6类抗生素耐药基因在耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌中的分布及分析

目的了解6类抗生素耐药基因在耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）中的分布情况,为抗生素的合理使用及感染控制提供依据。方法应用K-B纸片扩散法对6种抗生素进行药敏试验,聚合酶链反应（PCR）对6类耐药基因进行检测。结果 MRCNS对氨苄西林、红霉素、四环素、庆大霉素和莫匹罗星的耐药率分别为100%、87.50%、30.21%、61.46%和27.08%,未检测出对万古霉素的耐药菌株;mecA、ermB、ermC、msrA、tetM、tetK、aac（6’）/aph（2＂）、aph（3’）-III和mupA耐药基因的阳性检出率分别为100.0%、10.42%、77.08%、46.86%、5.21%、2.08%、75.00%、39.58%和25.00%,未检测出ermA、ant（6’）-I、vanA和vanB耐药基因。结论 MRCNS能同时携带多种抗生素耐药基因,为多重耐药菌。     

新生儿耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌败血症40例分析

目的：探讨耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）在新生儿败血症中的分布,临床特征及耐药性特点。方法：应用全自动血培养系统（BACTE/9050）,ATB细菌鉴定仪,从80例新生儿血培养阳性瓶中分离出40株MRCNS。应用ATB药敏系统,测定了青霉素等17种抗生素的耐药性。结果：80株细菌中,分离出40株MRCNS（占50%）,其中溶血葡萄球菌17株（42.5%)居首位,表皮葡萄球菌15株（37.5%),其他葡萄球菌8株（20%）。药敏结果显示多重耐药。结论：凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）已成为小儿血培养的第一位检出菌,主要为溶血葡萄球菌和表皮葡萄球菌,MRCNS占主导地位（达50%左右）,成为新生儿病房院内感染的主要致病菌。药敏结果显示MRCNS呈多重耐药,万古霉素及其他糖肽类抗生素是治疗MRCNS感染的首选药物,MRCNS在新生儿病房造成院内感染的危害性以及耐药性应引起广泛关注。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林溶血葡萄球菌

目的以PCR方法检测溶血葡萄球菌mecA基因为标准,评价头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和VITEKGPS109卡微量肉汤稀释法检测耐甲氧西林溶血葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus haemolyticus,MRSH）的敏感度和特异性。方法用PCR扩增临床分离的114株溶血葡萄球菌．检测特异性的mecA基因片段;头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和VITEK GPS109卡微量肉汤稀释法检测溶血葡萄球菌中耐甲氧西林的溶血葡萄球菌。结果114株溶血葡萄球菌经PCR法检测,MRSH有97株,占85．1％;头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和VITEKGPS 109卡微量肉汤稀释法检测MRSH分别有92、65、93株．与mecA基因法结果比较,头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和VITEK GPS109卡微量肉汤稀释法敏感性分别为94．8％（92／97）、67．0％（65／97）、93．8％（91／97）;特异性分别为i00％（17／17）、100％（17／17）、88．2％（15／17）。矿检验,头孢西丁纸片扩散法和mecA基因法差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法检测MRSH具有很高敏感度和特异性,是筛选和确认MRSH的一种可靠方法。     

耐甲氧西林葡萄球菌感染的调查与分析

目的调查住院患者耐甲氧西林葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococci,MRS)的感染情况,以便采取有效的防治措施。方法收集临床分离菌株,用mecA基因PCR扩增法鉴定MRS,并结合临床资料对本院MRS感染进行回顾性调查研究。结果住院患者标本中共收集到68株葡萄球菌,其中MRS 38株(阳性率为55.9%)。MRS感染主要多发于年龄>60岁,男性,合并多种疾病患者,科室分布以呼吸内科、泌尿外科及ICU病房为主。药敏结果显示MRS对万古霉素、利奈唑烷及喹努普汀的敏感率为100%,对替考拉宁敏感率为94.7%,对利福平的敏感率为57.9%,其余抗菌药物敏感率均<30%。结论及时了解本院患者MRS感染分布及耐药情况,有助于我们采取相应的监测及防治措施。     

凝固酶阴性葡萄球菌耐药基因和粘附基因检测及耐药性分析

目的了解凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）耐药基因和粘附基因的分布及其耐药性情况。方法收集45株凝固酶阴性葡萄球菌临床分离株,采用PCR检测其耐药基因mecA和粘附基因c弘知如B,并分析其耐药性。结果（1）凝固酶阴性葡萄球菌中mecA、cva、fn6pB的阳性率依次为86．7％（39／45）、11．1％（5／45）、71．1％（32／45）。（2）凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCoNS）的检出率为88．9％,对β-内酰胺类抗生素的耐药率都在80％以上,对利福平、左氧氟沙星、林可霉素的耐药率较低,未发现对万古霉素、利奈唑胺耐药菌株。结论CoNS中MRCoNS检出率很高,对常用抗生素耐药率高,且有一定的粘附能力,临床上应该根据药敏试验结果慎重及合理的使用抗生素。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药及其检测方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起医院感染的多重耐药菌,其有效的治疗药物为万古霉素。近年已发现对万古霉素耐受的金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌一旦对万古霉素耐药,临床将面临无药可供选择的局面。由于其所造成治疗上的困难,对其耐药机制的深入研究和该菌准确、及时的检出对于寻找新的治疗靶位和防止其播散有着极其重要的意义。本文就mecA耐药决定子、调节基因、染色体上的辅助基因对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药表达的影响及其表型和基因检测方法作一综述。     

206株凝固酶阴性葡萄球菌的临床分布及耐药性分析

目的分析凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）的临床分布及耐药情况,指导临床合理用药。方法采用ATB-Expression细菌鉴定系统对厦门市妇幼保健院2009年1月至2009年12月分离的206株CNS进行鉴定,用K-B纸片法检测其对苯唑西林等10种抗菌药物的敏感度。结果206株CNS菌分布于8类临床标本,血液、生殖道标本分离率较高,分别为52．91％、25．24％。耐甲氧西林（MRS）的发生率分别为：模仿葡萄球菌59．09％,溶血葡萄球菌95．83％,表皮葡萄球菌80．00％,人型葡萄球菌85．71％。对青霉素、红霉素耐药率较高,分别为85％和82％以上;对左氧氟沙星、克林霉素耐药性次之;未检出对万古霉素、替考拉宁耐药菌株。结论该院分离的CNS耐药性严重,MRS发生率高达59％以上,对红霉素、克林霉素高度耐药,临床应尽量减少青霉素、红霉素等药物的经验性用药,依据药敏结果选择抗菌药物进行治疗,防止耐药菌株爆发院感流行。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌消毒剂和抗生素耐药相关基因的聚类分析

目的了解解放军第98医院临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗菌药物耐药基因存在状况及菌株亲缘性。方法采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测50株MRSA中10种耐药相关基因,采用Average法对耐药基因进行聚类分析。结果50株MRSA中m ecA、aac(6')-aph(2')、tetM和erm基因均阳性,qacA、blaTEM、aph(3')-III和ant(4',4')基因阳性率分别为92.0%、40.0%、98.0%和4.0%,vanA和vanB基因均阴性。在1号、2号、3号菌株的qacA基因序列编码区域同一位点均有1个碱基发生有义突变(G→A),相应的苏氨酸(T)被异亮氨酸(I)所取代。根据耐药基因的聚类分析该50株MRSA可分为2个亚群,为院内感染所致。结论临床分离的MRSA耐药相关基因携带率很高;qacA基因存在有义突变为新的发现;MRSA可导致克隆传播院内感染,并存在暴发性流行。     

聚合酶链反应检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的研究

收集１３６株ＣＮＳ,用ＰＣＲ法检测ＭＲＣＮＳ,并与普通药敏试验比较,结果不相符的菌株进行诱导和抑制试验。结果表明ｍｅｃＡ基因阳性率为７８．７％,且ＰＣＲ产物经序列分析证明其为ｍｅｃＡ基因特异性产物。对１４株ｍｅｃＡ基因阳性而苯唑西林ＭＩＣ≤２μｇ／ｍｌ的细菌进行诱导试验后,其中８株苯唑西林ＭＩＣ值 提高,对４株ｍｅｃＡ基因阴性而苯唑西林（ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的细菌进行抑制试验后,其氨苄西林ＭＩＣ值     

耐甲氧西林葡萄球菌和肠球菌blaTEM及tetM基因检测

目的了解临床分离的耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)和肠球菌中blaTEM及tetM基因存在状况。方法分离50株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),7株耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)、5株耐甲氧西林溶血葡萄球菌(MRSH)、15株粪肠球菌和9株屎肠球菌,采用PCR技术检测耐药基因。结果MRSA、MRSE、MRSH、粪肠球菌和屎肠球菌中blaTEM基因阳性率分别为40.0%、57.1%、60.0%、6.7%和88.9%,tetM基因阳性率分别为100%、0%、0%、66.7%、0%。结论blaTEM基因阳性率在MRS中较高,在屎肠球菌中则很高;携带tetM基因是MRSA和粪肠球菌对四环素耐药的主要原因。     

Public transport as a reservoir of methicillin‐resistant staphylococci

Aims: The aim of this study was to explore the occurrence of methicillin‐resistant staphylococci in a large urban public transport system. Methods and Results: Samples were taken from hand rails, which passengers hold onto when they are standing. In total, 1400 swabs taken from 55 vehicles (trolleybuses, trams and buses) were examined. As many as 30·1% samples were positive for the presence of methicillin‐resistant coagulase‐negative staphylococci (MRCoNS), but none for methicillin‐resistant Staphylococcus aureus (MRSA). MRCoNS were isolated from all 55 vehicles. Nearly 50% of MRCoNS isolates displayed resistance not only to beta‐lactams, but at least to two or more other classes of antimicrobials as well. Conclusions: This study demonstrated widespread occurrence of MRCoNS on hand rails in public transport vehicles. MRSA was not detected. Significance and Impact of the Study: The recovery of methicillin‐resistant staphylococci from public transport system implies a potential risk for transmission of these bacteria in an out‐hospital environment.     

上海某高校新校区中抗生素抗性基因污染状况分析

探究新型环境污染物—抗生素抗性基因（ARGs）在校园环境中的分布状况。通过聚合酶链式反应(PCR)对上海某高校使用5年新校区不同区域污水检查井污泥中8种四环素类、4种磺胺类、7种β-内酰胺类、4种链霉素类和5种氯霉素类ARGs进行定性研究,并利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术分析污泥中细菌群落的多样性。结果显示,校园各区域中共检出19种ARGs,有8种ARGs的检出率大于50%,其中磺胺类抗性基因sulI、sulII的检出率最高,为100%。实验区及餐饮区的ARGs检出种类最多,均为14种,其次为宿舍区(12种),教学区的ARGs检出最少(8种)。通过DGGE分析细菌群落结构,证明该地区的ARGs分布与细菌多样性无明显关系。新校区使用5年但ARGs污染严重,可能是由于人类活动（尤其是科研活动）对ARGs的产生及扩散存在促进作用。此外,细菌群落多样性与ARGs种类的关系表明ARGs在环境中的迁移可能受到除细菌种类之外其他环境因素的影响。     

食品动物养殖环境中细菌耐药性研究进展

抗生素耐药性被世界卫生组织认为是21世纪人类面临的最大的公共卫生安全问题之一。近年来,抗生素耐药基因作为一种新型污染物而受到广泛关注。养殖场现已成为耐药基因的一个重要储库,耐药菌及耐药基因随着动物排泄物进入环境,从而加速了耐药基因在环境中的传播。畜禽养殖环境中耐药基因和耐药菌可能经食物链、空气等途径传至人类,给人类健康带来巨大威胁。文中结合最新文献,主要介绍了动物养殖场抗菌药物耐药菌和耐药基因的分布特点、耐药基因的持留和传播扩散、研究方法等方面的研究进展,为食品动物养殖环境的抗菌药物耐药性风险评估提供一定支持。     

大豆5个花叶病毒株系抗性基因的定位

以科丰 1号×南农 1138 2为亲本构建的RIL群体NJRIKY为材料 ,对群体进行了 5个SMV株系 (Sa、Sc 8、Sc 9、N1 、N3)的抗病性鉴定。结果表明 :大豆对 5个SMV株系的抗性均受一对显性基因控制。用Mapmaker 3 0进行连锁分析 ,发现Rsa与Rn1、Rn3和Rsc9均连锁 ,距离分别为 2 1 4cM、2 3 5cM和 35 3cM ;Rsc8只和Rn1连锁 ,距离为 35 8cM ;Rn1和Rn3之间的遗传距离最近 ,为 10 2cM。多点分析结果表明 :5个抗病基因的排列顺序和遗传距离为Rsc8 35 8cM Rn1 10 3cM Rn3 2 1 5cM Rsa 35 8cM Rsc9。根据RFLP、SSR标记分析结果构建了一套大豆遗传图谱 ,该图谱包含 2 2个连锁群、2 5 6个标记 ,总遗传距离为 30 5 0 9cM。将 5个抗病基因定位于N8 D1b W连锁群 ,有 3个RFLP标记和Rn1、Rn3都连锁 ,分别为A6 91T、K4 77I、LC5T。它们与Rn1、Rn3的距离分别为 15 0 4cM、17 82cM、15 37cM和 16 14cM、17 82cM、16 5 8cM。     

Antibiotic resistance in bacteria associated with coarse atmospheric particulate matter in an urban area

Aims: To assess antibiotic resistance in airborne bacteria associated with coarse particulate matter (PM10) in an urban area, with specific considerations about the Staphylococcus genus. Methods and Results: Disc diffusion test was performed on 243 microbial strains, isolated from PM10 in winter and summer and belonging to families Pseudomonadaceae and Enterobacteriaceae and genera Acinetobacter, Enterococcus and Staphylococcus. Staphylococci resistances were the most heterogeneous, being distributed among almost all tested antibiotics. Staphylococcus isolates resistant to some selected antibiotics were further investigated for the presence of the corresponding genetic determinants. Only tetK, which mediates the tetracycline resistance through the action of an efflux protein, was found in almost all resistant isolates. Conclusions: The lack of specific genetic determinants makes their transmission among staphylococci less likely. This may reduce the theoretical risk associated with the inhalation of airborne micro‐organisms. Significance and Impact of Study: Although the spreading of antibiotic resistant micro‐organisms is of particular concern in clinical settings, the origin of antibiotic resistance genes can be traced in natural environments. As behaviour, viability and transport of bacteria in the atmospheric compartment suffer from a lack of information, the evaluation of the actual risk posed by airborne micro‐organisms to human health is still challenging.     

气溶胶中抗生素抗性基因研究进展

抗生素的不合理使用导致细菌耐药问题日趋严峻,给人类健康造成巨大威胁。学者们对抗生素抗性菌和抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes, ARGs)在多种环境介质中的环境行为开展了大量研究。气溶胶作为ARGs的潜在储存库,是抗生素抗性基因在环境中的重要传播途径之一。目前缺乏对其来源、传播、人类接触和健康风险系统性的梳理。本文针对人类生活功能场所、养殖场、城市污水处理厂和医院等4类气溶胶研究的典型场所,重点综述了上述4类典型场所中气溶胶ARGs的来源、传播途径及对人体的暴露和对健康的危害,为气溶胶中ARGs的预防和控制提供参考。     

转双抗虫基因烟草的研究

用改造的雪花莲凝集素基因GNAmm与合成的苏云金芽孢杆菌(Bt)毒蛋白cry1Ac基因构建了带有双价基因的植物表达载体,在该表达载体中这两个基因的转录分别受笋瓜PP2启动子(SPP2P)和CaMV 35S启动子的调控。通过根癌土壤杆菌介导转化法,获得了一批抗卡那霉素的转化再生烟草植株。PCR检测及基因组DNA Southern blot\,Slot blot杂交分析的结果表明Gna基因和Bt基因已整合到烟草总DNA中。用Bt毒蛋白抗血清进行Western blot分析,转基因植株均有Bt杀虫蛋白的不同程度的表达。对转化再生烟草的虫试结果表明,在所受试的19株烟草中60%的植株上的棉铃虫在5天内死亡率达到100%,而且存活幼虫的生长发育受到明显抑制;蚜虫抑制生长试验表明,多数转化再生植株具有较强的抗蚜活性,平均能够抑制桃蚜50%～60%的蚜口密度,有的高达80%以上。以上结果表明利用这两个改造过的抗虫基因可以获得既抗虫又耐蚜的转双抗虫转基因植物。     

Permethrin Induction of Multiple Cytochrome P450 Genes in Insecticide Resistant Mosquitoes,Culex quinquefasciatus

The expression of some insect P450 genes can be induced by both exogenous and endogenous compounds and there is evidence to suggest that multiple constitutively overexpressed P450 genes are co-responsible for the development of resistance to permethrin in resistant mosquitoes. This study characterized the permethrin induction profiles of P450 genes known to be constitutively overexpressed in resistant mosquitoes, Culex quinquefasciatus. The gene expression in 7 of the 19 P450 genes CYP325K3v1, CYP4D42v2, CYP9J45, (CYP) CPIJ000926, CYP325G4, CYP4C38, CYP4H40 in the HAmCqG8 strain, increased more than 2-fold after exposure to permethrin at an LC50 concentration (10 ppm) compared to their acetone treated counterpart; no significant differences in the expression of these P450 genes in susceptible S-Lab mosquitoes were observed after permethrin treatment. Eleven of the fourteen P450 genes overexpressed in the MAmCqG6 strain, CYP9M10, CYP6Z12, CYP9J33, CYP9J43, CYP9J34, CYP306A1, CYP6Z15, CYP9J45, CYPPAL1, CYP4C52v1, CYP9J39, were also induced more than doubled after exposure to an LC50 (0.7 ppm) dose of permethrin. No significant induction in P450 gene expression was observed in the susceptible S-Lab mosquitoes after permethrin treatment except for CYP6Z15 and CYP9J39, suggesting that permethrin induction of these two P450 genes are common to both susceptible and resistant mosquitoes while the induction of the others are specific to insecticide resistant mosquitoes. These results demonstrate that multiple P450 genes are co-up-regulated in insecticide resistant mosquitoes through both constitutive overexpression and induction mechanisms, providing additional support for their involvement in the detoxification of insecticides and the development of insecticide resistance.     

土壤中抗性基因的产生,扩散传播以及消减的研究进展

近年来,土壤中残留的大量抗生素不可避免的导致耐药微生物和抗性基因的增加和扩散,引起一系列土壤污染和生态风险。作为一类新兴污染物,抗性基因的污染水平已经远远超出我们的预想,因此对土壤中抗性基因的分布水平、扩散传播及消减技术的研究刻不容缓。本文对国内外土壤中抗生素和抗性基因残留水平进行了总结分析,探讨了土壤中抗性基因的产生、扩散的内在动力和机制。同时,分析了土壤中抗性基因分布和扩散的影响因素,如:抗生素残留水平,土壤理化性质和环境条件等。在此基础上,探讨了土壤抗性基因阻隔和消减技术,包括传统降解方法:高温,光照催化、微波-H2O2-微生物联合处理技术等,并提出新型消解技术:取代活性基团、靶位修饰以及改变外排泵的通透性等。讨论未来在控制抗性基因生态风险,降低其在土壤中的丰度,有效阻截技术的发展趋势。