脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的标准化研究

目的用干粉原料完全替代以消化液为主要原料的培养基配方,实现脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的标准化生产。方法用筛选改良的酪蛋白酸水解物干粉替代50%盐酸酪蛋白水解液,以改良酵母浸出粉替代酵母透析液和酵母浸出粉,适当调整培养基配方,改进并稳定培养基制备工艺,确定适宜质量指标,并对各项质量指标数据进行分析。结果改进后的脑膜炎球菌多糖疫苗干粉培养基有效地降低了批间差异,各项质量指标均符合脑膜炎球菌培养要求,培养基的各项质量指标更加稳定可控,在生产中得到了良好、稳定的生长结果。结论用干粉原料完全替代脑膜炎球菌多糖疫苗培养基中的消化液和酵母透析液是成功的,同时改良的干粉培养基进一步明确了配方标准,使原料准备、制备工艺、质量指标控制更加标准化,有效提高了培养基质量,有利于规模化生产,促进了脑膜炎球菌多糖疫苗生产用培养基的标准化工作。     

蜜环菌多糖的生物合成与发酵条件的相关性

培养基的碳、氮源,ＰＨ值直接影响蜜环菌多糖的生物合成,泥炭水解液的添加量占培养基的１０％～３９％（Ｖ／Ｖ）时,对蜜环菌多糖的生物合成有促进作用。液体振范培养时,蜜环菌生长形成球形菌丝体,菌丝生物量３．４５ｇ／Ｌ,菌丝多糖（精糖）得率为０．２８４％,而静置液体培养有利于菌索形成,菌素生物量１４．０５ｇ／Ｌ,菌索多糖（精糖）得率为０．５１５％,胞外多糖的得率分别为２９．４％和８．３％     

人二倍体甲型肝炎灭活疫苗纯化技术的研究

研究人二倍体细胞甲型肝炎灭活疫苗的纯化方法。 经人二倍体细胞培养的病毒液经澄清、浓缩后制成粗制疫苗,采用Sephacryl S 400、DEAE Sepharose FF、Sephadex G 10等柱层析手段进行纯化。试验证明甲型肝炎病毒粗制疫苗经以上3种层析柱纯化后,抗原组分单一,收率达到85%,杂蛋白去除率达85%以上,蛋白总含量、牛血清残留量各项指标符合中国药典要求,适用于大规模生产。     

纳米枸杞多糖合生元靶向微生态调节剂的制备及质量研究

目的制备合生元结肠靶向微生态调节剂,并建立其质量标准。方法球磨法制备枸杞多糖纳米粒,并将其与双歧杆菌、结肠粘附材料按一定比例装填入结肠靶向胶囊中,制备成合生元结肠靶向微生态调节剂;苯酚-硫酸法测定制剂中多糖含量,平板活菌计数法检测制剂中活菌数量。结果球磨法制备的枸杞多糖纳米粒成类球形,表面圆整,无粘连,80％粒径集中在464nm;合生元结肠靶向微生态调节剂符合2010版药典对胶囊剂的质量要求。结论按本法制备的合生元结肠靶向微生态调节剂安全可靠,其质量符合2010版药典对胶囊剂的质量要求。     

不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖产量的影响

目的 探索不同酸水解酪蛋白对W135群与Y群脑膜炎奈瑟菌(脑膜炎球菌)荚膜多糖产量的影响。方法 分别以NaCl质量分数为37%和14%的酸水解酪蛋白作为有机氮源配制改良半综合高盐培养基和低盐培养基,利用全自动细菌发酵罐分别在两种培养基里培养W135群和Y群脑膜炎球菌,比较这两种菌株在两种培养基中的生长时间、收获液菌密度( A 600 nm 值)、收获液去菌体后与去复合多糖后上清中的荚膜多糖含量,以及纯化后的精糖产量;比较高盐培养基收获液及其2倍稀释液中不同终含量的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide, CTAB)溶液对多糖沉淀效果的影响。结果 W135群与Y群脑膜炎球菌在两种培养基中的培养时间差异无统计学意义( P >0.05),但高盐培养基收获液的菌密度、收获液去菌体后上清液中的多糖含量均高于低盐培养基收获液,差异有统计学意义( P < 0.05),而高盐培养基收获液纯化后的精糖产量低于低盐培养基,差异有统计学意义( P <0.05)。高盐培养液2倍稀释后,在CTAB终体积分数为0.04%时,W135群与Y群脑膜炎球菌多糖全部沉淀,而未稀释高盐培养液即使CTAB终体积分数提高到0.14%,依然也不能完全沉淀 W135群与Y群脑膜炎球菌多糖。结论 不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎球菌的生长密度和荚膜多糖产量有影响,用CTAB溶液沉淀荚膜多糖时需控制收获液盐含量。     

复方多糖口服液的制备及质量研究

目的制备复方多糖口服液,并进行定量分析,对各项指标进行检测。方法采用水提醇沉法制备复方多糖口服液,薄层色谱法进行定性鉴别,苯酚-硫酸法测定含量。结果检测波长为490 nm,在4.86～24.7mg范围内多糖呈线性关系,加样回收率为99.84%。结论本法简便易行,结果稳定,可做复方多糖口服液中多糖的含量测定方法。     

超滤技术在Y群流脑原液纯化中的应用研究

目的:通过对比透析去酚与超滤去酚后原液的各项质量指标的差异,找到最为合适的操作方法,从而达到优化工艺的目的。方法:Y群流脑粗糖冷酚提取后,将酚提上清液平均分成4份,分别进行4组去酚工艺试验,制备成Y群多糖原液,并进行原液各项指标的检定。对比4组原液指标,并参考由粗糖到精糖的收率情况综合考虑确定最佳的纯化工艺。结果:300kd的超滤膜包超滤去酚工艺效果最好。     

无动物源成分伤寒沙门菌Ty2株种子批传代稳定性研究

目的 检定无动物源成分伤寒沙门菌Ty2株主代种子及工作种子,验证工作种子连续传代30代次的传代稳定性,为伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗无动物源工艺的建立提供前期研究数据。方法 无动物源成分伤寒主代种子、工作种子及脱脂牛奶工作种子分别连续传代至第30代次,在《中华人民共和国药典》2020版(三部)(简称《中国药典》)伤寒沙门菌检定要求的基础上,进一步应用16S rRNA基因序列分析、多位点序列分型(multilocus sequence type, MLST),并以伤寒主要抗原表位Vi抗原片段中毒力基因viaB区域为参考基因组,比对连续传代伤寒工作种子基因序列的遗传稳定性。结果 无动物源成分伤寒主代种子、工作种子及脱脂牛奶工作种子分别连续传代至第30代次种子,表型鉴定结果均符合《中国药典》伤寒沙门菌检定要求;连续传代至第30代次,Vi抗原血清凝集效价、O抗原血清凝集效价均未发生明显变化;16S rRNA基因序列鉴定PCR产物大小在1 474～1 478 bp之间,与NCBI数据库比对鉴定均为肠沙门菌肠亚种伤寒血清型;MLST分型结果表明,疫苗用伤寒沙门菌Ty2株为ST1型,连续传代30代次ML...     

支原体培养基的改良及其效果评价

为了改良支原体培养基配方,评价其效果。按《中华人民共和国药典》(以下简称药典)中规定的灵敏度比较方法,将实验室制备的新型支原体改良培养基与《药典》中支原体检查法推荐的处方培养基和商品化支原体培养基进行灵敏度效果比较试验。结果表明,改良后的支原体肉汤和半流体培养基,与接种口腔支原体和肺炎支原体及其它支原体的精氨酸培养基、支原体肉汤培养基无显著差异;与接种肺炎支原体的支原体半流体培养基无显著差异;与接种口腔支原体的支原体半流体培养基差异显著。因此经改良后的支原体培养基灵敏度能够满足药典规定的要求,但其操作简便,且成本低于现有的支原体培养基。     

羧甲基半胱氨酸合成与精制的研究

本文介绍一种利用大孔离子交换树脂精制羧甲基半胱氨酸的方法。在现有的合成工艺中,改变精制方法,选择最佳的实验条件,以制造药品级羧甲基半胱氨酸为标准,以提高收率为主要研究对象,进行方法性的对比实验。从而确定最佳的精制方法。利用此法制备的羧甲基半胱氨酸收率从原收率103%提高到125%含量可达到99.7%以上,其它指标完全符合中国药典标准。现已投入批量化生产。     

几种茶多糖对糖尿病模型小鼠血糖的影响

目的：研究和对比白茶、绿茶和红茶粗制多糖（crude tea polysaccharides,CTPs）的降血糖效果及机理。方法：分别选取寿眉、龙井、白琳工夫作为白茶、绿茶和红茶的代表,制备粗多糖。以链脲佐菌素诱导小鼠糖尿病模型,二甲双胍作为阳性对照,研究粗制茶多糖对小鼠体重、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、葡萄糖耐量和胰腺组织病变情况的影响,qPCR测定小鼠肝脏中相关基因表达水平。结果：CTPs均具有降血糖功效,白茶、绿茶、红茶多糖的空腹血糖下降率分别为47.0%、47.8%、36.7%;CTPs均可改善小鼠葡萄糖耐量,下调Foxo1、G6Pc、PEPCK和TXNIP基因的表达量。结论：本实验剂量条件下,研究所选粗制茶多糖提取物均具有降血糖效果,其中绿茶多糖作用最明显。     

国内外关于人用疫苗病毒安全性检测的研究

人用疫苗产品安全性检测的重点是确定生产基质及原辅料有无潜在病毒污染。按照2010版中国药典(以下简称CP)病毒外源因子检查,并与欧洲药典7.0版(以下简称EP7.0)和美国药典(以下简称USP34/NF29)进行比较,发现2010版CP在细胞基质病毒外源因子检测要求上比2005版CP有较大的提高,并对检测结果有效性的控制进一步加强。USP34/NF29规定检测的病毒种类繁多,并且根据种属来源的特异性及病毒的亲嗜性,列出了敏感指示细胞系,而2010版CP对上述部分内容未作规定或欠详细表述。因此在今后药典的标准提高方面,应结合国内外相关病毒外源因子检测的实际情况,加强疫苗安全性;以EP7.0或USP34/NF29标准为依据进行药品研发及药品审评工作的人员应注意其中的差别,勿混淆套用。     

蜜环菌多糖对低能离子束诱变作用的恢复效应

水提法从密环菌Am99-1菌株人工发酵体分离得到密环菌多糖Aml,以低能N^ 离子束为诱变源,黑腹果蝇为受试动物,检测Aml对离子束诱变果蝇的恢复功能。实验结果经统计学分析表明,1.0%和1.5%浓度的密环菌多糖Aml可以提高受试果蝇蛹的孵出率和降低当代及F2代果蝇突变率。这说明密环菌多糖对于低能离子束诱变有一定程度的防护作用。染色体水平上的检测也证实了此结论。     

基于液质联用技术解析和降低螺旋霉素发酵杂质

目前螺旋霉素生物合成的发酵杂质含量过高 ,导致成品收率过低 ,杂质含量不符合药典规定。为解决这一问题 ,首先利用LC -MS联用技术定性分析了 4种螺旋霉素发酵杂质的结构 ,结合螺旋霉素生物合成途径分析 ,它们都起因于螺旋霉素生物合成糖基化过程的紊乱。氮源尤其是铵盐对螺旋霉素生物合成糖基化过程有重要的调节作用。进一步的氮源优化使螺旋霉素发酵液中 4种杂质含量降低 22%～88% ,杂质含量全部低于欧洲药典标准。     

5型肺炎球菌荚膜多糖无乙醇无苯酚纯化工艺的建立

目的建立一种无乙醇无苯酚的5型肺炎球菌荚膜多糖纯化工艺,并进行工艺验证。方法 5型肺炎球菌发酵培养液采用脱氧胆酸钠法去除蛋白质,再利用层析法去除核酸等杂质,并对去除蛋白质工艺、层析工艺分别进行优化。采用优化后的方法纯化3批5型肺炎球菌发酵培养液,并对新工艺进行验证。结果去除蛋白质工艺的最适参数为:脱氧胆酸钠体积分数为0.5%,pH 4.3;层析工艺的最佳条件为:氯化钠浓度200 mmol/L,pH 8.0,上样流速150 cm/h,多糖质量浓度0.50 mg/mL。在上述工艺条件下,纯化的荚膜多糖各项指标均符合《欧洲药典》9.0版标准。结论该工艺稳定、可靠,可用于大规模生产,相比于传统的乙醇苯酚纯化工艺具有先进性。     

由人发制备L-胱氨酸工艺的改进及某些机制探讨

<正> 本文介绍了由人发制备L-胱氨酸的生产工艺。为提高L-胱氨酸生产收率,对原工艺有些工序进行分析研究。作者为了能获得理想水解终点,因而作了不同盐酸浓度对L-胱氨酸收率影响曲线,认为用8.8N～9N盐酸浓度制备L-胱氨酸收率最佳;也做了不同时间水解人发对L-胱氨酸收率影响,对从人发中制备单一L-胱氨酸采用6.5小时水解时间,对L-胱氨酸收率最佳、最经济;水解浓缩液经中和后马上采用连续搅拌结晶;粗制时先采用液碱后用饱     

培养基质量对脑膜炎奈瑟菌培养结果的影响

通过对A群C群流脑多糖疫苗生产用培养基质量指标与培养脑膜炎奈瑟菌菌数之间的关系进行分析,发现不同型别的脑膜炎奈瑟菌在相同的培养基和培养条件下具有不同的培养结果,对培养基总氮含量、氨氮含量、氯化钠含量进行检测分析,在一定范围内并未发现与培养菌数之间明显的关系,但这些质量指标作为培养基制备过程的质量控制,保证不同批次培养基始终保持相对稳定、可控的质量,具有十分重要的意义。     

正交实验法优选香菇多糖的提取工艺及其硫酸酯化研究

目的:考察香菇多糖的提取工艺,制备香菇多糖硫酸酯。方法:采用正交试验法考察加水量、提取时间、提取温度和粒度4个因素对香菇多糖硫酸酯提取率及其中总糖含量的影响,应用硫酸法制备香菇多糖硫酸酯并对得到的成分进行鉴别。结果:通过对正交实验结果的极差分析。得出提取温度和加水量对多糖提取率影响比较著性,提取温度和提取时间对多糖含量的影响比较著性。确定香菇多糖提取的最佳工艺为:应用40倍量的水,每次提取4 h,提取温度90℃,香菇粒度为80目。制备的多糖硫酸酯中硫酸基含量为22.80%,显示了相对较强的生物活性。结论:本实验成功的确定了提取香菇多糖的最佳工艺,制备了硫酸基含量较高的硫酸酯化香菇多糖。     

国产和进口DMEM培养基培养CHO—C28工程细胞的质量评价

我们用10L转瓶培养能高效表达HBsAg的重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO-C_(28)细胞株),在相同的培养条件下比较国产和进口DMEM培养基的质量。结果表明,两种DMEM培养的细胞之生长及分泌的HBsAg之滴度没有显著改变,国产DMEM培养的细胞收液的沉淀收率略高于进口DMEM的,前者的最后收率也不低于后者。两种DMEM培养的细胞收液经纯化后,HBsAg的各项指标都符合基因工程乙肝疫苗制造及检定规程的标准,从试验结果可以看出,用国产DMEM培养基替代进口DMEM培养基是完全有可能的。     

分光光度法标定酵母超滤液浓度及其在脑膜炎球菌培养基优化过程中的应用

目的:建立检测酵母超滤液浓度的方法,并探索适合A、C群脑膜炎球菌生长的无动物源性培养基中酵母超滤液的浓度。方法:通过全波长扫描及不同波长吸光度值的比较确定检测酵母提取物浓度的最佳波长;用3000 Da超滤膜超滤酵母提取物溶液,制备酵母超滤液并检测其性质;观察脑膜炎球菌在含不同批次酵母超滤液的半综合培养基中的生长情况,验证不同批次标化的酵母超滤液的稳定性;配制含不同浓度酵母超滤液的半综合液体培养基,观察A、C群脑膜炎球菌的生长情况。结果:通过全波长扫描及不同波长吸光度值的比较,确定了检测酵母提取物浓度的最佳波长为405 nm;采用3000 Da超滤膜超滤后的酵母超滤液不与CTAB产生沉淀,通过检测其D_(405nm)值,可以确定酵母超滤液的浓度;从生长情况考虑,A、C群脑膜炎球菌半综合培养基中最优酵母超滤液浓度分别为4、2 mg/L。结论:建立了制备酵母超滤液及分光光度法标定酵母超滤液浓度的方法,确定了培养A、C群脑膜炎球菌半综合培养基中最优酵母超滤液浓度。