质斑点的丰度、分布特点)进行初步评价。结果表明,磷酸缓冲液直接提取法简单但总体效果较差,改良的荔枝胚胎蛋白提取法综合评价最好,与双向凝胶电泳条件更兼容。     

野西瓜低聚糖的提取及含量测定

目的:确定野西瓜低聚糖提取工艺参数并测定其含量.方法:对提取温度、提取时间、料液比和乙醇浓度进行了单因素和L9(34)正交试验;用分光光度法测定了野西瓜中低聚糖含量.结果:影响野西瓜低聚糖提取率的4个因素的影响程度依次为:提取时间>提取温度>乙醇浓度>料液比.最佳提取条件为:提取温度70℃、提取时间70min、料液比1/25、乙醇浓度80%,在此实验条件下低聚糖得率为3.70%.结论:实验结果为野西瓜低聚糖的进一步研究提供科学依据.     

十二烷基硫酸钠协同微波-酶法提取布渣叶总黄酮

采用十二烷基硫酸钠(SDS)协同微波-酶法提取布渣叶总黄酮,选取微波辐射时间(X1)、SDS质量分数(X2)、液固比(X3)、恒温水浴提取时间(X4)、酶解时间(X5)进行U15(54×3)混合水平均匀试验设计,利用偏最小二乘法(PLS)处理试验数据,建立数学模型,确定提取的最优条件并进行验证;另外,将优化后的提取结果与其他提取方法进行比较.研究结果表明:优化的提取条件为X1=1min、X2=0.16％、X3=30.75 mL/g、X4=50 min、X5=30 min.与其他提取方法相比,该法提取效率高,环保无污染,具有一定的应用价值.     

其它药剂

<正>大麻样品粉碎,用95%乙醇冷渗提取。提取物用氯仿和水分配提取。氯仿可溶部分,再用10%的甲醇水和正己烷分配提取。甲醇可溶部分行闪光层析(flashed chromatography),用4%的乙醇氯仿作为溶剂,得到一个新的化合物(1)。根据其紫外、红外、     

竹叶挥发油的提取及成分分析

本文从竹叶中提取了0.11%挥发油,用气相-质谱(MS-GC)联用仪确认了其中14种化学成分.     

正交试验法优选毛泡桐中乌索酸提取工艺条件

采用正交设计L9(34)方法,考察乙醇浓度(A)、超声时间(B)、超声功率(C)、料液比(D)对乌索酸提取率的影响,用高效液相色谱法测定含量,并与常规提取法进行对比,确定了毛泡桐中乌索酸的最佳超声提取工艺条件。所考察的因素对毛泡桐中乌索酸提取的影响按各因素作用主次顺序为:乙醇浓度>料液比>超声时间>超声功率;乌索酸超声提取的最佳条件为:A3B3C2D1,即毛泡桐叶粉末用6倍量体积分数95%乙醇超声提取2 h,超声功率为200 w。与常规的提取方法相比,超声提取具有提取时间短、操作简单、提取率高、无需加热等优点。优选的工艺条件稳定,操作简便,方法可行,可用于毛泡桐中乌索酸的提取。