转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化北大核心CSCD

对甘蔗Southern杂交体系的优化,旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料,就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面,对地高辛标记的Southern杂交技术进行了优化研究。结果表明,改良的CTAB法提取的甘蔗DNA能满足后期实验的要求;PCR法标记探针的效率较随机引物法标记探针的效率高,更适合用于Southern杂交;40μg的DNA在400μL酶切体系中,酶切10 h可获得良好的酶切效果;杂交温度40℃,杂交18 h,可获得清晰的杂交条带。     

橡胶树转基因植株Southern杂交体系的优化

以地高辛标记的Southern杂交技术已广泛应用于多个物种中。选择橡胶树为材料,就基因组DNA的提取、探针标记方法的选择以及具体的杂交操作过程等方面对该体系进行了优化。结果表明,至少40μg高质量的DNA在300μL的大酶切体系中,酶切12 h可获得良好效果;PCR法标记的探针杂交条带清晰、背景浅,其效率明显强于随机引物法标记的探针。本研究优化的体系信号强、背景浅和灵敏度高,为橡胶树Southern杂交鉴定分析提供参考。     

芥蓝植株再生体系的优化

采用正交设计方法对影响芥蓝植株再生体系的因素进行了优化研究,结果表明：影响芥蓝植株再生的最主要因素是外植体类型,其次依次为NAA,BAP,蔗糖和AgNO3。结果进一步显示,最利于芥蓝再生植株的培养基条件为：MS BA P2mg／L NAA0．03mg／L 1％蔗糖 AgNO3 7．0mg／L 0．8％琼脂,最适宜的外植体类型为下胚轴,植株再生频率高达97．5％。     

甘蔗转基因研究进展

对利用基因工程技术进行甘蔗遗传转化的研究进展进行综述,分别阐述了部分国家在甘蔗转基因研究工作中取得的成果,从研究方法和方向上分析了甘蔗转基因研究的前景及其在蔗糖产业发展中的重要意义。     

甘蔗原生质体的植株再生

从甘蔗（Ｓａｃｃｈａｒｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍ Ｌ．）嫩叶外植体诱导愈伤组织,经继代培养后,挑选胚性愈伤组织,转入ＭＳ３ 液体培养基,进行悬浮培养。当培养物分离出小粒状的细胞团,细胞变得小而圆时,用于分离原生质体。原生质体以琼脂糖固化的培养方式培养于ＭＲＰ１ 培养基中。由原生质体再生的愈伤组织有两种类型。挑选粒状、坚实的再生愈伤组织转移到Ｎ６ 分化培养基上,“新台糖１ 号”再生的愈伤组织,在含有ＫＴ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ的培养基中,分化出绿芽并长成完整的植株。而“粤糖５７－４２３”和“ＵＳ６６－５６－９”再生的愈伤组织,在加有０．１％ 的活性炭的培养基中,前者分化出白化苗,后者分化出根     

辣椒转基因植株再生

用改建的农杆菌转化辣椒,已建立有效的转化两再生系统。辣椒无菌苗（１２天苗龄）子叶在再生培养基（ＭＳ＋３ｍｇ／Ｌ ＢＡ）上预培养２天,再用农杆菌感染,共培养２天,再转入含Ｋｍ（１００μｇ／ｍｌ）的再生培养基中培养２－３周后,子叶基部有多丛芽形成。分切多丛芽,将芽转选择性的芽伸长培养基（ＭＳ基本成分＋Ｂ５维生素类＋２ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋７５μｇ／ｍｌ）上,待芽长至２－３ｃｍ后,切下并转入生根培养基（ＭＳ＋     

枸杞转基因植株的再生

本文报道一个快速简便的枸杞转化再生系统。宁夏枸杞的幼茎外植体,能被含非致瘤性Ti质粒载体的根癌农杆菌感染。在该载体双向启动子的一端连有一个npt—Ⅱ基因(新霉素磷。酸转移酶Ⅱ基因)以供选择卡那霉素抗性的转化植物细胞。把选择诱导培养基上形成的愈伤组织转到选择分化培养基后能很快分化出芽点,继而长成完整的小植株。对再生植株的NPT—Ⅱ酶活性检测及DNA分子杂交表明;外源基因已整合到枸杞细胞的核基因组上,并能在植株水平表达出相应的性状。     

甘蔗转基因育种研究进展

由于复杂的遗传背景、较低的可育性和缺乏优异种质资源等因素给甘蔗品种改良带来了很大的困难,而通过转基因技术为甘蔗品种改良提供了有效的途径。甘蔗通过转基因,不仅在其抗虫性(螟虫和蚜虫)、抗病性(白条病、花叶病和黑穗病)、蔗糖改良(蔗糖产量、蔗糖纯度和色泽)、抗除草剂、抗旱性等方面已经取得了很大的进展,而且转基因甘蔗作为生物反应器生产重组蛋白(GM-CSF等)和生物塑料聚羟基丁酸酯(PHB)也取得了很好的成果。综述甘蔗主要性状遗传改良研究进展、转基因存在的问题以及转基因安全性研究状况,并对今后的甘蔗转基因育种前景和研究方向进行分析。     

甘蔗花粉植株诱导成功

甘蔗现有品种基本上都是远缘的种间杂种,杂合 程度很高。若能通过花药培养获得双单倍体植株,就 为获得甘蔗的纯系建立了极其有效的方法。甘蔗的纯 系不仅可用于遗传学研究,还可直接用于选配优良的 杂交组合,在甘蔗育种业中充分利用杂种优势,可大 大提高蔗糖的产量。甘蔗花药培养方法的建立为甘蔗 单倍体诱变开辟了广阔的前景,可使诱变育种效率大 大提高。美国在夏威夷进行了多年花药培养的研究^[2], 菲律宾也进行了这方面的研究甘蔗现有品种基本上都是远缘的种间杂种,杂合 程度很高。若能通过花药培养获得双单倍体植株,就 为获得甘蔗的纯系建立了极其有效的方法。甘蔗的纯 系不仅可用于遗传学研究,还可直接用于选配优良的 杂交组合,在甘蔗育种业中充分利用杂种优势,可大 大提高蔗糖的产量。甘蔗花药培养方法的建立为甘蔗 单倍体诱变开辟了广阔的前景,可使诱变育种效率大 大提高。美国在夏威夷进行了多年花药培养的研究^[2], 菲律宾也进行了这方面的研究^[2],但仅得到来源于花 粉的多细胞球。我国台湾省曾进行了甘蔗花药培养的 研究,但尚未见获得花粉小植株的报道。,但仅得到来源于花 粉的多细胞球。我国台湾省曾进行了甘蔗花药培养的 研究,但尚未见获得花粉小植株的报道。     

转基因植株毒素可渗漏

纽约大学的研究人员,通过室内种植转基因Bt玉米植株试验表明：该玉米可免受钻心虫危害,其时效可达２５天之久。然而,在此种玉米根系的周围土壤中,可以提取Bt毒素物。他们认为此现象是使用转基因植株对土壤生态学冲击的例证。美国目前栽种有６００万公顷的Bt玉米,据推测在杀死危害玉米害虫的同时,对土壤中其它有机物的影响也是非常显著的。由于该毒素在土壤中存留时间较长,从而可使目标害虫增加抗药性。如果目标害虫增加了抗性,则表明以该种技术制成的转基因作物宣告失败。环境专家提示大家,现在是再次提出评价转基因玉米对环境风…     

同质化叶绿体转基因植株的获得

构建了含有外源目的基因表达盒（ｐｓｂＡ５’－ｍｉｆＨ－ｐｓｂＡ３’）和选择标记基因表达盒（Ｐｒｒｎ－ａａｄＡ－ＴｐｓｂＡ）以及两段质体基因组同源片段的烟草叶绿体转化载体ｐＴＲＣＨ２０５。基因枪聂击受试外植体后,经抗生素筛选获得转化再生植株。为探索提高转基因植株同质化程度的可能途径,对再生植株再高浓度的壮观霉素选择压下进行了３轮次分化再生,并结合腋芽繁殖方式继代６￣１０次。ＰＣＲ扩增和以同源片段为探     

转基因鹰嘴紫云英的植株再生

鹰嘴紫云英(Astragalus cicer)是重要的豆科牧草之一,它具有营养丰富、产量高和适口性好等特点。而且它能抗旱,特别适于在灌溉和干旱地区种植。但是,鹰嘴紫云英含硫氨基酸量偏低,而这一营养成分的含量与动物毛质量和产量成正相关。因此我们可以通过生物技术来提高其含硫氨基酸量。迄今尚未见过有关15 kd zein 基因转化鹰嘴紫云英的报导。本文叙述用叶盘法(leaf discs)将含有15 kd zein 基因的质粒通过农杆菌介导入鹰嘴紫云英并获得转化植株的过程。     

甘蔗双低频酶cDNA-AFLP体系的优化

目的：建立一个适合于甘蔗（Saccharum officenarum）为研究材料的cDNA-AFLP反应的优化体系。方法：用Rever-tAidTM First Strandc DNA Synthesis Kit反转录获得第一链,用Rnase H、E.coliDNA聚合酶Ⅰ和E.coliDNA连接酶合成双链cDNA,用双低频酶EcoRⅠ和PstⅠ对dscDNA酶切,连接,预扩增,和选择性扩增的关键因素进行分析。结果：500ng的dscDNA双酶切5h,将16℃过夜连接的产物稀释1倍用作预扩增的模板,预扩增产物稀释50倍作为选择性扩增模板,6%聚丙烯酰胺凝胶检测及银染,扩增条带均匀分布,清晰可辨且主要分布在200～2000bp之间。结论：该体系具有稳定性高,重复性好等优点,可用于甘蔗cDNA-AFLP分析。     

玉米丛生芽体系的建立及抗除草剂转基因植株再生

以玉米优良自交系为材料, 利用芽尖分生组织诱导胚状体和丛生芽, 建立起一种快速有效且取材不受季节限制的玉米丛生芽诱导体系. 以丛生芽组织块为受体, 用基因枪将从拟南芥(Arabidopsis thaliana)突变体中克隆的抗除草剂基因als (acetolac-tate synthase)导入玉米细胞, 经除草剂chlorsulfuron筛选得到抗性组织块并再生植株. PCR检测和Southern杂交表明, 部分再生植株转入了als 基因. 除草剂喷施试验表明, 转基因植株及其子一代具有良好的抗除草剂特性. 建立了一种新的受基因型限制小的玉米离体培养及转基因受体系统, 能快速有效地获得大批转基因植株.     

转基因番木瓜PCR 快速检测体系的优化

随着公众对转基因食品安全性的关注, 转基因番木瓜的快速检测技术成为关键问题。优化了番木瓜总DNA的提取方法, 选用木瓜蛋白酶基因(Papain)作为内源参照基因, 建立了转基因番木瓜GM YK 和华农一号的双重PCR定性检测方法。通过对广州市超市和批发市场222 个样品的检验, 并与SN/T 2653-2010 行业标准对比, 证明该方法具有污染少、速度快、成本低的优点。     

一种改进的快速Southern杂交方法

本文提出一种使用琼脂糖凝胶直接杂交的方法,结果准确、简单可行,是微量核酸、低拷贝基因鉴定以及疾病核酸诊断的一种较好方法。     

野葛高频植株再生体系相关因子的优化

对野葛高频植株再生体系相关因子进行优化,结果表明,野葛带芽茎段再生体系的最佳消毒方式为70%酒精处理30s后用0.1% HgCl₂处理15min;最佳培养基为MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 5.0mg/L;最佳培养条件为:蔗糖浓度30g/L,pH 6.0,液体培养,培养温度25℃,光照培养。     

马铃薯转基因向田间生长的非转基因植株的转移

评估田间条件下遗传工程生长株危险性的一个重要方面是检测导入基因通过有性杂交转移到同种或相关品种的非转基因植株中的程度。John Innes中心的H.C.McPartlan和P.J.Dale对此进行了田间试验。旨在测定经花粉介导使转基因马铃薯植株中的标记基因向非转基因马铃薯植株和相关杂草品种的转移程度。他们将含有以卡那霉素抗性转基因nptⅡ为选择标记的转基因马铃薯植株种植在离非转基因植株0～20米处,然后筛选收获的非转基因值株种子的卡那霉素抗性。结果发现,当转基因和非转基因植株种植距离近到足以使其叶片相互接触时,24%的非转基因亲本值株种子具有卡那霉素抗性。相距3米时,抗性比率达     

优化子叶节转化法培育大豆MtDREB2A转基因植株

将正交因素试验与GUS基因组织化学染色等技术相结合, 优化大豆(Glycine max)品种东农50遗传转化体系, 导入抗旱关键基因MtDREB2A。结果表明, 大豆种子表面消毒, NaClO溶液法与Cl₂气熏蒸法的去污染率分别达到98.67%和93.33%。子叶节法转GUS基因组织化学染色率(68.33%)显著高于下胚轴法(14.00%)和胚尖法(0.67%) (P<0.05)。种子萌发5天, 农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)培养温度25°C, OD₆₀₀=0.9, 共培养5天的转GUS基因子叶节最高达72.00%; 恢复培养5天, 草丁膦(3 mg·L^-1)、头孢噻肟钠(200 mg·L^-1)和羧苄青霉素(300 mg·L^-1)筛选诱导分化的转GUS基因不定芽最多为3.33%; 优化的大豆遗传转化体系转化效率为1.11%。转MtDREB2A基因大豆东农50植株根系更加密集, 主根长度和侧根数量均显著高于对照(P<0.05), 证实MtDREB2A基因具有促进大豆根系生长的作用, 为利用该基因进行大豆抗旱育种奠定了坚实的基础并提供了理论依据。