酸奶中糖肽复合物的分离纯化

对酸奶中的肽类物质进行了提取、纯化和初步分析,认为该肽类成分是一种糖肽复合物。     

人参糖肽PG-g的分离纯化与结构分析

本研究以人参根水提物为原料,通过超滤得超滤液,超滤液浓缩后进行活性炭柱分离纯化,分别以水、5%、30%、60%和95%乙醇洗脱。理化性质测定结果显示30%乙醇洗脱组份(PGO)含糖量最高,同时含有蛋白质。PGO通过Sephadex G-15及DEAE-Sephadex A-50纯化得到糖肽PG-g,其由Ara、GlcA和GalA组成。甲基化分析结果表明PG-g以GlcA与GalA为非还原末端,以(1→3)-连接的GalA和(1→6)-连接的GlcA为主链,分别在GlcA的C3位与GalA的C6位存在分支点,同时还存在(1→2,4)-连接的Ara。糖与肽之间通过Ara-Hyp糖苷键连接在一起。PG-g含有14种氨基酸,以Cys和Tyr含量最高。     

薄芝糖肽亲和层析纯化技术

目的研究硼配基亲和层析技术纯化薄芝糖肽的新方法.方法用乙酸铵缓冲液考察不同pH条件下加入不同浓度NaCl对薄芝糖肽吸附解吸的影响,找出静态最佳吸附解吸条件;依据Chase模型求出最大静态吸附容量、吸附常数以及动态吸附糖及蛋白的容量.结果在pH8.2、NaCl浓度加至0.15mol/L条件下薄芝糖肽的吸附量达到最大,因此为最佳吸附解吸条件;在此条件下的最大静态吸附容量qm=55.57mg/g湿基,吸附常数Kd=5.312g/L;动态吸附多糖容量为43.1mg/g湿基,动态吸附蛋白容量为10.3mg/g湿基.结论该系统使用的亲和层析能有效地分离纯化薄芝糖肽.     

引起文蛤暴发性死亡病原菌的分离和鉴定

本文从江苏吕泗文蛤养殖区发病文蛤和养殖水体中分离到5株优势菌(病蛤中分离到3株优势菌, 养殖水体中分离到2株优势菌), 人工感染实验结果显示, 菌株WG1702能引起供试文蛤发病, 死亡率为100%, 且发病症状与原发病症状相同, 提示该菌是引起文蛤大面积死亡的主要致病菌, 对其形态、生理生化特征、分类地位及致病性进行了初步研究, 菌株WG1702为革兰氏阴性菌, 直杆状, 生理生化指标为：赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、硝酸盐还原、甘露糖、氧化酶、甲基红阳性, 精氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、水杨素、V.P阴性。为确定该致病菌的分类学地位, 进行了16S rRNA分子鉴定, PCR扩增获得了大小约1.5 kb的16S rRNA部分基因片段, 对其序列进行了测定, 并进行同源性分析和系统进化树构建。结果表明, 该菌株与哈氏弧菌(DQ146937)同源性最高, 为97.4%, 结合形态、生理生化鉴定结果, 最后鉴定菌株WG1702为哈氏弧菌(Vibrio.harveyi)。     

文蛤花纹的形态及形成观察

通过研究辽宁、山东、浙江、江苏和广西沿海的文蛤(Meretrix meretrix)壳的颜色及花纹特征,发现这些地区的文蛤可以分为2种类型,即花纹明显型和不明显型.辽宁和山东海域的文蛤贝壳表面具有花纹,只有极少数文蛤个体贝壳表面没有花纹;其中1龄个体贝壳表面都具有花纹.江苏地区的文蛤群体中,绝大多数个体的贝壳表面没有花纹,仅有极少数个体贝壳表面具有花纹.浙江地区的文蛤外表与山东文蛤很相似.广西地区的文蛤绝大部分没有花纹分布.外套膜组织装片确定了文蛤外套膜中的黄色素带与贝壳的色泽及花纹有关.黑色素带则与文蛤的生长状态有关,生长速度快的文蛤黑色素带浓而宽.所以,随着文蛤年龄的增长,黑色素带的颜色逐渐减弱直至消失.     

文蛤MmASS基因克隆及生物信息学分析

利用RACE技术克隆获得文蛤精氨酸琥珀酸合成酶基因(MmASS)的cDNA序列全长,该基因全长为1 588 bp,共编码415个氨基酸,分子量为46.81 kD,理论等电点pI为5.51。预测蛋白序列包含6个保守区域,主要集中了ATP结合位点、天门冬氨酸L-Asp结合位点以及瓜氨酸L-Cit结合位点。氨基酸序列比对结果显示,MmASS蛋白序列的保守功能域与其他物种具有较高的相似度,说明该基因高度保守,可能与其他物种的ASS基因具有相似的功能。系统进化树分析结果表明,MmASS的预测蛋白序列与缢蛏、贻贝、牡蛎等双壳贝类的亲缘关系最近,符合进化规律。亚细胞定位预测结果显示,MmASS定位于细胞质的可能性最大。MmASS不同组织的表达特征结果显示,该基因在各个组织中广泛存在,在文蛤鳃组织中的表达量最高(P<0.05),其次是肝胰腺组织,由此推测MmASS参与调节文蛤各个组织的生理活动,可能在文蛤的免疫防御机制中发挥重要功能。     

小鼠Lewis肺癌组织中糖肽的分离纯化及其对肿瘤细胞与层粘连蛋白基质粘着的影响

小鼠Lewis肺癌组织经氯仿甲醇去除脂类,用木瓜蛋白酶消化,再经Sephadex柱层析分离得到总糖肽。它有明显地抑制小鼠Lewis肺癌细胞,S180肉瘤细胞及人巨细胞肺癌细胞与层粘连蛋白(Laminin,LN)基质粘着的作用;对层粘连蛋白受体(LN-R)与其配体的识别及结合也具有同样明显的阻断效应。糖肽的上述作用均具有剂量依赖性。进一步经ConA-Sepharose CL-4B亲和层析将总糖肽分为三个部分。与ConA不结合的糖肽部分对Lewis肺癌细胞与LN基质的粘着也具有剂量性抑制作用。     

硫酸糖肽的生物活性及药理作用

黏多糖类物质独特的生物活性已成为生物化学和医学领域的热点。硫糖肽作为黏多糖类的一种,具有广泛的抗炎、抗溃疡作用,尤其是预防和治疗溃疡方面的优势引起人们越来越多的关注,具有广阔的药物开发和应用前景。本文就硫糖肽的生物活性及其药理作用展开综述,并结合硫糖肽的市场需求和研究现状进行了展望。     

云芝菌丝体多糖的分离纯化研究

利用热水抽提从云芝菌丝体中提取胞内多糖,初步纯化后,用DEAE-Sepharose CL-6B进行分离,从中分离出两个带电荷多糖组分即CVP-I和CVP-Ⅱ,对这两个组分分别用Sepharose CL-6B凝胶柱层析进行纯度鉴定,均出现单一峰,然后用紫外扫描发现这两个组分均出现蛋白多糖的特征吸收,从而可以判断这两个组分是蛋白结合多糖。     

镉离子对文蛤肝胰腺超微结构的影响

本文以文蛤(Meretrix meretrix)为实验对象,将其在不同浓度镉溶液(0、1.5 mg/L、3 mg/L、6 mg/L)中染毒5 d,并利用透射电镜技术分析文蛤肝胰腺细胞的超微结构变化。结果表明：镉对文蛤肝胰腺细胞超微结构的影响较大,主要表现在对内膜系统和线粒体的破坏上,其中线粒体嵴减少,肿胀变形,逐渐空泡化;粗面内质网由原先的板层状结构解体,形成许多大小不同的小泡。微绒毛脱落并逐渐减少,部分空泡化,高尔基体膜也有扩张的现象。膜性结构形成的空泡中出现沉积物,核膜出现内陷。镉离子破坏了文蛤肝胰腺细胞膜和主要细胞器的结构,影响了肝胰腺细胞的正常生理机能,随着镉溶液浓度的升高,对肝胰腺细胞结构的破坏性也增强。     

锌诱导金属硫蛋白在文蛤不同组织中的表达

采用体外暴露法对文蛤Meretrixmeretrix进行锌(0、1.5mg/L、3mg/L、6mg/L)染毒,研究不同染毒浓度的锌离子在不同染毒时间下,诱导金属硫蛋白(metallothionein,MT)在文蛤足、肝胰腺、鳃、外套膜组织中的表达差异。取经不同浓度的锌溶液在染毒2d及4d后的不同组织匀浆、离心后经Bio-GelP-10凝胶柱层析纯化,用TU-1810紫外可见分光光度计测定每个样品中金属硫蛋白的吸光值。实验结果显示:同一浓度锌离子染毒后,MT在文蛤4个不同组织中的表达量差异较显著,一般为足>肝胰腺>外套膜>鳃;不同染毒浓度的锌离子在不同染毒时间下诱导MT在不同组织中的表达也不同,具有一定的组织差异性和规律性。     

胰蛋白酶酶解文蛤的工艺条件

用正交试验法确定胰蛋白酶酶解文蛤的最佳工艺条件 ,用薄层层析和氨基酸自动测定仪鉴定酶解液中氨基酸的种类和含量 ,进一步判定酶解效果。结果表明 :在 5 0℃ ,加酶量 2 %,pH8.0 ,酶解 8h的酶解效果最好。层析发现 ,酶解温度为5 0℃的提取液含氨基酸较全面 ,氨基酸自动测定仪测定显示 ,胰蛋白酶酶解法的文蛤提取液中氨基酸的含量大于热水提取法的含量。     

超声波提取文蛤中氨基酸的工艺

采用正交试验法探讨超声波提取文蛤中氨基酸的最佳工艺条件,用高效液相色谱法测验提取液中氨基酸各组分的含量,用原子吸收光谱法测微量元素及重金属。结果表明:提取的最佳工艺条件是料剂比200g·L-1,60℃,中等强度的超声波处理10min。与未处理比较,氨基酸总量提高,蛋白质含量微增,铜、铅、铬含量增多,铁、汞含量降低,锰含量不变。     

文蛤微卫星DNA的筛选及其特性分析

采用磁珠富集分离法从文蛤(Meretrix meretrix)的基因组中筛选得到49条微卫星DNA序列,其中两碱基重复有3种类型36个序列,四碱基重复有14种类型26个序列.重复次数在5～30之间的序列占75.6%,30次以上重复的序列占24.4%,最高重复次数为100.根据重复单元的排列特点,完美型、非完美型及混合型序列所占比例分别为61.2%、14.5%和24.5%.本研究中构建的文蛤微卫星文库将在文蛤种质资源评价及分子遗传学研究中发挥作用.     

文蛤受精及早期胚胎发育过程的细胞学观察

用普通光镜、荧光显微镜技术和石蜡切片技术三种方法,对文蛤卵在受精及早期胚胎发育过程中的外形和核相变化进行了详细观察。结果表明:文蛤成熟未受精卵呈圆球形,直径90.06μm±5.59μm,核相处于第一次成熟分裂中期;精子为鞭毛型,全长48.05μm±1.60μm,头部呈狭茧形,长度为3.06μm±0.17μm;精卵混合后,精子迅速附着于卵子表面,受精后5min-10min,精子进入卵内并明显膨胀,激活卵子启动两次成熟分裂;分别在受精后20min、30min,受精卵完成第一次和第二次成熟分裂,先后排出第一、第二极体;成熟分裂完成之后,精、卵核体积迅速膨胀到最大,核膜重新出现,形成弥散状的雌、雄原核;受精后35min左右,雌、雄原核在卵子中央发生染色体联合,共同排列在纺锤体的赤道板上,形成第一次有丝分裂的中期分裂相;受精后40min-45min,在纺锤丝的牵引下染色体被拉向两极,结果形成2个大小不等的卵裂球;受精后55min-60min,第二次卵裂结束,形成1大3小4个卵裂球,卵裂过程中的核相变化与第一次卵裂基本相同,只是卵裂方向是与第一次卵裂的卵裂沟呈基本垂直的纵裂;受精后80min-90min,第三次卵裂完成,仍为不等全裂,但自此次起开始进行螺旋分裂。此外,实验中也发现了少量的多精入卵、多极分离和天然三倍体等异常现象。     

红壳色文蛤F1代养殖群体多样性分析

运用形态学标记和分子标记对江苏省文蛤良种场红壳色文蛤F1代养殖群体(父母本为江苏野生红壳色群体)进行遗传多样性分析。用文蛤壳长、壳宽、壳高和体重4个可量性状进行形态学数据的聚类分析,显示可量性状变异系数在38.48%-82.95%。运用7个引物微卫星基因座的多态性进行了养殖群体F1代的分子标记评估,结果表明,7个微卫星基因位点的平均等位基因数3.857 1,平均有效等位基因数2.583 0,平均观察杂合度0.565 3,平均期望杂合度0.565 3,Shannon指数平均数1.050 1,多态信息含量平均数0.522 5。综合形态学数据和分子标记的研究结果表明,红壳色文蛤江苏养殖群体F1代的遗传多样性处于中度偏高水平,具有较高的遗传改良潜力。     

海水盐度、温度对文蛤稚贝生长及存活的影响

在实验室条件下,研究了不同盐度（19个梯度）、温度（17个梯度）对文蛤稚贝生长和存活的影响.结果表明：文蛤稚贝的适宜生存盐度在6.5～39.5,最适生存盐度在9.0～31.0,适宜生长盐度在7.3～38.7,最适生长盐度在15.0～23.0;其适宜生存温度在4.0 ℃～36.1 ℃,适宜生长温度在7.0 ℃～35.4 ℃,较适宜生长温度在17 ℃～33.5 ℃,最适生长温度在24 ℃～27 ℃.文蛤稚贝对高温度、低盐度有较强的适应性.