紫外线诱变苏云金芽孢杆菌最佳条件探索

为寻找高毒性的苏云金芽孢杆菌(BT菌)菌株,我们用紫外线对苏云金芽孢杆菌的库尔斯塔克亚种进行诱变,再对得到的突变菌株进行筛选,得到高毒性的菌株。本文设计实验,先对苏云金芽孢杆菌进行生长曲线的测定和表征,再通过控制变量法对苏云金芽孢杆菌进行外线诱变,最后总结出最佳的诱变条件。     

腐乳毛霉蛋白酶菌株紫外线诱变育种

目的：选育酶活力高、耐热性好的毛霉蛋白酶菌株,用于腐乳发酵实验或生产。方法：从腐乳中分离毛霉蛋白酶菌株,对其出发菌株进行紫外线诱变,并经控温培养,选育优良变株。结果：获得一株酶活力高、耐热性强的优良变株SCLG—毛霉16,该菌株在32℃条件下,生长茂盛,其HE值为1.39、蛋白酶活力为180.375u/g,分别较出发菌株高出7.8%和51.4%。结论：将此优良变株用于腐乳发酵实验或生产,在缩短发酵时间,提升腐乳质量,延长生产季节等方面具有一定的应用价值。     

枯草芽孢杆菌B-903菌株的诱变选育

枯草芽孢杆菌B-903菌株是由河南省农业科学院植物保护研究所从郑州果园中分离得到,其代谢产生的抗菌物质对多种植物病原真菌具有较强抑制作用。以此菌株为出发菌株,进行亚硝基胍（NTG）和微波诱变处理,确定了,二者诱变处理的最佳处理剂量：NTG最佳处理浓度为200μg／mL,微波诱变为HI微波挡（850W、脉冲频率2450MHz）处理100s,筛选出13个高效突变株。经传代实验,2株高效突变株N1和W2抑菌圈直径分别稳定在26mm和24mm以上,比出发菌株提高21．8％和14．8％．     

细菌感受态细胞摄取和分泌DNA的相关性研究I.含有质粒的枯草芽孢杆菌自然感受态缺陷突变株的诱变和分离

以携带ｐＵＢ１１０质粒的枯草芽孢杆菌ＢＲ１５１菌株为出发菌株,利用亚硝基胍作诱变剂,直接在ＬＢ平板上进行诱变。从２９４９个菌落中筛选出一个转化频率低于出发菌株２～３个数量级的突变株,并对其营养缺陷型、ＵＶ的敏感性及Ｋｍ抗性和质粒进行了检测,确证其转化能力降低为自然感受态缺陷而非营养缺陷型的改变或重组缺陷所致     

球形芽孢杆菌二元毒素基因的定位有无芽孢突变株的生物学特性

ＤＥＳ诱变得到了三株球形芽孢杆菌无芽孢突变株Ｇ５,Ｃ４,Ｌ５,经显微观察,超微结构分析,生物测定,蛋白持ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析及质粒检测,观察到突变株Ｃ４,Ｌ５阻碍于芽孢怕牝Ⅱ期,突变株Ｇ５阻碍芽孢形成的第Ⅲ期,其细胞中已有晶体形成,它对致倦库蚊幼虫的毒力明显高于仅有二元毒素蛋白合成,而无毒素晶体形成的突变株Ｃ４和Ｌ５。     

胶质类芽孢杆菌功能及基因组学研究进展

胶质类芽孢杆菌(Paenibacillus mucilaginosus)因其具有多功能、强抗逆等特点而成为微生物肥料的首选菌种,它在农业生产中表现出提高土壤速效钾与速效磷含量、促进作物生长、提高作物产量和品质等多方面的效应,一直是研究的重点和热点。首次从P.mucilaginosus的系统发育地位及快速检测技术、生物学功能、基因组学研究进展等方面进行综述,以期进一步拓宽对该细菌生物学特征及其功能的认识,推动其在生态农业中的应用。     

枯草芽胞杆菌紫外线诱变实验方案的优化

【目的】优化枯草芽胞杆菌紫外线诱变实验教学方案,以便学生在实验中获得预期结果。【方法】从菌体培养、活菌浓度估测和辐射参数三方面探讨影响实验结果的因素。【结果】采用液体培养法活化菌体有利于制备均匀的菌悬液,采用比浊法估测初始菌悬液浓度可以指导学生将其稀释至102-103 CFU/m L的浓度;涂布接种后平板表面干燥、培养皿盖内无明显水珠附着,是获得单菌落的关键;在紫外辐射过程中采用固定的菌悬液体积和搅拌速度,可以获得规律性的辐射剂量——致死效应曲线。【结论】优化后的方案实验结果易得、重复性好,可供教学和研究实验参考。     

重离子诱变枯草芽孢杆菌高产复合酶菌种的筛选

重离子诱变作为一种新型高效的辐照诱变方式,具有突变率高、突变谱广、突变体稳定等特点。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)因具有多种水解酶活力而广泛应用于工业生产,虽然经过多次诱变和改造,其酶活力不断提高,但其复合酶活力仍有提升空间。同时,多次同种诱变剂的使用容易导致菌种产生"抗性",酶活力提高不大。为此,本研究首次利用不同剂量¹²C⁶⁺重离子束对枯草芽孢杆菌20076进行辐照诱变。诱变后通过透明圈初筛和酶活力验证复筛方式选育出一株复合酶活力较高的菌株B. subtilis KC-1。与原始菌株相比,其发酵液滤纸酶活力、内切葡聚糖酶活力、β-葡萄糖苷酶活力、外切葡聚糖酶活力、蛋白酶活力和α-淀粉酶活力分别提高了20. 2%、79. 6%、98. 2%、7. 4%、10. 4%和27. 4%。11代遗传稳定性实验结果表明该突变株具有良好的稳定性。     

胶质芽孢杆菌突变株021120的培养条件及发酵工艺优化

对离子束诱变所获得的突变菌株021120进行了培养条件和发酵工艺研究。单因子及正交试验结果表明,碳源对生物量和芽孢形成的影响最大,其次是氮源,磷和钾的影响较小;添加CaCO3和增加氧通量显著促进芽孢的形成。发酵培养基的理想配方为：2%淀粉、0.4% 酵母、0.1% K2HPO4、0.1％ MgSO4·7H20、0.5 ％CaCO3,pH 7.5。种子菌经二级扩大培养后,按6％的接种量接入70 L发酵罐,在32℃进行发酵,氧通量2.0-2.5 vvm,培养周期38-42 h,芽孢量达到9.80×108 cfu ml-1。通过以上培养基和发酵条件的优化,有效控制了多糖荚膜的产生,并促进了芽孢的形成,获得合格产品。     

胶质芽胞杆菌对黑麦草生长特性的影响

研究了从玉米(K02)、草地早熟禾(K05)、披碱草(K09)、多年生黑麦草(K11)、匍匐翦股颖(K12)根际土壤中分离到的5株胶质芽胞杆菌菌株对黑麦草株高、叶绿素含量以及根系活力的影响。结果表明在苗期(播种后10 d)、中期(播种后50 d)以及收获期(播种后90 d)3个采样期各处理黑麦草株高、叶绿素含量和根系活力均高于对照(CK)。研究表明施入胶质芽胞杆菌菌剂对黑麦草株高、叶绿素含量和根系活力具有一定的促进作用,其结果可为生物钾肥的研制提供必要的数据。     

不同植物根际胶质芽胞杆菌培养条件研究

研究了从玉米(K02)、披碱草(K09)、多年生黑麦草(K11)、匍匐翦股颖(K12)根际土壤中筛选得到的4株胶质芽胞杆菌(Bacillus mucilaginosus),并对其培养条件以及典型生长曲线进行研究。结果表明,菌株在10～45℃的范围内均可生长,最适生长温度25～30℃;最适生长初始pH值7.5～8.0;菌株K02、K12的最佳通气量为220 mL,菌株K09、K11的最佳通气量为200 mL;并在上述基础上经过进一步试验得到了菌株的典型生长曲线。试验数据对于了解掌握菌株的生长规律以及作为生物菌肥加以利用具有重要的意义。     

Construction of transgenic Bacillus mucilaginosus strain with improved phytase secretion

AIMS: To construct a transgenic Bacillus mucilaginosus strain to increase the secretion capability of a wild-type isolate of B. mucilaginosus D4B1 to hydrolyse phytate phosphorus, which can be used as a microbial fertilizer in field application. METHODS AND RESULTS: We constructed a phytase secreting expression vector pSP43 with a mini-Tn5 transposon and a Aspergillus fumigatus phytase expression cassette. The vector pSP43 was successfully transferred into the wild-type B. mucilaginosus using the particle bombardment method, and three transgenic strains with a stable copy of phytase expression cassette integrated into the chromosome of the B. mucilaginosus by Tn5 transposition were selected. The phytase activity of the engineered strains increased 36-46-fold when compared with the wild-type strain of D4B1. CONCLUSIONS: The A. fumigatus phytase gene can be expressed under the direction of p43 promoter in B. mucilaginosus. The expression protein is secreted extracellularly and newly constructed strains showed a high phytase activity. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: A transgenic Bacillus strain by the particle bombardment method was constructed.     

Serpentine Dissolution in the Presence of Bacteria Bacillus mucilaginosus

Dissolution of serpentine in the presence of soil bacteria Bacillus mucilaginosus is examined through solution chemistry analysis, X-ray diffraction and 3D X-ray microscopy. Microbe-mineral interactions were carried out by incubating serpentine powder and the bacteria for 30 days. Measured Mg concentrations in the culture media were significantly higher than that in any of the control experiments at any time during the experiments. However, the behavior of the Mg/Si ratio was similar to what was known for inorganic dissolution of silicate minerals. XRD analysis revealed increased quantity of amorphous components in the reacted mineral samples, and tomography images showed a very porous and powdered appearance of the dissolved serpentine grains. These data suggest the dissolution probably proceeds through an incongruent route. Further, these observations imply that there is little genetic control by the microbes during the bacteria-mineral interaction; rather, the accelerated dissolution results primarily from a biologically induced process. Finally, the observed pH decrease, the presence of carboxylic acid, ketone, aldehyde, phenol, and alcohol in the metabolites suggests that organic acids and ligands secreted by the bacteria are largely responsible for the accelerated mineral dissolution.     

胶质芽胞杆菌对磷矿石风化作用时细菌蛋白质的双向电泳分析

本文研究对磷矿石有风化作用的胶质芽胞杆菌(Bacillus muscilaginosus)在风化磷矿石过程中菌体蛋白质组的变化及差异, 以此了解该风化作用的分子生物学机制。将该菌接入液体培养基中, 加磷矿粉为处理组, 不加磷矿粉为对照组, 静置培养。培养10 d 后, 取上清液离心后的固体物和部分上清液中的外分泌蛋白用作菌体蛋白质组学分析。菌体蛋白质组二维电泳图谱进行比较和软件分析后, 处理组可见蛋白点数为(1134±98)个, 对照组可见蛋白点数为(729±53)个, 两者比较具有统计学差异(P<0.0     

Influence of biochar application on potassium-solubilizing Bacillus mucilaginosus as potential biofertilizer

Biochar can enhance soil fertility to increase agricultural productivity, whereas its improvement in soil microbial activity is still unclear. In this article, the influence of biochar on the cell growth and the potassium-solubilizing activity of Bacillus mucilaginosus AS1153 was examined. The impact on cell growth is related to the biochar-derived feedstocks and the particle size of biochar. Both intrinsic features and inner component fraction can promote the cell growth of B. mucilaginosus AS1153. The potassium-solubilizing activity was increased by 80% when B. mucilaginosus was incubated in conjunction with the biochar derived from corn stover. The survival time of B. mucilaginosus also was prolonged by adsorption in biochar. The experimental results suggested that the biochar containing B. mucilaginosus could be used as a potential biofertilizer to sustain crop production.     

施用胶质芽胞杆菌菌剂对黑麦草根际土壤脲酶、磷酸酶及过氧化氢酶活性的影响

土壤酶活性是反映土壤肥力最为重要的生物学指标之一。采用稀释涂布平板法研究了从玉米（K02）、草地早熟禾（K05）、披碱草（K09）、多年生黑麦草（K11）、匍匐翦股颖（K12）根际土壤中分离到的5株胶质芽胞杆菌菌株对黑麦草根际土壤脲酶、磷酸酶及过氧化氢酶活性的影响。结果表明：在苗期、中期、收获期各处理黑麦草根际土壤脲酶、磷酸酶和过氧化氢酶活性均高于对照（P〈0.05）。总体来看,各处理黑麦草根际土壤脲酶和过氧化氢酶活性呈先增加后降低的变化趋势;土壤磷酸酶活性与对照（CK）相比除苗期处理K12外,其他处理均呈上升趋势,以处理K05磷酸酶活性最大。研究表明,施入胶质芽胞杆菌菌剂对黑麦草根际土壤脲酶、磷酸酶及过氧化氢酶活性有一定的积极作用,其结果可为生物钾肥的研制提供必要的数据。     

不同碳氮源对胶质芽孢杆菌GSY -1生物脱硅的影响

目的:探讨不同碳氮源对胶质芽孢杆菌GSY -1的生物脱硅效果的影响.方法:采用单因素试验并结合方差分析确定影响GSY -1生物脱硅的碳氮源种类及浓度,通过回归实验及响应面分析进一步优化培养条件,然后利用10L发酵罐进行放大实验验证.结果:研究发现,乳糖和尿素对GSY -1生物脱硅的影响均显著,其中尿素10g/L及乳糖13g/L时,培养液中铝硅比(A/S)分别可由2.84提高到5.45和5.42,通过响应面优化实验,确定尿素10.35g/L、乳糖12.60g/L时,菌株GSY -1的脱硅效果最佳,铝硅比由2.84提高到5.67,增幅达99.65%.经10 L发酵罐放大实验,测得浸矿后的铝硅比为5.07,较浸矿前提高78.52%.结论:乳糖和尿素对胶质芽孢杆菌GSY -1脱硅效果影响显著,响应面法可有效用于GSY -1菌株脱硅条件的优化.     

高产生物表面活性剂菌株的紫外诱变选育

从新疆塔里木河边的土壤中筛选出1株产表面活性剂的菌株BIT-TLM1,该菌在以葡萄糖为碳源的无机盐培养基中,在150 r/min、40℃的条件下培养20 h,发酵液的表、界面张力分别降至29.29和0.61 mN/m。以菌株BIT-TLM1为原始菌株,对该菌进行紫外线诱变,选育出1株高产表面活性剂的诱变菌株UV-10,其产生表面活性剂的量达到0.309 7 g/g菌体,比原始菌株提高了9.22%,UV-10有较好的遗传稳定性,UV-10产表面活性剂的最佳培养条件:碳源为葡萄糖、氮源为NH4Cl、pH8.0和2%的盐度。