胸腺激素对淋巴细胞免疫功能调节的研究:Ⅰ胸腺素F5对有丝分裂原诱导下小鼠胸腺细胞增殖反应的影响

本文介绍了用氚胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入微量法测定小鼠胸腺细胞增殖反应的方法与影响因素;并应用此方法研究胸腺素F_5在体外对小鼠胸腺细胞在有丝分裂原诱导下增殖反应的影响。实验结果表明:小鼠胸腺细胞对ConA刺激反应远较对PHA刺激反应明显。在ConA作用下~3H-TdR掺入强度与胸腺细胞数量,ConA浓度及作用时间有关。同位素浓度与标记时间也直接影响。~3H-TdR掺入。胸腺素F_5在体外与小鼠胸腺细胞预育20小时左右(16—24小时)可增强胸腺细胞对ConA刺激的反应,但对PHA刺激无此作用。胸腺素F_5对小鼠胸腺细胞作用的有效剂量为50—200微克/1×10~7细胞/毫升。胸腺素F_5的这种增强作用,对各年龄组小鼠胸腺细胞都有所表现,但年龄较老的8月龄小鼠胸腺细胞对胸腺素F_5作用反应微弱。胸腺素F_5能增强胸腺细胞对ConA刺激的反应是否由于它能通过某种机制加速T细胞功能分化成熟有关,有待今后进一步研究确定。     

甲2巨球蛋白对辐照细胞的保护效应

用~3H—TdR掺入办法观察电离辐射对培养的人成纤维细胞的影响。在0—500cGy钻-60γ射线照射剂量范围内,细胞~3H-TdR掺入计数与照射剂量呈线性关系。y=33745.4e~(-0.0036×)。低浓度α_2M对细胞~3H-TdR掺入没有影响,高浓度α_2M能抑制细胞~3H-TdR掺入。4×10~5细胞经钻-60γ射线500cGy照射后加α_2M制剂,细胞~3H-TdR掺入计数与不照射对照组相比有明显升高(P<0.05)。在照射前加α_2M制剂与对照组相比无明显差别。     

转化细胞及腹水癌细胞对生长调节因子敏感性的研究

 本文~3H-TdR参入细胞DNA为指标研究了EGF等生长调节因子对小鼠腹水癌细胞DNA合成的影响,发现不同癌细胞对EGF等生长因子的敏感性有所差异,考虑到这也许与肿瘤细胞自身特性如恶性度有关。为了进一步探讨恶性度与这一敏感性是否相关,我们观察并比较了C_3H10T1/2CL_8(一种来源于鼠胚的正常成纤维细胞,简称NC_3H_(10)及转化的C_3H_(10)T1/2CL_8(用~3H-TdR转化的上述细胞,简称TC_3H_(10))对EGF等生长因子的敏感性。实验证明,细胞恶性转化后,对EGF的敏感性明显降低,~3H-TdR参入率降至原先的1/4以下。用DBcAMP作用于NC_3H_(10)和TC_3H_(10)均能抑制~3H-TdR参入DNA并可抑制EGF诱导的~3H-TdR参入作用。因此,我们认为,有关物理的致癌因素如放射性同位素,像生物、化学的致癌因素一样,亦能引起其转化细胞对外源性生长调节因子敏感性的改变。     

花粉提取物对带瘤小鼠胸腺T细胞数量变动的影响

本文报道用~3H-TdR掺入法研究花粉提取物对带瘤小鼠胸腺T细胞在有丝分裂原作用下增殖反应的影响。并用酵母多糖混合玫瑰花形成试验,观察其胸腺细胞中T、Tr和T_μ细胞数量变动的影响。实验结果表明:带瘤小鼠胸腺细胞的增殖反应均低于正常小鼠,经花粉提取物灌胃后,其胸腺细胞的增殖反应均有不同程度提高;T、Tr及T_μ细胞数均比对照组升高。说明花粉提取物具有促进免疫细胞活性的作用。     

几种因素对[~3H]-胸腺嘧啶核苷掺入小鼠脾细胞DNA的影响

胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA生物合成的前休物,[~3H]-TdE在细胞中掺入的速率反映了细胞合成DNA能力的大小。本文对影响[~3H]-TdR掺入小鼠脾细胞DNA的几种因素进行了探讨。     

萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响

目的 :探讨萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL 2分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响。方法 :实验小鼠随机分成实验组 (低剂量组 4 g/kg/d :高剂量组 :8g/kg/d)和对照组 (与实验组用同体积的生理盐水 ) ,连续用药 1 0天。用3H—TdR掺入法进行检测。结果 :与对照组相比萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL 2分泌有明显促进作用并能明显提高小鼠脾淋巴细胞转化增殖 ,并有一定的量效关系。结论 :萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠免疫功能有明显的促进作用 ,这可能与其促进细胞因子的分泌和淋巴细胞转化增殖有关。     

测定粒单系集落刺激因子的~3H-TdR掺入的微量培养方法

在小鼠骨髓细胞体外微量液体培养中,通过观察DNA合成时~3H-TdR掺入量的变化,来测定粒单系祖细胞的增殖状态。实验结果表明:此方法具有培养周期短,操作较简单,节省培养材料和被测样品量少等优点。在与体外半固体琼脂CFU-GM培养法相配合中,能正确反应出被测样品对粒单系祖细胞的增殖状态和增殖能力。     

介绍细胞共培养的两种方法

本文设计了两种共培养装置:微孔底膜套皿和循环培养,观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞(PAEC)和肺动脉平滑肌细胞(PASM)在上述装置中的生长情况,并用套皿法观察了两者共培养对~3H-TdR掺入的影响。结果发现,PAEC和PASM在上述装置中生长良好,两者共培养时,PAEC的~3H-TdR掺入明显降低(与对照组相比p<0.05),而PASM的~3H-TdR掺入明显升高(与对照组相比p<0.01)。上述结果表明:本文设计的两种装置可用于细胞共培养,以研究细胞间的相互调节关系。     

细胞松弛素B对人胚肺二倍体细胞SL_7和肿瘤细胞CNE、LTEP-78增殖周期的不同影响

CB(1.5微克/毫升)处理正常二倍体细胞SL_7和人肺鳞癌细胞LTEP-78及鼻咽癌细胞CNE,以~3H-TdR掺入和DNA含量变化为指标,观察十天内,核复制动态。SL_7细胞~3h-TdR掺入进行性下降至0,细胞周期被迫阻断(非时相特异性阻留),一部分细胞成为双核。肿瘤细胞LTEP-78和CNE,~3H-TdR掺入受一定程度抑制,但细胞周期移行可以持续,结果,产生一部分多核细胞和染??色体多倍化。CB引起的微丝束解聚与~3H-TdR掺入下降之间,未见到相关性。     

内皮细胞生长状态对血管平滑肌细胞增生迁移的影响

实验通过建立细胞共培养体系,探讨内皮细胞生长状态对血管平滑肌细胞增生迁移的影响及机制。检测指标包括~3H-TdR掺入、细胞周期、细胞迁移计数和α-SM-actin mRNA表达。结果显示,融合生长内皮使平滑肌细胞~3H-TdR掺入量明显降低,增加平滑肌细胞停留在G_0/G_1期的比例,上调平滑肌细胞α-SM-actin mRNA表达;而对数生长内皮细胞使平滑肌细胞~3H-TdR掺入量明显升高,促进平滑肌细胞由 G_0/G_1期进入G_2/M和S期,下调平滑肌细胞α-SM-actin mRNA表达。对照组平滑肌细胞在基础状态下存在少量迁移,对数增殖内皮细胞组平滑肌迁移数比对照组增高约4倍(P<0.01),而融合生长内皮细胞组平滑肌迁移数仅为对照组的0.5倍(P<0.05)。结果提示内皮细胞生长状态不同,对平滑肌细胞生物学特性的影响也不同,增殖期内皮明显促进平滑肌细胞增生迁移、下调平滑肌细胞α-SM-actin mRNA表达。     

应用液体闪烁计数器测定微量血液淋巴细胞转化的方法

本文介绍关于微量血液淋巴细胞转化的放射性测量法:指尖采血0.05毫升,全血培养37℃,94小时,收获细胞前16小时加入氚-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)0.6微居里。培养结束时洗脱培养液中游离的放射性,然后用三氯醋酸提取细胞中的DNA,用液体闪烁计数器测定其中所含的~3H-TdR 的放射性,即可反映淋巴细胞转化。在125人次的测定中,初步得出输血者淋巴细胞转化的正常值,并发现某些血液病人及肿瘤病人的淋巴细胞转化能力明显降低,电离辐射对它亦有抑制作用。     

~(60)Coγ-线对DNA、RNA、蛋白质合成代谢的效应

人血在体外受~(60)co γ-线照射后,用~3H-TdR、~(14)C-UR、~(14)C-缬氨酸和~3H-亮氨酸作掺入实验,分别反映DNA、RNA和蛋白质的合成能力。结果说明γ线对三种大分子合成的影响有一定规律性,即随剂量增加,掺入的放射性呈指数下降,10拉德导致~3H-TdR和~(14)C UR掺入放射性显著减少,四种标记化合物掺入下降的趋势基本一致。     

~(60)Coγ-线对人血淋巴细胞DNA和RNA合成能力的影响

T例人血在体外接受~(60)Coγ-_线照射后进行培养,用~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)和~(14)C-尿嘧啶核苷(~(14)C-UR)作掺入实验,以反映DNA和RNA的合成能力。应用滤膜法收获细胞,液体闪烁计数器测定双标记样品,发现γ-线对DNA和RNA合成的影响有一定规律,即随照射剂量的增加,~3H和~(14)C掺入的放射性呈指数下降。经统计处理分别得到照射剂量和~3H-TdR、~(14)C-UR掺入的放射性计数的对数值两变量间的直线迥归方程。10拉德的照射导致~3H—TdR和~(14)C-UR掺入的放射性计数显著性减少,RNA比DNA合成受抑更明显。     

FGF-1改构体对小鼠脾细胞增殖与凋亡的影响

目的:主要探讨非促分裂改构人酸性成纤维细胞生长因子(MrhFGF-1)对balb／c小鼠脾细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用3H-TdR掺入的方法检测MrhFGF-1同野生型hFGF-1相比对脾细胞增殖的影响,实验组分为(1)对照组;(2)FGF-1处理组;(3)ConA处理组;(4)FGF-1+ConA处理组。用流式细胞仪定量分析MrhFGF-1对脾细胞的凋亡保护作用,(1)对照组;(2)DEX处理组;(3)DEX+FGF-1(hFGF-1、rhFGF-1、MrhFGF-1)处理组。结果表明,利用DNA重组技术构建的一种非促分裂FGF-1突变体MrhFGF-1和野生型FGF-1相比,对脾细胞的促细胞增殖能力明显降低,但其对细胞凋亡保护作用的影响并无显著性变化,说明FGF-1的促细胞增殖能力和细胞凋亡保护信号通路并非由同一信号通路来实现的。     

恶性转化增加细胞对细小病毒的敏感性

在离体培养人细胞中,细小病毒对恶性转化的细胞有明显的抑制作用。正常人胎肾和胃细胞对细小病毒H-1呈抗性,但它们被理化致癌因子转化后,对细小病毒敏感。小鼠成纤维细胞C_3H10T1/2被~3H-TdR转化后对细小病毒H-1的敏感性进一步提高。另外,细小病毒对肿瘤细胞的抑制作用还与细胞的分化状态有关,低分化型胃癌细胞MKN45比分化型胃癌细胞MKN28对H-1的杀伤作用更敏感。     

~(60)Co γ线对肿瘤病人T、B淋巴细胞转化过程中三种大分子合成的效应

应用植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPS)激活淋巴细胞,以氢-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)、碳一尿嘧啶核苷(~(14)C-UR)和碳-缬氨酸作掺入实验,以分别反映T、B淋巴细胞转化过程中的DNA、RNA和蛋白质的合成能力。共测定了50例肿瘤病人,与正常人比较:T淋巴细胞转化能力明显降低,B淋巴细胞转化能力显著增高。经过一个疗程的~(60)Co照射后T细胞转化比照前又显著降低,B细胞转化比照前又显著增高,三种大分子合成都表现同样的规律,反映了辐射抑制T淋巴细胞DNA和RNA合成,相反地刺激了B淋巴细胞的DNA、RNA和蛋白质的合成。以上的辐射效应随照射剂量和照射野的增加而愈益明显。     

雪灵芝粗多糖对小鼠免疫细胞增殖与功能的体外激活作用

为观察雪灵芝粗多糖(Arenaria kansuensis crude polysaccharide,AKCP)对体外培养的小鼠脾淋巴细胞、NK细胞和腹腔巨噬细胞增殖与功能的影响。以不同浓度AKCP作用于体外培养的上述细胞48 h,采用中性红吞噬实验及NO释放实验检测巨噬细胞功能,MTT法检测脾淋巴细胞增殖及NK细胞杀伤活性,流式细胞术检测脾淋巴细胞CD3~+、CD4~+、CD8~+亚群,ELISA法检测脾细胞培养上清中IL-2和IFN-γ水平。结果显示,AKCP各浓度组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性和NO释放量、脾淋巴细胞刺激指数及培养上清中IFN-γ水平、NK细胞杀伤活性均高于空白对照组(P0.05);AKCP中浓度组脾淋巴细胞CD3~+、CD4~+亚群及培养上清中IL-2水平也明显升高(P0.05)。提示AKCP对小鼠免疫细胞的增殖与功能具有体外激活作用。     

甲硝哒唑对脆弱类杆菌作用机理的研究

采用同位素标记前体体外掺入技术和透射电镜观察方法从DNA. RNA及蛋白质水平上进行了甲硝哒唑对脆弱类杆菌作用机理研究。实验表明:甲硝哒唑几乎能完全抑制~3H-TdR掺入脆弱类杆菌,对~3H-亮氨酸的掺入也具明显的抑制作用,未观察到对RNA合成的影响。透射电镜下观察到,随着甲硝哒唑浓度增加,菌体形态发生明显的改变。     

人乳头状瘤病毒协同60钴照射促进食管上皮细胞恶性转化

为探明人乳头状瘤病毒(HPV)和促癌剂对食管上皮致癌作用,人胚食管上皮细胞转染HPV协同60钴(60Co)放射观察其恶性转化.用HPV18E6E7AAV转染的人胚食管上皮(SHEE),培养至13代,分为4组,实验组分别用60Co2、4、8Gy照射,每周1次共4周;SHEE未经照射为对照组.细胞形态用相差显微镜观察;细胞DNA合成和定量用3H-TdR掺入和用流式细胞仪分析;染色体众数用常规方法分析;致瘤性用软琼脂培养和裸小鼠接种;HPVDNA用PCR检测.经60Co照射后细胞呈凋亡和坏死(危象期).8周后SHEE 4Gy组细胞增殖,增殖指数(34%)和3H-TdR摄入增高,软琼脂培养和裸鼠接种出现致瘤性.对照组SHEE组细胞增殖指数24%,伴有少数3H-TdR掺入,裸鼠未成瘤.染色体众数:对照组,58～62;4Gy组,63～65;两组HPV18E6E7 PCR呈阳性条带.此结果表明,用HPV18E6E7协同60Coγ射线可以使人胚食管上皮恶性转化,60Co γ射线有加速食管上皮细胞恶性转化作用.     

草鱼、中华鳖脾细胞培养上清液ＩＬ—２物质的检测

用刀豆蛋白Ａ（ConA)刺激诱导草鱼和中华鳖脾细胞,收细胞培养上清液,用小鼠胸腺细胞增殖试验和对小鼠Ｌ９２９细胞系杀伤试验检测上清液中白细胞介素－２（简称ＩＬ－２）活性。结果表明：草鱼、中华鳖脾细胞培养上清液中有ＩＬ－２样活性物质,这种物质使小鼠的胸腺细胞^3H-TdR掺入量明显增加,在相同效靶比的条件下对小鼠Ｌ９２９细胞系杀伤率也显著增强,这种ＩＬ－２活性均能被抗人rIL-2血清所抑制。中华鳖脾细胞培养上清液（含ＩＬ－２）对中华鳖胸腺细胞也有较明显的促增殖作用并能消除兔抗中华鳖胸腺细胞血清（ＲＡＴＴＳ）对中华鳖胸腺细胞增殖的抑制作用,进一步用抗人白细胞分化抗原ＣＤ２５（ＩＬ－２受体,简称ＩＬ－２Ｒ）单克隆抗体进行免疫组化交叉反应提示草鱼、中华鳖淋巴细胞膜上含有与人类ＩＬ－２Ｒ类似功能和结构的物质。