蚯蚓外源酶与内源酶酶解产物分析

本试验采用了枯草杆菌(Bacillus subtilis)AS1.398枯草杆菌蛋白酶和自溶制备蚯蚓肽,通过前期单因素试验,设计正交试验L9(34),以氨基氮数,多肽浓度为衡量指标,对最佳酶解条件进行筛选研究,并分析了酶解液氨基酸组成和相对分子量的分布。结果表明:AS1.398枯草杆菌蛋白酶最佳酶解条为pH 6.5、酶浓度1%、温度50℃、反应时间8 h,在此条件下,酶解蚯蚓蛋白的每100 mL水解液氨基氮数可以达到16.55 mmol,多肽浓度达9.22 mg/mL;自溶酶解蚯蚓的最佳条件pH 7.0、底物浓度1∶2、温度50℃、反应时间6 h,在此条件下,酶解蚯蚓蛋白的每100 mL水解液氨基氮数可以达到21.55 mmol,多肽浓度达11.65 mg/mL;二者酶解产物分子量大部分是在5000以下的多肽、小肽及氨基酸的混合物,其中分子量在300以下占了80%,氨基酸组成平衡,含量丰富,可用来制取新型氨基酸微量元素及小肽添加剂。通过控制酶解条件,蚯蚓可以利用自身的酶源自溶来代替外源酶,从而降低成本。     

海蜇胶原蛋白肽的降血脂及抗氧化作用的研究

本研究以海蜇胶原蛋白为原料,经酶解得到海蜇胶原蛋白肽,探讨海蜇胶原蛋白肽对小鼠血脂的影响及抗氧化作用。以高脂饲料喂养ICR小鼠,建立高脂血症模型,研究胶原蛋白肽对小鼠肝系数和脂肪系数的变化情况及小鼠血脂水平、肝组织抗氧化功能的影响。结果表明海蜇胶原蛋白肽能显著降低小鼠肝系数和脂肪系数,能显著降低高脂血症小鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、动脉硬化指数(LDL-C/HDL-C)水平,升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和抗动脉粥样硬化因子(HDL-C/TC);能提高肝组织超氧化物歧化酶(SOD)谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力,并能减低丙二醛(MDA)的含量。海蜇胶原蛋白肽具有辅助减低血脂水平和增强抗氧化功能的作用。     

玉竹全粉的酶解改性及功能品质评价CSCD

采用酶解方法改善玉竹全粉的应用特性和功能品质,通过比较酶解玉竹全粉与真空冷冻干燥、传统炮制及真空微波干燥制备的玉竹全粉品质特性差异,以评估玉竹全粉酶解改性效果。以果胶酶、纤维素酶和木瓜蛋白酶组成的复合酶对玉竹全粉进行酶解,以物性指标(冲调性和色泽)、化学指标(总多糖和总黄酮含量)为评价指标,通过响应面法考察复合酶用量、时间、温度及pH值对改性玉竹全粉品质指标的影响,并优化工艺参数。采用体外抗氧化能力(Fe^(3+)还原能力、DPPH·清除能力和·OH清除能力)及体外降血糖能力(α-淀粉酶及α-葡萄糖苷酶抑制作用)等指标综合比较酶解改性对玉竹全粉功能活性的影响。结果通过响应面法优化获得玉竹全粉的最佳酶解工艺条件为:酶用量3%,酶解时间80 min,温度40℃,pH值5.5。酶解改性后玉竹全粉Fe^(3+)还原能力和·OH清除能力增强,α-淀粉酶的抑制能力亦增强,酶解改性提高了玉竹全粉的体外抗氧化和体外降血糖作用。复合酶解改性能有效改善玉竹全粉的应用特性和功能品质,可提升玉竹全粉的保健功能价值。     

一种几丁质酶基因的克隆表达及酶解产物分析

【目的】克隆耐冷菌假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.DL-6)的几丁质酶基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并研究其酶解产物。【方法】采用PCR扩增法从Pseudoalteromonas sp.DL-6中克隆几丁质酶基因(chi A),连接到表达载体p ET28a,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测几丁质酶Chi A的分子量与纯度,4-甲基伞形酮荧光底物4MU-(Glc NAc)2测定酶活,电喷雾质谱(ESI-MS)检测酶解产物。【结果】chi A基因(Gen Bank登录号KF234015)在大肠杆菌中高效表达,Ni-NTA亲和层析柱纯化几丁质酶Chi A的总活力可达168.68 U。ESI-MS检测结果表明重组蛋白酶解1%胶体几丁质的产物为几丁寡糖。【结论】利用内切几丁质酶Chi A水解几丁质生产几丁寡糖,为其在食品、医药和农业等领域的潜在应用提供有利参考。     

HPLC法检测苦杏仁苷及其酶解产物

本文建立了一个快速高效的HPLC方法同时检测苦杏仁苷及其4个体外酶解产物,色谱分析系统为安捷伦液相色谱系统,自动进样器,迪马ODS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温25℃,流动相30%甲醇,检测波长210 nm,进样量10μL。结果表明,苦杏仁苷、phenyl-(3,4,5-trihydroxy-6-methyl-tetrahydro-pyran-2-yloxy)-acetonitrile、野樱花苷、苯甲醛和杏仁腈的保留时间分别为5.087、13.836、16.357、22.775和3.307 min。该HPLC方法的重现性好,精确度和准确度高,当柱温低于30℃、pH值介于6.0~7.0时该方法结果稳定、重现性好。     

酶的超滤浓缩装置

常用的“沉淀法”和“去除溶剂法(solvent remo-val)”浓缩酶蛋白,由于有“相态”的变化而容易使酶变性,对于大体积酶溶液的浓缩也较困难。用各向异性膜加压超滤法(简称超滤法),在其可筛分的范围内可进行分离并且没有“相态”的变化,这样可避免酶的变性,还可在较短时间内进行大体积稀溶液的浓缩。超滤法还具有设备简单、经济和操作方便等特点。超滤的应用范围很广,可用于蛋白质、核酸和酶的脱盐、大     

黑水虻幼虫蛋白及其酶解产物的抗氧化活性研究

为了探究黑水虻Hermetia illucens幼虫蛋白及酶解产物的抗氧化活性,以鲜活黑水虻幼虫冻虫为原料,采用碱提酸沉法提取黑水虻蛋白,通过碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶对其蛋白质溶液进行酶解,分别从2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基、羟自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基3个方面对黑水虻蛋白及其酶解液的抗氧化能力进行测定。结果表明：黑水虻幼虫蛋白及4种酶解后的蛋白肽具有较好的抗氧化活性,其中黑水虻幼虫蛋白对ABTS自由基、羟自由基、DPPH自由基的半抑制浓度（IC50）分别为2.91、0.232、0.764 mg/mL,而酶解过后的蛋白肽具有更强的抗氧化活性,对ABTS自由基、羟自由基、DPPH自由基的最低半抑制浓度（IC50）分别为0.295、0.082、0.354 mg/mL。本研究初步证明了酶解制备抗氧化肽的可行性,为昆虫蛋白资源的利用和无抗饲料的研制提供了新的研究思路。     

超高压酶解酪蛋白及其产物在动物细胞培养中的应用

以牦牛酪蛋白为底物,游离氨基酸含量为指标,在超高压条件下分别采用胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰酶六种不同的酶水解酪蛋白并筛选出最佳用酶,并在单因素实验的基础上采用正交实验确定最佳用酶水解酪蛋白的最佳工艺条件。最后探讨水解产物在细胞培养中的应用。结果表明,胰酶水解效果最好,用其在底物浓度15%,E/S=1∶5、水解压力150 MPa,温度为45℃,pH 7.5条件下水解4h后水解产物中游离氨基酸含量高达52.18%。酶解产物对BHK-21细胞没有细胞毒性,而具有促生长作用。这为酪蛋白的进一步开发利用和蛋白质水解产物在细胞培养中的应用奠定基础。     

黄曲霉产木聚糖酶条件优化及酶解产物初步分析

一株能利用木糖及丰纤维素水解液产乙醇的黄曲霉Aspergillus flavus Z7具有产木聚糖酶的能力.通过单因素试验和正交试验优化了产酶培养基,得到最佳组分为玉米芯2%,尿素0.2%,酵母膏0.25%,K2HPO4 0.5%,NaNO,0.1%,MgSO4·7H2O 0.1%;单因素试验表明,用纱布代替塑料布密封摇瓶封口能显著提高产酶量;Z7在碱性条件下具有更强的产酶性能,在最优条件下发酵,能产生最大木聚糖酶活122.23IU/ml.通过薄层分析,验证了Z7产生的木聚糖酶具有水解木聚糖生成木糖及木寡糖的能力.     

一株产褐藻胶裂解酶的需钠弧菌筛选及酶解产物分析

[背景]褐藻胶裂解酶种类丰富、降解机制多样,是高效环保降解褐藻胶、制备褐藻寡糖的工具酶,成为褐藻植物高值化开发利用的研究热点.[目的]从海泥中筛选获得褐藻胶裂解酶高效产酶菌株,确定菌株发酵产酶最优条件,鉴定和分析酶降解产物,进而解析该酶的降解特性.[方法]以褐藻胶为唯一碳源,从海带养殖场附近海泥中筛选菌株,通过形态学观...     

降胆固醇益生菌联合大豆卵磷脂辅助降血脂保健食品的功能评价

目的研究降胆固醇益生菌联合大豆卵磷脂的保健食品的辅助降血脂作用。方法雄性SD大鼠喂普通饲料7d后,根据血清总胆固醇(TC)水平随机分成5组,每组10只,分别为样品高、中、低3个剂量组,模型对照组和空白对照组。以灌胃方式(10mL/kg)给予受试物,除空白对照组外,各组均喂高脂饲料,连续喂养30d后,称重、取大鼠眼血测定各项血脂指标。结果样品的低、中、高剂量组均能使高胆固醇血症大鼠血清TC和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平降低,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论降胆固醇益生菌联合大豆卵磷脂的保健食品对大鼠具有辅助降血脂作用。     

佛波酯诱导一种新的磷脂酶D酶解产物的生成

在人肺癌表面细胞株A－549中检测到佛波酯诱导的丁醇化鞘脂分子的产生。用[^3H]－丝氨酸标记细胞,其放射性在磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺极性头部的分布很容易被检测到,而在磷脂酸及其直接代谢衍生物中并不存在,提示这种磷脂酶D的酶解产物来源于鞘脂分子的水解,而不同于以甘油磷脂为底物的磷脂酶D的酶解产物。蛋白激酶C的抑制剂或通过佛波酯长时间处理下调细胞内蛋白激酶C水平,可抑制佛波酯诱导的丁酯化鞘脂分子的产生,表明导致这种磷脂酶D的活化需要蛋白激酶C的参与。     

α-半乳糖苷酶酶解对猕猴红细胞结构功能的影响

目的　观察α 半乳糖苷酶对猕猴类人B抗原的酶解效果 ,探讨α 半乳糖苷酶酶解对猕猴红细胞结构、功能的影响。方法　采用热吸收放散试验从 30只华南猕猴中选取类人ABO血型抗原较强的 2只A型、3只B型猕猴做为实验对象 ,以基因重组的α 半乳糖苷酶体外酶解猕猴类人B型血抗原 ,并回输到A型猕猴体内 ,测定红细胞脆性、自身溶血率、胆固醇、高铁血红蛋白、乙酰胆碱脂酶、ATP等红细胞的结构功能指标。结果　经α 半乳糖苷酶酶解后 ,猕猴红细胞胞膜完整、携氧能力正常 ,酶解后的“通用”型血回输给受体猕猴无任何输血反应发生。结论　α 半乳糖苷酶酶解对于猕猴红细胞的形态、结构、功能无不良影响 ,且在实验动物体内是安全的。     

大豆卵磷脂降血脂功能的动物实验研究

目的研究大豆卵磷脂的降血脂作用。方法雄性Wistar大鼠喂普通饲料7d后,根据TC水平随机分成5组,每组10只,分别为大豆卵磷脂高、中、低三个剂量组,模型对照组和空白对照组。以灌胃方式(10mL/kg)给予受试物,除空白对照组外,各组均喂高脂饲料,连续喂养30d后,称重、取大鼠眼血测定各项血脂指标。结果 1.2g/(kg·BW)、2.4g/(kg·BW)剂量组的大豆卵磷脂能使高胆固醇血症大鼠血清TC降低,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论大豆卵磷脂对大鼠具有降血脂作用。     

贻贝酶解降压肽的降压活性及其安全性评价

以贻贝为原料制取降压肽,探讨了不同酶解条件对其ACE抑制活性的影响,以及不同活性修饰方法对其降血压活性的影响。以SHR饲喂试验分析其降血压活性,利用小鼠急性经口毒性试验对其安全性进行了评价。结果表明,以MA1修饰的2#降压肽降压效果较好,其在2~6 h之内均有显著降压效果,平均降低为16~28mmHg。在6 h处降压效果达到最大值为28 mmHg。后经毒理试验表明其安全无毒。此外利用高效液相色谱法对样品分子量进行了分析,发现2#降压肽的分子量在1700 Dal以下,十肽以下的短肽含量较高,约占50.4%,二三肽类物质含量为7.96%,对其降压活性影响显著。     

编码极长链脂肪酸延长酶基因家族的结构及其产物的功能

ELOVL(elongation of very long chain fatty acids)基因家族是在哺乳动物中发现的一类编码极长链脂肪酸(very long chain fatty acids,VLCFA)延长酶的基因家族。ELOVL基因在不同的组织特异性表达。各种ELOVL蛋白参与不同长度脂肪酸链的延长,进而发挥更多的生物学效应。此外,ELOVL基因的变异与多种疾病相关。     

马鹿茸血酶解肽体内免疫功能及抗氧化功能关系的研究

本文分别选用由木瓜蛋白酶水解天山马鹿茸血获得的肽Ⅰ、肽Ⅱ以及原血为受试样品,研究天山马鹿茸血及其酶解肽对小鼠免疫功能和抗氧化功能的影响,其中肽Ⅰ、肽ⅡDH分别为18．1％、12．2％时,清除OH·能力最强,清除率为50．8％。分别测定了脏器指数,脾细胞增殖实验,血清中溶血素和抗体生成细胞的含量以及小鼠血清总抗氧化能力、SOD活力和MDA含量。结果表明：与对照组相比较,肽Ⅱ组能极显著提高小鼠体液和细胞免疫功能,加强小鼠的抗氧化功能（P〈0．01或P〈0．05）。此外,具有较强抗氧化活性的肽显示出了很强的免疫活性（P〈0．05）。     

浙江蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)毒激肽释放酶Ⅰ酶解产物激肽的鉴定

至今已知的蛇毒激肽释放酶作用于激肽原后都释放舒缓激肽,仅食鱼蝮(Agkistrodon piscivorus piscivorus)蛇毒激肽释放酶既释放舒缓激肽,又释放胰激肽(Iwanaga,1979)。今对浙江蝮蛇毒激肽释放酶Ⅰ作用于激肽原后的产物作了鉴定,证实也是舒缓激肽。因此蝮蛇毒激肽释放酶不同于哺乳动物的组织激肽释放酶,后者释放胰激肽(Fiedler,1979)。     

L-天冬酰胺酶与产物的相互作用

本文从几方面探讨了产物L-天冬氨酸和L-天冬酰胺酶之间的相互作用。产物与珀琥酸对酶荧光影响的比较研究以及产物存在下对碘离子淬灭酶荧光性质的观察表明产物和酶之间存在直接的相互作用。产物保护天冬酰胺酶抗胰蛋白酶水解及抗热失活作用暗示它结合在酶的活性部位附近。     

β甘露聚糖酶酶解植物胶及其产物对双歧杆菌的促生长作用

由地衣芽孢杆菌ＮＫ－２７获得的β－甘露聚糖酶在４０℃,酶液终浓度１ｕ／ｍｌ时,经１２ｈ水解魔芋粉、角豆粉、瓜儿豆胶和田菁胶所生成的酶解产物,经薄层层析检测表明为单糖和低聚糖。