硫酸西棱霉素微生物检定法研究

以短小芽孢杆菌为检定菌,比较了培养基原料对抑菌圈的影响,进行了检定菌的分离和敏感活性测定,标准曲线的可倍限率检测,一剂量和二剂量法的可靠性试验,样品效价测定和统计分析,确认我们建立的硫酸西梭霉素的生测方法是准确、可行的。     

西梭霉素产生菌斜面孢子培养条件研究

采用正交法设计斜面培养基,对西梭霉素产生菌的孢子生长所需要的碳源、氮源、生长因子、无机盐等作全面考察,确定了最佳斜面配方,其生物效价比原配方提高２６％。并考察了斜面孢子培养时间,冰箱保藏时间对孢子量和生物效价的影响。     

放线菌素23-21微生物检定法及HPLC法比较

采用微生物检定法测定放线菌素２３－２１的抗菌活性,检定菌为枯草芽孢杆菌。当放线菌素２３－２１的浓度为０．９１～４．３７μｇ／ｍｌ时,其抑菌圈直径与反应剂量有线性关系。经生物学统计分析,实验结果可靠。并与高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）进行对照检测,实验结果基本吻合。     

耐碱性木聚糖酶基因在短小芽孢杆菌中高效分泌表达的研究

从木聚糖酶高产短小芽孢杆菌 (Bacilluspumilus)BP5 1中克隆得到木聚糖酶基因xynA ,将其构建在芽孢杆菌表达载体pWH1 5 2 0中得到重组质粒pWSX1 1。xynA由木糖诱导xylA启动子调控xynA表达。采用同源高效表达策略 ,以原生质体转化方法将pWSX1 1转回原始菌株BP5 1中 ,获得重组菌株BPX1 1。通过木糖诱导重组菌株中的xy nA基因高效分泌表达 ,使木聚糖酶产酶活力比原菌株BP5 1提高了 87% ,同时对重组表达的木聚糖酶的酶学性质进行了初步研究     

一株A型肉毒梭状芽孢杆菌的分离与鉴定

从四川成都、重庆、若尔盖,新疆乌鲁木齐,宁夏固原共采集土样319份进行肉毒梭状芽孢杆菌的分离。在若尔盖土样中分离到一株厌氧芽孢杆菌,按《伯杰细菌鉴定手册》(第八版)的方法进行了生物学测定、生理生化试验,并测定了其DNA中G+C mol为24．9％,鉴定为肉毒梭状芽孢杆菌,经血清学试验进一步鉴定为A型肉毒梭菌,编号为As-3。     

酪酸梭状芽孢杆菌低成本培养基的优化

本文重点在于提高酪酸梭状芽孢杆菌活菌数量,降低发酵培养基成本。通过对发酵培养基中不同碳源、氮源、生长因子等进行单因素研究,得到最佳培养基组成：可溶性淀粉10/L,豆粕（中性蛋白酶水解3h）20g／L,玉米浆3g／L。用此培养基在37℃培养24h,采用高层半固体琼脂试管法对酪酸梭状芽孢杆菌进行活菌计数,活菌数可达8．2×10^8cfu／mL.培养基中添加K2HPO45g／L、MgSO4·7H2O0．2g／L、MnSO3·H2O0．2g/L培养32h时,酪酸梭状芽孢杆菌芽孢转化率可达95％。     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯和性质的研究

由短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)209产生的胞外碱性蛋白酶的粗酶制剂(5×10 4u／g),经硼砂NaOH缓冲液抽提,硫酸铵沉淀,Sephadex G一25脱盐,DEAE-纤维素柱层析,冷冻干燥获得部分纯化的酶。纯酶的活力为199x10u/g,比活力提高2,6倍。此酶的最适pH8．5—9．0,在pH6一10之间稳定,因此是属于微碱性蛋白酶“’。最适温度为50℃,在50℃以下稳定,在60℃处理10分钟活力损失95％。0.003村c丑件的存在对酶的热稳定性和pH稳定性均有显著提高。Ag+,Cu2+,Fe2+,Hg+,Zn2+ 对酶有抑制作用;Mn2+有明显的激活作用;1×10-3M的PCMB,IAA,O-PTH,PMSF对活力无影响;1×10-3M EDTA对酶有30％的抑制作用;在40℃用NBS(1×10-4M)、DFP(2．5mM)对醢进行10分钟处理,酶活力完全损失。此酶能水解多种天然蛋白,如酪蛋白、血红蛋白、蛇毒蛋白等,不水解鱼精蛋白和溶菌酶。以酪蛋白为底物测得的km值为0．66×10-2g／ml。在pH7．3进行圆盘凝胶电泳,虽然呈现九条带,但均具有大小不等的蛋白酶活力。     

用洁霉素及庆大霉素制备难辨梭状芽孢杆菌的分离培养基

由伪膜性结肠炎及抗生素性腹泻患者粪便中分离病原难辨梭状芽孢杆菌,国际上普遍采用CCFA培养基。但由于其中所用选择抑制剂国内尚不生产,故需花费外汇进口。我们在实验研究的基础上,以庆大霉素及洁霉素代替环丝氨酸及甲氧噻吩头孢霉素,并以国产试剂代替进口培养基基础。经多次试验获较满意结果。比较研究表明,分离的细菌多是芽孢,有利于进一步鉴定,而且价格只及进口培养基的十四分之一。     

嗜碱性短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究III．酶的性质及应用

本文对嗜碱性短小芽孢杆菌(Alkaliphilic Bacillus pumilus)B45菌株产生的碱性蛋白酶性质进行了研究。该酶对酪蛋白水解的最适pH为10．0—10．5,在PH7-l0之间稳定,最适反应温度为45℃,稳定性较好。最适底物浓度为1％。四硬酸钠、氯化钙对酶有激活作用,三聚磷酸钠及碳酸钠在常温下对酶话力无影响,而在40℃时对活力略有抑制,加入0．2g／LCaCl2可以保护酶的活性。B 45蛋白酶对血、奶污布的去污效果明显,其去污力比一般洗衣粉高10-13倍。     

地鼠结肠炎模型的研究

近年来国外的研究证明,难辨梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile)及其毒素是人类伪膜性结肠炎的病因。地鼠小肠结西炎被认为是最接近于该病的模型。我们用青霉素及庆大霉素的混合液经各种途径给予地鼠后建立了地鼠结肠炎模型。给药后动物出现腹泻、死亡、盲肠显著肿大,部分富肠并有出血或水样内容物。万古霉素可以保护动物免于死亡,使盲肠内容物中病原体消失。     

促甲基化因子对西索米星发酵的影响

研究发现,发酵培养基中添加2．0—3．0g,／L蛋氨酸或7．5—10．0mg,／L氯化钴可明显促进西索米星的合成。蛋氨酸的添加时机和添加方式对西索米星产物合成的作用明显不同。在产物合成中前期（30-48h）添加蛋氨酸的效果最佳。当发酵液中蛋氨酸初始浓度为0．656g／L时,与在产物合成初期一次性添加相比,1．5g／L蛋氨酸在产物合成初期、中期和后期均分成3次添加的效果更优,当发酵至91h结束时,发酵液中西索米星浓度可达0．70g／L。     

用概率单位-平行线法和常规法统计分析几种疫苗效力检测结果的比较

本文采用概率转换-平行线法并应用微机程序对乙肝疫苗30批、狂犬疫苗34批双百日咳菌苗30批的效力试验结果进行了统计分析,并与现行常现统计法即Reed-Muench和Wilsonworcester法统计结果作了比较。 1.采用P-P法统计分析乙肝疫苗、狂犬病疫苗及百日咳菌苗效力试验结果,经对回归方程的线性及平行性检验成立的批数分别占83.3％、82.3％和83.3％,结果表明该法可以检查出由于动物差异及实验误差导致结果不成立的批数,应予复试。 2.P-P法与常规法(R-M法及W-W法)统计分析给果对三种制品评价一致的符合率分别为80％、79.4％和76.6％,两会判定结果一致,但前者更有科学性。 3.由P-P法统计分析结果,三种制品都有部分批的95％可信区间上下限值差距较大,该差距来源于动物差异及实验误差,说明在检测试验中,必需按规程要求严格筛选适宜动物和严格试验操作,以减少实验误差。对效力值可信区间应控制何种适宜范围,尚需作进一步探讨。     

从湖北神农架原始森林土壤中分离的高毒力苏云金芽孢杆菌

从神农架原始森林土壤中分离出苏云金芽孢杆菌 9株。经过生理生化和血清学鉴定 ,此 9株苏云金芽孢杆菌分属于H7、H6和H14。生物测定结果表明 :两株H7型菌株对棉铃虫幼虫有较高的毒力 ;另两株对致倦库蚊幼虫和白纹伊蚊幼虫有很强的毒杀作用 ,此两株属苏云金芽孢杆菌H14。     

Rapid Microbiological Assay of Amino Acids

The rapid microbiological method for determination of amino acids was established. It is composed of 3 steps of culture; inoculum culture, intermediate culture, and assay culture. The inoculum culture is the same as that of ordinary method using Leuc. mesenteroides P–60. For the intermediate culture, which is carried out between the inoculum and assay cultures, the basal medium supplemented with appropriate amount of the amino acid to be determined is employed. The large amount of cells at logarithm phase grown in the intermediate culture are dispersed and used as inoculum for the assay culture. By this technique the assay can be performed by 2.5 to 3.5 hr of assay culture after 2 to 3 hr-intermediate culture.

The technique can be applied to the determination of amino acids in the mixture and the results agree with those obtained by ordinary method.     

微生物法测定食品中泛酸的含量

利用植物乳杆菌（ATCC8014）对泛酸的含量在一定条件下成线性关系,通过吸光度测定细菌繁殖浓度,可间接测定食物样品中泛酸的含量,并检测其回收率。结果表明标准曲线在10—100ng范围内线性关系良好,批内相对标准差（RSD）为2．1％-4．3％,批间测定RSD为2．7％-4．1％,回收率为88．4％～100．5％,达到了较好的分析效果。     

Improvement of the Microbiological Assay for Calcium Leucovorin

The calcium leucovorin assay was improved by adding THORAL germicide which resuspended the cells so that an accurate turbidity reading could be obtained.     

苏云金杆菌对甜菜夜蛾毒性的筛选

测定了 10 0株野生型苏云金芽孢杆菌菌株对夜蛾科甜菜夜蛾幼虫的毒力活性 ,经回归分析 ,2 3株对甜菜夜蛾初孵幼虫的毒力与浓度有高相关性 (R >0 .90 ) ,按LC50 计算 ,CN73活性最强 ,LC50 达 2 .393微升培养液 /克饲料 ( μL/g) ;另有 2 3株进行了不同浓度下校正死亡率的比较 ,得到高毒株 13株 ,CN33在 5μL/g浓度下校正死亡率达到 10 0 %。该结果为进一步研究奠定了基础。