石蜡包埋组织中DNA的提取

从石蜡包埋组织中提取DNA,是进一步研究抑癌基因的基础,而石蜡包埋组织中提取到的DNA往往已被降解成小分子且量微,作者经多次摸索试验,改进了一些步骤,取得了较好的抽提效果。     

SIV模型猴石蜡包埋淋巴结组织DNA的提取及病毒基因检查

从取材于３只ＳＩＶ感染治疗猴和４只ＳＩＶ艾滋病模型猴治疗前后的１１份石蜡包埋淋巴结活检组织中提成基因组ＤＮＡ,分别用ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ方法检测ＳＩＶ病毒基因,ＰＣＲ共检出１０份阳性,巢式ＰＣＲ检测１１价样品均阳性,而同期采样的猴外周血标本病毒分离仅３份阳性,ＰＣＲ扩增产物的特异性用限制性内切酶酶切反应得到证实。实验说明,从淋巴结组织中检测ＳＩＶ的病毒基因较外周血病毒分离更能真实地反映病毒感染状况,本研究将对全面和正确评价艾滋病药吻和疫苗治疗效果提供帮助。     

甲醛固定石蜡包埋组织4种DNA提取方法的比较分析

本研究以10例甲醛固定石蜡包埋组织（FFPET）作为疑难检材,将其制成蜡膜,分别以二甲苯-Chelex100法、脱蜡液-Chelex100法、脱蜡液-Vazyme FastPure FFPE DNA Isolation试剂盒（简称FP试剂盒）、脱蜡液-北京天根石蜡包埋组织基因组提取试剂盒法（简称天根试剂盒）提取DNA,进行紫外分光光度计测定（浓度、纯度）及短串联重复序列（STR）分型检测（23个常染色体）,通过比较分析FFPET在4种不同提取方法中的提取质量、STR分型质量和检出率,从而寻求一种高效简便、经济实用、方便快捷的甲醛固定石蜡包埋组织中DNA提取方法。结果表明：应用4种方法提取的石蜡包埋组织蜡膜DNA经紫外分光光度计测定后显示,应用2种Chelex100法提取的DNA浓度高于2款试剂盒,试剂盒提取的DNA的纯度优于另外2种方法,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）;FP试剂盒提取DNA的平均浓度和纯度均优于天根试剂盒,无显著性差异（P>0.05）;STR分型普遍存在不同基因座和同一基因座不同等位基因之间的扩增不均衡,呈现前高后低状态;STR平均检出率为FP试剂...     

石蜡包埋组织的DNA提取及其在免疫球蛋白基因重排分析中的应用

基因重排分析在淋巴瘤诊断中具有重要意义.文章应用改良DNA提取方法,从30例淋巴增生性病变石蜡包埋组织获得的DNA虽有不同程度的降解,但适于PCR扩增Ig重链基因重排分析;约1/3病例提出高分子量DNA,可用于DNA印迹杂交.因此,石蜡包埋组织同样可为某些疾患,如淋巴瘤疑难和罕见病例的回顾性分子病理学研究提供基因诊断的DNA来源.     

从石蜡包埋和甲醛浸泡组织中提取DNA进行PCR扩增的研究

如何从石蜡包埋组织中高质量的提取DNA从而进行分子生物学特别是基因工程方面的科研工作,目前在国内尚未见报道。我们采用二甲苯或水浴法对2块胃癌石蜡包埋组织进行脱蜡,并提取、纯化了DNA,进行PCR扩增,获得了成功。另外对用甲醛浸泡的组织其DNA的受损程度与上述进行了比较,现报告如下。     

不同组织在石蜡包埋中的方法和体会

在石蜡切片制作过程中,组织包埋是一重要环节,不同组织和病变的包埋则有所不同,包埋位置直接影响切片和对病变的观察,现将我们在工作中的包埋方法和体会介绍如下：     

从石蜡包埋的微量肾活检组织中提取及分析RNA

本文用氧钒核糖核苷复合物ＶＲＣ（ＶａｎａｄｙｌＲｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅＣｏｍｐｌｅｘ）孵育的方法,从石蜡包埋半年以上的肾组织中提取出ＲＮＡ,分析了ＲＮＡ的质量,探讨了影响ＲＮＡ提取的因素。在此基础上,我们又采用ｔＲＮＡ助沉的方法,进一步从石蜡包埋的微量肾活检组织中提取出ＲＮＡ,并用逆转录热启动ＰＣＲ（ＲＴ－ｈｏｔｓｔａｒｔ－ＰＣＲ）方法,观察了石蜡包埋的肾活检组织中细胞因子的基因表达。     

从石蜡包埋组织中获取高质量基因组DNA的方法改进

从石蜡包埋组织中制备基因组DNA(gDNA)难度大、获取样本量很少.传统方法为二甲苯脱蜡法.为了简化操作,获得更高质量的gDNA,我们采用水浴法替代二甲苯进行脱蜡,亲和层析纯化石蜡包埋肝细胞癌(HCC)组织标本中基因组DNA,以纯化gDNA为模板PCR扩增看家基因.结果显示改良水浴法提取的gDNA质量、数量均显著高于传统二甲苯脱蜡法,PCR产物量也得到显著提高.与传统方法相比,改良水浴法简单、快捷,可以更有效的回收石蜡包埋组织中的gDNA.     

福尔马林固定及石蜡包埋组织透射电镜样品制备

随着电子显微镜的应用和普及,超微病理诊断为临床病理工作者提高疑难病例的诊断水平,起到了极大的帮助作用。因而电镜技术越来越引起病理工作者的重视。但在实际工作中往往无法预先知道哪些标本需作透射电镜观察,而常规病理标本又多已经福尔马林固定或石蜡包埋。我室自１９９３年以来,探索将福尔马林固定的组织及石蜡包埋的组织再制作成透射电镜样品,进行超微病理诊断,获得一定成效,现报道如下。材料和方法：标本取自本室活检常规福尔马林固定标本及本室常规石蜡包埋组织。经福尔马林固定时间为１ｈ－１ｗ。经观察定位,准确地将有意…     

石蜡包埋组织芯片制作的探讨

组织芯片(tissue chip)技术是将数十个到上百个的组织样本整齐有序地排列在同一张载玻片上而形成的微缩组织切片,又称组织微阵列(tissue microarray)技术.     

应用多重PCR方法检测石蜡包埋组织标本中的分枝杆菌DNA

应用多重PCR方法检测并鉴别石蜡包埋组织中的结核分枝杆菌复合体与非结核分枝杆菌DNA扩增片段类型 ,为结核分枝杆菌复合体感染与非结核分枝杆菌感染的病理学诊断提供一种补充的鉴别诊断方法。应用三对具有特异性的寡核苷酸引物 ,进行多重PCR扩增。这三对引物分别对应于分枝杆菌 6 5kD表面抗原、结核分枝杆菌插入序列IS6 1 1 0及人类β 珠蛋白基因的部分序列 ,其扩增产物分别为 3 83bp、1 2 3bp和 2 6 8bp。此种多重PCR方法检测的灵敏度为 0 6pg。经多重PCR扩增后进行凝胶电泳 ,结核分枝杆菌复合体 (结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌、BCG)均可见 3 83bp、1 2 3bp片段 ,而非结核分枝杆菌 (鸟、龟、瘰疬、蟾蜍、堪萨斯、胞内、耻垢分枝杆菌 )仅见 3 83bp片段 (猿猴分枝杆菌与结核分枝杆菌复合体相同 )。与上述相比 ,分枝杆菌感染的临床标本分别增加了一条 2 6 8bp片段。对 2 0 9例临床初步诊断为淋巴结结核病人的石蜡包埋组织标本进行了多重PCR检测 ,1 93例病理诊断为淋巴结结核、结核性肉芽组织、结核性肉芽肿性炎症病人的标本 ,检测结果符合结核分枝杆菌复合体感…     

一种简便的从石蜡包埋组织中提取RNA的方法

目的:建立一种从石蜡包埋组织提取高质量RNA的简便、经济的方法。方法:运用TRIzol法和改进的AGPC(酸-异硫氰酸胍-苯酚-氯仿)法等2种提取方法,从50例石蜡包埋组织中提取RNA,用紫外分光光度仪测定RNA的产率和纯度;用管家基因β-肌动蛋白做RT-PCR,检测RNA的质量。结果:TRIzol法提取RNA的成功率为96%(48/50),AGPC法为94%(47/50),2种方法所得RNA的吸光度值及得率在统计学上均无明显差异。结论:AGPC法和TRIzol法的提取效率相似,且提取费用只有TRIzol法的一半左右,是一种简便、经济、适合大量提取石蜡包埋组织中的RNA的方法,可用于临床。     

石蜡包埋前组织去黑色素法探讨

在研究含有黑色素的肿瘤时,其组织石蜡切片HE染色如未经去色素处理,显微镜下可见大量浓密的黑色素颗粒,遮盖组织结构无法正常观察,作出正确判断,必须进行去黑色素处理。传统的去黑色素方法是在石蜡切片上进行脱色素反应,常用脱色剂为高锰酸钾或过氧化氢,二者均为强氧化剂,在去除黑色素的同时,极易使组织片脱落。尤其在进行免疫组化染色时脱片更为严重。     

CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒提取食用菌DNA

目的:为探索从食用菌子实体中快速分离和纯化DNA的方法.方法:以三种栽培的食用菌为材料,采用CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒进行基因组DNA的分离和纯化.结果:与对照相比,结合法提取DNA样品的电泳条带更规则、清晰,并且DNA的酶切效率显著高于对照.结论:该结合法是一种快捷、高效提取纯化食用菌子实体DNA的方法.     

原位杂交检测石蜡包埋组织中丙型肝炎病毒RNA

为了提高ＨＣＶＲＮＡ的原位杂交检出率,我们应用地高辛标记ＨＣＶ５＇非编码区ｃＤＮＡ作探针,采用原位分子杂交法对９６Ｎ肝硬变,１０２例肝细胞肝癌进行了ＨＣＶＲＮＡ检测,并结合不同年份标本中ＨＣＶＲＮＡ的检出率,探讨ＨＣＶＲＮＡ在肝脏的分布及其丢失问题．结果显示ＨＣＶＲＮＡ定位于肝细胞和肝癌细胞胞浆内,肝脏其它细胞未见明确阳性杂交信号。ＨＣＶＲＮＡ杂交阳性细胞呈灶状和弥漫分布,正常对照、替代、空白对照为阴性,在不同年份肝硬变及肝细胞肝癌中两两比较表明新近包埋蜡块组织较陈旧蜡块组织ＨＣＶ　ＲＮＡ检出率明显高。本文结果证实ＨＣＶＲＮＡ存在于肝细胞和癌细胞的胞浆内,未见肝内其它细胞阳性,还发现ＨＣＶＲＮＡ在肝硬变、肝细胞癌中的检出率随保存时间的延长,其阳性检出率明显降低,表明ＨＣＶＲＮＡ在蜡块中存在明显的降解,应尽可能选用近期标本、为临床分析ＨＣＶ感染,ＨＣＶ与肝硬变、肝细胞肝癌的关系提供更客观的数据。     

DNA提取方法对一串红不同部位DNA提取的比较

本文以一串红的叶片、茎段、花为材料,分别采用高盐低pH法、十二烷基硫酸钠(SDS)法、改良十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法、核DNA法和十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)区室法等5种不同方法对其进行了基因组DNA提取效果的比较分析.结果表明,除用高盐低pH法在一串红花中未提取出DNA外,其它均可提取出DNA,都能进行RAPD扩增.5种方法在一串红DNA提取中,提取效果由高到低依次为:核DNA法、改良CTAB法、SDS法、CTAB区室法、高盐低pH法;3个部位提取结果显示:叶片较容易得到高质量的DNA,茎段次之,花最差.     

肺癌石蜡包埋病理组织结构菌L型检测

流行病学研究发现肺结核患者发生肺癌的危险度明显升高,因此人们对肺癌与肺结核的关系给予一定的关注。我们选择手术切除肺癌组织,经福尔马林固定、石蜡包埋,进行改良抗酸染色（ＩＫＳ）、聚合酶链反应（ＰＣＲ）和结核菌抗体免疫组织化学染色（ＩＨＣ）检测,以探讨肺...     

不同保存和处理方式对全血标本总RNA提取的影响

目的分析全血标本RNA提取的影响因素,并对全血RNA提取条件进行优化。方法收集100例全血标本,混匀后分为低渗红细胞溶解组(A组,50例)和全血直接提取组(B组,50例),利用Trizol试剂提取放置在不同温度、不同保存时间的全血标本总RNA,并采用Ur-2401紫外分光光度计测定其浓度和纯度;另选60例全血标本作为反复冻融组(C组),取不同次数反复冻融的全血标本利用Trizol法直接提取其RNA。结果 A组和B组新鲜标本中所获取的RNA浓度分别为450.0 ng/μL和458.8 ng/μL,37℃保存7 d标本中的RNA浓度分别为374.8 ng/μL和375.2 ng/μL,不同的保存温度与时间均对总RNA浓度(P=0.003、P=0.002)和纯度(P值均为0.011)的差异均有统计学意义,而相同条件下提取的总RNA浓度和纯度的差异无统计学意义(P=0.984、P=0.311);C组全血标本反复冻融的次数与保存时间对总RNA浓度(P=0.002、P=0.001)、纯度(P值均为0.008)差异均有统计学意义,而保存温度对总RNA浓度和纯度差异无统计学意义(P=0.611、P=0.362)。结论不同条件下全血标本中所获取的总RNA浓度有所差异,但在总RNA纯度和成功率方面,低渗破坏红细胞法优于直接全血提取法,反复冻融影响全血RNA提取效率和得率。