幽门螺杆菌的基因分型方法及其应用

近几年,有关幽门螺杆菌（ＨＰ）基因分型方法及其应用的研究取得了很大进展。基因分型方法包括：质粒分型、限制性内切酶分型（ＲＥＡ）、核糖分型、染色体ＤＮＡ脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）分型、多聚酶链反应限制性内切酶消化（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分型、任意引物ＰＣＲ（ＡＰ－ＰＣＲ）分型、ＰＣＲ单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分型和核苷酸序列分析等。基因分型方法广泛用于ＨＰ的研究,如基因图的构建、感染复发、耐药机     

糖单孢菌16S rDNA的PCR-RFLP分析

ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析适用于种和种间水平的多相分类研究。文章对ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法应用于糖单孢菌属分类有具体方法进行了探讨;报道了一组适于糖单孢菌属ＰＣＲ－ＰＦＬＰ分析的限制性内切酶,并用这组酶对６株糖单孢菌属分离株进行了研究,进一步探讨了实验菌株在该属的分类地位。同时指出了ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法应用中应注意的问题。     

定量多聚酶链反应及其在医学中的应用

定量多聚酶链反应（ＱＰＣＲ）是一种简便、快速的核酸定量方法,其中竞争性ＰＣＲ（ＣＰＣＲ）是最精确,也是目前研究最多的一种方法。本文概括介绍了ＣＰＣＲ的原理、方法及发展趋势,讨论了ＱＰＣＲ在病毒感染与疾病的发生、发展的关系,抗病毒性治疗监控及疾病传播等方面的应用,对其在免疫学、肿瘤学及其他方面的应用作了简要综述,     

多聚酶链反应在耐新青霉素Ⅰ金黄色葡萄球菌感染诊断中的应用

多聚酶链反应（ＰＣＲ）是８０年代后期发展起来的先进的体外基因复制技术,用ＰＣＲ技术检测各种病原体具有高度灵敏、特异,且简便、快速的特点。本文就ＰＣＲ在耐新青霉素Ⅰ金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）感染诊断中的应用作一综述。     

原位多聚酶链反应在人巨细胞病毒诊断中的应用

逝年来人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染率高,检测方法进展人,有巨细胞包涵体细胞（ＣＣＩＣ）检测、病毒分离、免疫检测、原位杂交（ＩＳＨ）、多聚酶链反应（ＰＣＲ）等法。目前有人把ＩＳＨ与ＰＣＲ结合创立了原位多聚酶链反应法（ＩＳＰＣＲ）,此法更准确、更敏感特异,更有地ＨＣＭＶ感染的早期快速诊断。本文就ＩＳＰＣＲ的原理、程序、特征主临床应用作一综述。     

多聚酶链反应在细菌性腹泻病诊断中的应用

为了解国外多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术在细菌性腹泻病诊断中的应用，本文就ＰＣＲ检测各种腹泻致病菌，一次性ＰＣＲ检测多种腹泻致病菌，ＰＣＲ用于各种腹泻致病菌种属、群及亚群的分类及其检测中所遇到的抑制物处理分别进行综述。     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与ＤＮＡ相连建立了免疫ＰＣＲ技术,并将其用于检测甲胎蛋白（ＡＦＰ）,其敏感性比ＥＬＩＳＡ法高１０４。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断     

长片段PCR技术

长片段ＰＣＲ技术刘建伟,徐湘民（第一军医大学分子生物学研究所,广州５１０５１５）关键词长片段ＰＣＲＰＣＲ技术是１９８３年由Ｍｕｌｌｉｓ首创的一种通过体外酶促扩增反应快速获取特定ＤＮＡ序列的方法,已在分子生物学、分子遗传学、医学和法医学等领域得到广泛应...     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲脂蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断。     

多聚酶链反应技术诊断结核病的进展

多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术在结核病诊断上发展迅速。本文就①结核菌ＤＮＡ提取技术;②引物的设计;③用于诊断结核的ＰＣＲ方法;④ＰＣＲ产物的检测方法;⑤ＰＣＲ的敏感性和特异性;⑥ＰＣＲ临床应用和注意事项等方面,简述该技术在结核病诊断中应用的进展和需要进一步研究的问题。     

分子生物学技术在研究肠道病毒性心肌炎,赆肌病中…

肠道病毒性心肌炎、心肌炎研究是国家“九．五”攻关项目之一。本文作者结合自己在英国伦敦大学实验室的直接经验,综述了用分子生物学技术如膜相核酸杂交、原位杂交以及采用ＴａｑＤＮＡ多聚酶催化的循环ＤＮＡ序列法,免疫多聚酶链反应（ＰＣＲ）、原位ＰＣＲ等技术,进一步证明了肠道病毒是心肌炎的主要病原,并可用ＰＣＲ产物分析病毒型别。     

用微孔板杂交技术检测聚合酶链反应扩增产物

用微孔板杂交技术检测聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产和提将ＰＣＲ技术和类似ＥＬＩＳＡ的技术结合起来的一种方法,它使ＰＣＲ的敏感性提高１００倍,通过探针杂交使其更具特异性,并可通过酶联检测系统使结果客观化,同时又具有简便、快速的特点,在基础和临床应用上前景看好。     

PCR和Southern Blot检测土拉弗氏菌气溶胶

为提高检测土拉弗氏菌的特异性和敏感性,建立了土拉菌ＰＣＲ及核酸杂交检测方法。运用平板计数、多聚酶链反应对土拉菌气溶胶稳定性进行了比较,结果表明ＰＣＲ具有较高灵敏度,并且在采样后３小时ＰＣＲ就可以得出定性结果,而平板计数则需要３～７天。采用ＰＣＲ法合成了土拉菌３７６－ｂｐ探针,分别对细菌菌液、５６８－ｂｐＰＣＲ产物和气溶胶样品进行杂交,结果表明菌悬液直接杂交可检出１０５ＣＦＵ左右的细菌,检测ＰＣＲ产物可达４０ｐｇ。ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹相结合有利于细菌的分离鉴定     

用RFLP和PCR—RFLP技术研究东北虎和华南虎线粒体DNA多态性

采用ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ和ＰＣＲＲＦＬＰ技术研究了东北虎和华南虎的ｍｔＤＮＡ的多态性。在ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ研究中,分离纯化了东北虎和华南虎肝、肾和心脏组织的ｍｔＤＮＡ,用２０种识别６碱基对的限制性内切酶消化,结果只有１种限制性内切酶（ＸｂａⅠ）检测到多态性片段,其余１９种限制性内切酶消化产生的限制性格局在东北虎和华南虎完全一致。在ＰＣＲＲＦＬＰ研究中,用ＰＣＲ技术分别扩增了东北虎和华南虎ｍｔＤＮＡ的控制区（ｃｏｎｔｒｏｌｒｅｇｉｏｎ）,用８种识别４碱基对的限制性内切酶分别对扩增产物进行消化,结果只有１种限制性内切酶（ＲｓａⅠ）检测到多态性片段。ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ及ＰＣＲＲＦＬＰ的结果均提示东北虎和华南虎之间的遗传距离极小。这可能与下列因素有关：两者分布区间无天然隔离屏障;具有强扩散能力;近几百年才被相互隔离。     

一种微生物检测的新方法——原位多聚酶链反应的原理和应用

原位多聚酶链反应（ＩＳＰＣＲ）是近几年发展起来的新型ＰＣＲ技术,它能在细胞或细胞切片上对待检的低拷贝基因先行扩增,然后再行原位杂交检测。因而兼具ＰＣＲ快速、灵敏、特异性强和原位杂交精确定位的特点,并已被用于多种病原微生物的检测。     

用分子生物学技术对草菇进行菌株鉴别

利用ＡＰ－ＰＣＲ和ＲＡＰＤ技术对三个草菇菌株进行鉴别,其结果与用草菇菌株Ｖ３４基因文库中的中等重复序列为探针进行限制性内切酶长度多态性分析（ＲＦＬＰ）,及对编码核糖体５．８ＳｒＲＮＡ的ＤＮＡ（ｒＤＮＡ）进行ＰＣＲ扩增后的产物进行限制性内切酶长主多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）的结果相一致。这一结果显示出用这四种方法对草菇菌株进行鉴别具有相似的效果。同时用这四种方法构建的分子生物学标记显示出这三个菌株     

多聚酶链反应在肺炎支原体检验中的应用

多聚酶链反应（ＰＣＲ）用以检查肺炎支原体（ＭＰ）近年已成功地用于临床标本,用ＰＣＲ检测的灵敏度比普通培养法高１０－１００倍,特异性强,与其他支原体无交叉反应,为临床诊断提供了一种快速、准确的方法。     

随机引物多聚酶链反应及其应用

随机引物多聚酶链反应（ＲＡＰＤ）作为新近发展起来的一种分析遗传多态性的新手段，已成功地应用于微生物、植物、动物细胞群体遗传结构多态性研究，特异基因的克隆和亲缘关系的分析等。它弥补了标准ＰＣＲ技术的不足，扩展了ＰＣＲ的应用领域，具有广阔的前景。     

AFLP分子标记及其在植物育种上的应用

扩增酶切片段多态性（ＡｍｐｌｉｆｉｅｄＲｓｔｒｉｃｉｔｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,简称ＡＦＬＰ）是由Ｚａｂｅａｕ等１９９２年发明的一项新的ＤＮＡ指纹技术,它结合了ＲＦＬＰ和ＰＣＲ技术的特点,具有ＲＦＬＰ技术的可靠性和ＰＣＲ技术高效性,其基本原理是对基因组ＤＮＡ酶切片段的选择性扩增,ＡＦＬＰ扩增片段的谱带数取决于采用的内切酶及引物３′端选择碱基的种类数目和所研究基因组的复杂性,实验     

SIV模型猴石蜡包埋淋巴结组织DNA的提取及病毒基因检查

从取材于３只ＳＩＶ感染治疗猴和４只ＳＩＶ艾滋病模型猴治疗前后的１１份石蜡包埋淋巴结活检组织中提成基因组ＤＮＡ,分别用ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ方法检测ＳＩＶ病毒基因,ＰＣＲ共检出１０份阳性,巢式ＰＣＲ检测１１价样品均阳性,而同期采样的猴外周血标本病毒分离仅３份阳性,ＰＣＲ扩增产物的特异性用限制性内切酶酶切反应得到证实。实验说明,从淋巴结组织中检测ＳＩＶ的病毒基因较外周血病毒分离更能真实地反映病毒感染状况,本研究将对全面和正确评价艾滋病药吻和疫苗治疗效果提供帮助。