一株荧光假单胞杆菌的分离鉴定与反硝化特性

【目的】从污水厂的活性污泥中获得一株高效反硝化细菌。【方法】采用低温驯化,进行初筛、复筛选取一株反硝化活性最高的菌株,命名为L2,通过形态学、生理生化特征及16S r RNA基因序列分析研究其分类地位,系统研究理化因素对该菌株反硝化性能的影响。【结果】菌株在低温条件下能够稳定高效地进行反硝化,鉴定该菌株为荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens),其反硝化最适接种量为10%,温度为20°C,p H为7.0,盐浓度为0.5%,碳源为葡萄糖,C/N为5.0,能够耐受较高初始硝态氮浓度。【结论】菌株L2是一株耐低温、耐高浓度初始硝态氮、耐低C/N、兼性厌氧、高效反硝化的荧光假单胞杆菌。     

荧光假单胞菌生防机理的研究进展

荧光假单胞菌是植物根际促生细菌(Plant Growth Promoting Rhizobacteria,PGPR)具有分布广、数量多、营养需要简单、繁殖快、竞争定殖力强的特点。它们能通过产生多种次生代谢物及有效的根际定殖防治植物病害,成为植物生防控制的重要研究对象。主要论述了荧光假单胞菌对植物病害生物防治机理的研究进展。     

高产木质素酶荧光假单胞杆菌L-520的筛选及其发酵工艺优化

利用苯胺蓝鉴别培养基及产酶培养基进行菌种筛选,从甘肃兴隆山分离得到的10株菌株中筛选到一株高产木质素酶活力的菌株L-520,对该菌株进行16S rDNA鉴定,确定该菌为荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)。分别考察了接种量、装液量,初始pH对L-520发酵产酶的影响,以及碳源、氮源对木质素酶活力的影响。结果得到最佳培养基为:蔗糖1%,NH_4Cl 0.2%,KH_2PO_4 0.1%,MgSO_4?7H_2O 0.05%。优化后的发酵条件为:初始pH 5,接种量3%,装液量50%。经发酵工艺优化后,漆酶(Lac)、木质素过氧化物酶(LiP)、锰过氧化物酶(MnP)三种酶活分别为16.43 U/L,106.32 U/L,95.89U/L,与初始酶活相比分别提高了8.7、14.74、11.09倍。本研究筛选得到的荧光假单胞杆菌有助于染料废水中偶氮染料的降解。     

荧假单胞杆菌化感作用的初步研究

1　引　　言化感作用 (Allelopathy)是指一种植物或微生物通过产生化学物质而对其它生物产生的直接或间接的刺激或抑制作用[7] .虽然有关高等植物之间化感作用的研究已有大量报道 ,但微生物对高等植物的化感作用研究报道却较少 ,尤其是细菌在生态系统中的化感作用往往被忽视[1] .荧光假单胞杆菌 (P .fluorescens)是定殖于植物根际的优势细菌种群 ,此类细菌以其分布广、适应能力强、繁殖速度快、易于人工培养等特点 ,成为最具生防潜力和应用价值的生防菌[5] .对陕西农田土壤有益微生物的筛选研究中发现 ,一株荧光假单胞杆菌培养液对番茄灰霉…     

向日葵枯萎病拮抗芽胞杆菌的筛选与生防评价

目的 筛选向日葵枯萎病拮抗芽胞杆菌菌株并研究其抗菌谱,探讨环境条件对菌株抑菌活性的影响并通过植物栽培完成生防评价。 方法 从向日葵根际土壤中选择性分离芽胞杆菌,通过5点对峙法确定1株高效拮抗菌株,进行鉴定后,测定其抑菌谱;单因素实验探讨环境条件对抑菌活性的影响;向日葵发芽实验完成生防评价。 结果 确定1株高效的枯萎病拮抗菌株WBFL-1,经鉴定为枯草芽胞杆菌,该菌对镰刀菌属具有广谱抗性,其抑菌活性的最佳条件是温度40 ℃,pH值7.0,接种量150 μL,发酵时间48 h。生防评价表明该菌对枯萎病的拮抗效果显著。 结论 该菌可为农作物枯萎病的生物防治提供有效菌种储备。     

影响枯草芽胞杆菌和荧光假单胞菌原生质体再生的因素

目的：为了提高再生率,对影响革兰阳性菌枯草芽胞杆菌KR株和革兰阴性菌荧光假单胞菌B13株原生质体再生的因素进行研究。方法：研究了酶解时间,再生方式,再生培养基中稳定剂的种类,Ca^2＋、Mg^2＋、琥珀酸钠、L-色氨酸的浓度及培养基的放置时间对KR和B13株原生质体再生的影响。结果：对KR株酶解20min,采用夹层培养,再生培养基中加入0.6mol/L蔗糖、0.03mol/L Ca^2＋、0.02mol/L Mg^2＋、0.3mol/L琥珀酸钠、0.2mol/L L-色氨酸,培养基在37℃放置72h,原生质体再生率可达42.7%;对B13酶解15min,采用夹层培养,培养基中加入0.6mol/L NaCl、0.02mol/L Ca^2＋、0.01mol/L Mg^2＋、0.3mol/L琥珀酸钠、0.1mol/L L-色氨酸,培养基在37℃放置48h,原生质体再生率可达15.3%。结论：影响革兰阳性菌枯草芽胞杆菌KR株和革兰阴性菌荧光假单胞菌B13株原生质体再生的因素是不同的。     

荧光假单胞杆菌AbⅢ745-6抑菌物质分离纯化和结构鉴定

荧光假单胞杆菌AbⅢ745-6能够抑制稻瘟病菌、小麦全蚀、番茄枯萎等多种植物病原菌的生长。AbⅢ745-6的发酵液预处理后,采用液-液萃取得到3种粗品,经液相色谱制备主要的单一组分获得强抑菌物质F-4。此化合物为红棕色油质物,可溶于乙酸乙酯、甲醇、丙酮等多种有机溶剂,微溶于水。化学结构分析初步命名F-4为苯胺基甲基乙酸,这是在荧光假单胞杆菌中发现的一种新抑菌活性物质。     

荧光假单胞杆菌P13菌株对油菜化感作用的研究

通过化感试验研究荧光假单胞杆菌P13菌株对油菜种子萌发、幼苗生长的影响及其在油菜根际土壤和根部定植的能力。结果表明,P13菌株发酵液对油菜种子萌发没有明显的促进作用,稀释10倍的菌体发酵液处理种子与对照组无显著差异,而低浓度和高浓度都抑制种子萌发;田间试验发现P13菌株能促进植物幼苗生长,根长、苗高、干重和长1片叶子的株数均与对照组差异显著;1周内P13菌株在油菜根际土壤和根部定植良好,定植数量均达到107cfu/g以上。说明P13菌株可被开发为微生物菌剂,但在施用时不宜用作种子处理剂。     

荧光假单胞杆菌2P24中生防相关调控基因gacS的克隆和功能分析

荧光假单胞杆菌2P2 4菌株分离自小麦全蚀病自然衰退土壤,可产生多种次生抗菌物质,对一些作物土传病害具有较好的防治能力。通过PCR介导的方法从荧光假单胞杆菌2P2 4的基因组文库中克隆到调控基因gacS。序列分析发现,该基因长度为2 75 4bp ,编码917个氨基酸的肽链。此肽链与Pseudomonaschlororaphis双因子组分之一的感受激酶GacS相似性达91% ,与P .fluorescensCHA0的GacS相似性为89%。与野生菌株2P2 4相比,gacS基因的缺失突变体完全丧失产生抗菌代谢物2 ,4_二乙酰基间苯三酚、氢氰酸、蛋白酶的能力。拮抗试验中,gacS缺失突变体丧失对小麦全蚀病菌的拮抗作用,温室生物测定显示gacS的缺失突变体对小麦全蚀病的生防能力大幅下降。但是gacS基因的互补突变体能够恢复产生抗菌次生代谢物的能力,且重新获得拮抗能力和生防能力。由此证明GacS是生防菌株2P2 4中一个控制生防因子并影响生防效果的重要调控元件。     

荧光假单胞菌的条件致病性

作者从血、尿标本中分离出12株荧光假单胞菌,在研究生物学性状的基础上探讨了本菌的条件致病性问题,结果显示,凡能使机体免疫力下降的各种原因均可导致本菌感染。治疗本菌感染,必须进行药敏试验,选择有效的抗生素。     

烟草炭疽病拮抗生防菌的筛选

本文应用荧光假单胞杆菌的16S-23S ribosomal RNA序列以及部分抗菌素合成基因序列的PCR鉴定引物,对从烟草根际分离到的400份细菌进行了鉴定,结果获得了21份含Prn(硝吡咯菌素)合成酶基因的荧光假单胞杆菌和1份含有DAPG(2,4-二乙酰基藤黄酚)合成酶基因以及PCA(Phenazine-1-carboxylic acid,吩嗪-1-羧酸)的荧光假单胞杆菌.室内实验结果表日月,含DAPG和PCA的荧光假单胞杆菌对烟草炭疽病具有明显拮抗作用.     

番茄茎内生细菌的分离鉴定及青枯病拮抗菌的筛选

采用化学法进行表面灭菌处理,运用平板涂布法及平板划线法从番茄茎内得到17株内生细菌.通过形态观察和生理生化指标鉴定,17株内生细菌分属于6个属,即葡萄球菌属(Staphylococcus)、短芽孢杆菌属(Brevi-bacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、棍状杆菌属(Clavibacter)、欧文氏菌属(Erwinia)和乳杆菌属(Lactobacillus).采用滤纸片法从17株内生菌中筛选出1株对青枯菌(Pseudomonas solanacearum)有拮抗作用的菌株,编号为TS-06,属于芽孢杆菌属(Bacillus).其抑菌圈半径为2.5 mm.     

拮抗菌株抑菌活性的保藏试验研究

研究不同保藏介质、温度和时间的综合因素对B-298菌株活性的影响。为生产和研究提供能保持该菌株抑菌活性的适宜保藏方法。试验结果表明：介质、温度、时间的交互作用对菌株细胞存活率和代谢产物拮抗效应的影响都存在显著性差异;细胞存活率和拮抗效应与保藏时间呈反比;菌株保藏680 d,应用甘油超低温保藏法,菌株细胞存活率和抑菌活性最高,而采用斜面常温保藏,细胞存活率和抑菌活性最低。     

防烟叶霉变菌株对烟叶霉变的影响

为有效防止烟叶霉变,采用平板对峙培养的方法,就3个防烟叶霉变菌株对霉变菌的抑制作用进行了研究．结果表明,JMBl42、B112、B329对供试霉变菌皆表现出一定的抑制作用,对不同霉变菌的平均抑制率分别为51．6％、52．9％、53．7％．3个防烟叶霉变菌株分别以每mL 10^7、10^8、10^9 cfu(colony当当forming unit)13个浓度单独处理和每mL10。cfu浓度混合处理烟叶,结果表明,JMBl42菌株每mL10,cfu处理浓度效果最好,与对照差异极显著,其次为B112菌株每mL10^8cfu处理浓度,但它与对照差异不显著,B329菌株处理效果最差,混合施用结果与对照差异不显著．由此确定JMBl42菌株每mL10^9cfu处理浓度为仓储烟叶防霉变最佳处理参数、     

假单胞菌M18rsmA-突变株的构建及其对Plt和PCA合成的区别性调控作用

假单胞菌(Pseudomonas sp．)M18是促进植物生长的根际细菌,能产生吩嗪-1-羧酸(PCA)和藤黄绿菌素(Plt)两种不同的抗生素抑制植物病原菌,保护植物免受病害。运用PCR方法,从M18基因组中,扩增出rsmA基因部分片段,并以该片段为探针,从M18的基因组柯斯文库中筛出阳性克隆,切取带有rsmA基因及两侧序列的1．5kb片段,中间插入编码Km‘的DNA片段,获得rsmA^-体外突变体。运用同源重组剔除技术,构建了M18菌株的rsmA突变株M18R^-。突变株M18R^-生物合成Plt的能力比野生型M18提高4倍,但是,PCA产量仅为野生型的20％。研究结果表明,全局性调控基因rsmA可能通过不同的机制区别性地影响Plt和PCA的生物合成。     

Genetic and ecotypic structure of a fluorescent Pseudomonas population

Fluorescent pseudomonads are among the most numerous bacteria found on plant surfaces and the activity of certain isolates can affect plant growth. In 1993, 108 fluorescent Pseudomonas isolates were collected on a single sampling occasion from the leaves of sugar beet plants grown at the Oxford University Field Station, Wytham. Isolates were obtained from 54 different leaves, from nine plants, and characterized using 10 allozyme and 23 biotype markers. Statistical analysis of the combined data revealed five biotypic traits which permitted a rational classification of the sample. Analysis of the allozyme data showed that the population was in overall linkage disequilibrium. Clonality was also observed after subdivision of allozyme data along spatial and habitat levels. However, two genetically defined subgroups were in linkage equilibrium which suggests the possibility of frequent large-scale recombination among certain isolates. A significant correlation between isolate distribution and habitat (leaf type and plot) indicates that the population has ecotypic structure.     

红色荧光蛋白基因标记产鼠李糖脂铜绿假单胞菌SG及其在油藏中的应用

【背景】微生物在油田注采系统中的迁移直接影响到油藏微生物群落组成及其在油田生产中的应用。然而,由于缺少特异性标记,很难将目标微生物同众多的土著微生物区分开。因此,需要构建携带特异性基因的微生物菌株。【目的】为了有效追踪定位微生物在油田注采系统中的迁移,本文构建一株红色荧光蛋白标记假单胞菌。【方法】运用染色体同源重组的方法,将带有组成型表达启动子的红色荧光蛋白编码基因(red fluorescent protein gene,rfp)插入到一株分离自油藏环境且产鼠李糖脂的铜绿假单胞菌SG染色体上编码β-内酰胺酶基因内部,获得标记菌株SG-rfp。【结果】构建的菌株SG-rfp能够在非诱导条件下表达红色荧光蛋白,而且对氨苄青霉素、卡那霉素、链霉素和庆大霉素不具有耐受性。与野生型菌株SG相比,构建的SG-rfp菌株也能够在有氧和缺氧条件下产生鼠李糖脂,在岩芯驱油实验中能够较好地提高原油采收率。此外,应用菌株SG-rfp,本文研究并证实了微生物在含油多孔介质中的迁移扩散及所受限制。【结论】本文所构建的菌株SG-rfp为深入研究微生物在油田注采系统中的迁移及微生物在油田生产中的应用提供了有力工具。     

两株乳酸杆菌益生菌特性的研究

对两株乳酸杆菌作为益生菌的特性进行分析。采用人工胃液、人工肠液,及体外培养人结肠癌细胞株HT-29,模拟 上消化道环境,检测候选菌株L.acidophilus1.1878和L.rhamnosus1.120对上消化道环境的耐受性和粘附性;以琼脂扩散打孔 法,检测候选菌株SCS对4种常见肠道致病菌的抑菌能力。结果表明,两株候选菌株可耐受pH>3.0的人工胃液,及0.2%的 胆盐浓度;光镜观察L.acidophilus1.1878、L.rhamnosus1.120粘附于HT-29细胞边缘,平均4.5～7个/细胞,扫描电镜观察 L.acidophilus1.1878、L.rhamnosus1.120粘附于HT-29细胞表面的刷状缘,且细胞表面结构完整;对4种肠道致病菌的抑菌 圈直径均在12mm以上。证明实验观察的两株乳酸杆菌具有较好的耐酸、耐胆盐及粘附、抑菌特性,符合益生菌的标准。