重组骆驼蓬脂转移蛋白与顺铂联合抑制黑色素瘤B16细胞增殖效应的研究北大核心CSCD

旨在探讨重组骆驼蓬脂转移蛋白(Recombinant Peganum harmala lipid transfer protein,r Ph LTP)与顺铂(DDP)联用对鼠黑色素瘤B16细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。MTT法检测r Ph LTP、顺铂单独及联用后对鼠黑色素瘤B16细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡,活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(Δψm)的变化情况。结果显示,r Ph LTP和DDP联用后细胞生长抑制率和凋亡率显著高于DDP单独处理组(P<0.01);而且胞内ROS升高的水平均高于单独处理组(P<0.01),胞内Δψm水平均低于单独处理组,但无显著性差异。r Ph LTP可增强顺铂对B16细胞的生长抑制并促进细胞凋亡,与顺铂具有协同作用。     

重组天花粉蛋白与-16联合用药抑制黑色素瘤细胞增殖及成瘤

获得人源天花粉蛋白并研究其与YH-16联合用药对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10增殖及成瘤的作用。以大肠杆菌BL21重组表达天花粉蛋白r TCS并以亲和层析法纯化r TCS;以MTT法检测r TCS、YH-16、r TCS+YH-16对B16-F10细胞生长的影响;体内实验检测r TCS、r TCS+YH-16对瘤体生长的作用。结果表明,获得了电泳纯重组天花粉蛋白r TCS;r TCS可显著抑制B16-F10细胞增殖,并且抑制率显著高于YH-16组,但是r TCS与YH-16联合处理组并未比r TCS组有显著差异;r TCS与YH-16联合用药明显抑制B16-F10细胞在小鼠体内成瘤。重组天花粉蛋白r TCS联合YH-16用药对黑色素瘤细胞B16-F10的增殖及成瘤有显著抑制作用。联合策略将为治疗黑色素瘤患者提供新的契机。     

重组FN多肽CH50抑制黑色素瘤B16细胞体内转移的研究

目的研究重组纤黏连蛋白（FN）多肽CH50对小鼠黑色素瘤B16细胞体内转移的影响,以探讨CH50多肽抑制肿瘤转移的可能分子机制。方法体外培养黑色素瘤B16细胞,用荧光染料CFSE标记,接种脾脏后24h取脾、肝、肺做冰冻切片,观察肿瘤细胞在3种组织中的侵袭情况。从脾脏接种B16细胞,建立体内肿瘤转移动物模型,采用基于流体动力学的体内基因转染方法于小鼠体内表达CH50多肽,RT-PCR检测CH50mRNA在肝组织的表达,Western印迹检测CH50多肽的表达。通过比较原位肿瘤结节及转移结节在数量、大小、分布上的差异及检测原位肿瘤组织中MMP-2、MMP-9表达差异,观察CH50多肽的治疗效果。结果注射24h后即可在脾脏形成荧光结节。pCH510质粒通过尾静脉注射后,可在肝组织中检测到CH50mRNA及CH50多肽的表达。从脾脏接种B16细胞后第14天可在脾脏形成原发肿瘤,至第35天肝脏表面已形成转移瘤结节,成功建立了体内器官问（脾转肝）肿瘤转移动物模型。体内转染表达CH50多肽能抑制肿瘤生长、侵袭和转移,抑制原位肿瘤结节中MMP-2、MMP-9的表达。结论CH50多肽可以通过对MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用来抑制黑色素瘤B16细胞的成瘤能力和体内侵袭、转移能力。     

重组骆驼蓬脂转移蛋白对宫颈癌HeLa细胞化疗的增敏作用

[目的]研究重组骆驼蓬脂转移蛋白(recombinant Peganum harmala lipid transfer protein,r Ph LTP)与顺铂(DDP)协同对宫颈癌He La细胞的抑制作用及可能的作用机制。[方法]四甲基偶氮咗蓝(MTT)法检测He La细胞生长的抑制率;Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的变化情况。[结果]r Ph LTP与DDP联合应用后与相应的DDP组相比,对细胞生长的抑制率显著增强(P0.01),低浓度r Ph LTP联合2.5μg/m L顺铂对He La细胞的抑制率为(42.50±0.059)%,远高于高浓度顺铂(10μg/m L)对He La细胞的抑制率(36.88±0.134)%,细胞的凋亡率显著增加(P0.01),细胞内ROS极明显升高(P0.001)。[结论]r Ph LTP能够显著增强顺铂对He La细胞的化疗敏感性(P0.001),这种作用可能与r Ph LTP增强顺铂诱导细胞内活性氧的产生导致细胞凋亡有关。     

三苯氧胺联合顺铂及紫杉醇抑制MCF-7细胞增殖的研究

目的:研究三苯氧胺联合不同浓度的紫杉醇及顺铂对MCF-7细胞株增殖的影响.方法:流式细胞仪检测IC30及IC10两种不同剂量紫杉醇及顺铂与2×10-8MOL/L三苯氧胺联用对MCF-7细胞周期的影响,MTT法测定不同方法处理后MCF-7细胞的倍增时间.Annexin Ⅴ/PI双标法检测细胞凋亡.结果:未经处理的MCF-7细胞株G2/M期比例分别为14.2±11.4%,细胞倍增时间分别为24±4小时,凋亡率2±1.2%,死亡细胞比例1±0.5%;2×10-8MOL/L三苯氧胺与IC10剂量强度的紫杉醇+顺铂联用(L3-10)与IC10剂量的紫杉醇+顺铂(L2-10)组比较,处理后MCF-7细胞G2/M期比例分别为48.2±6.4%、47.3±8.6%,细胞倍增时间分别为42±5小时及41±5小时,凋亡率5±1.7%及6.8±2.6%.死亡细胞比例4±2.3%、2±1.8%.2×10-8MOL/L三苯氧胺与IC30剂量强度的紫杉醇+顺铂联用(L3-30)与IC30剂量强度的紫杉醇+顺铂(L2-30)比较,处理后MCF-7细胞G2/M期比例分别为50.9±8.1%、56.4±8.9%,细胞倍增时间分别为65±12小时及66±9小时,凋亡率13±3.6%及13±4.3%,死亡细胞比例4±3.0%、5±2.9%.细胞倍增时间及G2/M期比例与未处理组比较差别有统计学意义(p<0.05),但不同剂量强度的紫杉醇+顺铂组与相应联用2×10-8MOL/L三苯氧胺组比较细胞倍增时间及G2/M期比例均无统计学意义(p>0.05.结论:不同剂量顺铂、紫杉醇联合及二者与2×10-8MOL/>三苯氧胺联合均导致MCF-7细胞G2/M期阻滞及明显延长细胞倍增时间,但2×10-8MOL/L三苯氧胺与不同剂量紫杉醇+顺铂联用对抑制MCF-7的增殖抑制无明显的协同作用.     

骆驼蓬脂转移蛋白基因真核表达载体的构建及其体内外抗瘤效应的研究

目的:构建骆驼蓬脂转移蛋白(lipid transfer protein from Peganum harmala,PhLTP)基因真核表达质粒,并探讨其对黑色素瘤B16细胞在体内外的抗肿瘤作用。方法:将PhLTP基因亚克隆至pcDNA3.1上,获得重组质粒pcDNA3.1-PhLTP;用脂质体转染法将重组质粒及空载体外转染B16细胞,MTT检测其对B16细胞生长的影响。建立B16荷瘤小鼠模型,设重组质粒(pcDNA3.1-PhLTP)、空载(pcDNA3.1)、生理盐水和阳性药物(CTX)组,分别处理小鼠后测量各组肿瘤体积并称瘤重,计算抑瘤率。光镜观察鼠脾、肝等组织变化;免疫组织化学法检测各瘤体中PhLTP、血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。结果:pcDNA3.1-PhLTP转染B16细胞72 h后,细胞增殖能力明显受到抑制(P0.01)。注射pcDNA3.1-PhLTP组的小鼠肿瘤生长速度明显减慢,肿瘤体积小于空载和生理盐水组(P0.05)。显微镜下可见重组质粒组肿瘤细胞有不同程度的点、片状坏死,而肝、肺等无明显病理损伤。重组质粒组肿瘤组织中有PhLTP蛋白的表达,且VEGF和bFGF的阳性表达指数都低于空载和生理盐水组(P0.01)。结论:成功构建了重组表达质粒pcDNA3.1-PhLTP,体内外实验结果显示其能有效地抑制B16细胞的生长,预示了该重组质粒在治疗黑色素瘤中的潜在应用价值。     

Chk1反义寡核苷酸联合顺铂抑制卵巢癌侵袭转移的分子机制

目的:探究Chk1反义寡核苷酸(CHK1-ASODN)单独或联合顺铂(DDP)对卵巢癌细胞系SKOV-3侵袭转移能力的影响,并阐明其可能的分子机制。方法:体外培养人卵巢癌细胞系SKOV-3,CHK1-ASODN单独或联合DDP处理48 h后,划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;显微镜下观察细胞上皮或间质表型特征;Western blot及实时定量PCR技术分别检测上皮间质转化(EMT)特异性标志物(E-cadherin、N-cadherin)以及EMT关键调控分子ZEB1的蛋白及m RNA的表达水平。结果:与对照组相比较,CHK1-ASODN单独或联合DDP均能显著抑制SKOV-3细胞的迁移及侵袭(P0.05);细胞表现为间质化表型;E-cadherin的表达显著升高(P0.05),而N-cadherin的表达则显著降低(P0.05);ZEB1的表达显著降低(P0.05)。结论:CHK1-ASODN单独或联合DDP下调ZEB1的表达进而逆转EMT可能是其抑制卵巢癌侵袭转移的重要机制之一。     

带HSV-tk基因的重组腺病毒基因治疗小鼠B16黑色素瘤的实验研究

我们成功开展了携带单纯疱疹Ⅰ型病毒胸腺嘧啶激酶基因(Herpes simplex virus thy-midine kinase,HSV-tk)的复制缺陷型重组腺病毒Ad(HSV-tk)结合使用GCV治疗C 57 BL/6小鼠B 16黑色素瘤的离体及动物试验。导入了HSV-tk基因的B16细胞对GCV的杀伤作用高度敏感,IC_(50)约为0.1μg/ml;感染与未感染Ad(HSV-tk)的B 16细胞混合后,可观察到显著的细胞毒杀伤作用——“旁观者效应”。Ad(HSV-tk)直接注入C57BL/6小鼠已建成的B16黑色素瘤内,结合连续6 d腹腔给予GCV,肿瘤结节出现萎缩坏死现象,大小仅为对照组的1/25。灵敏的RT-PCR检测结果表明:瘤内注射Ad(HSV-tk)后,腺病毒的扩散范围是有限的,HSV-tk基因的表达局限于肿瘤组织内。因此,Ad(HSV-tk)/GCV疗法可能为黑色素瘤等恶性实体瘤的治疗提供了一种较为有效、安全的选择方案。     

MicroRNA-34a抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的研究

该文采用阳离子脂质体Lipofectamine介导的方法将microRNA-34a转染入体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞M23和SP6.5。应用BrdU法、细胞平板克隆形成实验检测转染microRNA-34a后对细胞增殖的影响,发现M23和SP6.5细胞增殖明显被抑制(P<0.01);并利用流式细胞技术检测转染microRNA-34a后细胞周期的变化,发现细胞停滞于G_1期;同时检测转染microRNA-34a后细胞caspase-3/7酶的活性,发现无明显改变。另外,Real-time PCR检测表明阿霉素处理后M23、SP6.5细胞中microRNA-34a的表达量上调(P<0.01)。用阿霉素处理转染microRNA-34a的M23、SP6.5细胞,检测caspase-3/7酶活性的改变,发现caspase-3/7酶活性显著增加(P<0.01)。本研究表明microRNA-34a通过抑制细胞周期来抑制体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖,能够增加细胞对阿霉素的敏感性,但不直接诱导细胞凋亡。     

重组肽rLj-RGD4对小鼠黑色素瘤B16细胞活性的影响

该研究在前期重组日本七鳃鳗RGD3毒素蛋白(recombinant Lampetra japonica RGD3,rLj-RGD3)工作基础上,设计并人工合成分子克隆,获得去纯化标签的rLj-RGD4。该论文采用小鼠黑色素瘤(B16)为肿瘤细胞模型,对rLj-RGD4是否抑制B16细胞增殖、迁移、浸润与凋亡进行了研究。研究结果表明,采用不同浓度的rLj-RGD4经MTT方法检测发现,rLj-RGD4对B16细胞的增殖有抑制作用,IC50为9.6μmol/L;使用Transwell法和细胞划痕实验结果证实,rLj-RGD4对B16细胞的迁移和浸润都具有抑制作用,且呈剂量依赖方式;B16细胞经鬼笔环肽-FITC染色结果显示,rLj-RGD4肽对B16细胞骨架发生破坏;Hoechst 33258法和TUNEL-FITC法结果显示,rLj-RGD4可诱导B16细胞发生凋亡;运用Western blot对其诱导B16细胞发生凋亡的作用机制研究结果显示,随着rLj-RGD4浓度的增加cleaved-caspase-8和cleaved-caspase-3的水平显著增加,B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma/leukaemia-2,Bcl-2)基因水平量显著减少。由此可见,rLj-RGD4具有显著促B16细胞凋亡的作用,具有抑制增殖与侵袭的功能,有可能成为一个具有抗肿瘤作用的候选药物。     

康莱特联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过康莱特联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:体外培养宫颈癌Siha细胞,分别将康莱特(浓度为1,2,4,6,8 mg/mL),顺铂(浓度梯度为1.5,3,6,9,12μg/mL),单独作用于宫颈癌SiHa细胞,加药24h、48h用噻唑蓝(MTT法)检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测康莱特组和顺铂组细胞24h凋亡率,选取合适的药物浓度(康莱特6 mg/mL,顺铂3μg/mL),进行联合用药,加药24h、48h用MTT法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h细胞凋亡率。结果:①MTT法显示加药后两组的24h、48h,宫颈癌SiHa细胞的抑制率均高于对照组(P0.05),并且在一定程度上呈浓度和时间依赖性。②联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药(P0.01)。结论:康莱特、顺铂单独或联合作用均能抑制SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,且康莱特联合顺铂的作用要显著高于单独用药,康莱特与化疗药物联合使用可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

姜黄素联合顺铂对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察姜黄素联合顺铂对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度的姜黄素、顺铂和姜黄素联合顺铂处理人骨肉瘤细胞MG-63不同时间,通过MTT法检测其对MG-63细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测其对MG-63细胞克隆形成能力的影响;流式细胞仪检测其对MG-63细胞凋亡的影响。结果:单用姜黄素或顺铂均可以时间和浓度依赖性方式抑制骨肉瘤细胞MG-63的增殖。与空白对照组相比,单用10μmol/L姜黄素和2、4μmol/L顺铂可抑制MG-63细胞的增殖,降低其克隆形成率并提高细胞凋亡率(P<0.05);而与姜黄素和顺铂单用处理相比,10μmol/L姜黄素分别与2、4μmol/L顺铂联合应用,可更显著抑制MG-63细胞的增殖,降低其克隆形成率并提高细胞凋亡率(P<0.01)。结论:姜黄素联合顺铂与单药相比能够显著抑制人骨肉瘤细胞MG-63细胞的增值,促进其凋亡,两药对骨肉瘤细胞的杀伤效应具有一定的协同性。     

植物非特异脂转移蛋白的研究

综述了植物抗菌蛋白nsL TPs的研究进展：植物抗菌蛋白nsL TPs是一类对细菌、真菌等微生物有抑制或杀灭作用的蛋白质：它们的抗菌能力强,有较好的耐热性,抗菌机理独特,在农业生产上有着广泛的应用前景。     

带HSV—tk基因的重组腺病毒基因治疗小鼠B16黑色素瘤的实验研究

我父成功开展了携带单纯疹疹Ⅰ型病毒胸腺嘧啶激酶基因（Ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓｔｈｙ－ｍｎｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ,ＨＳＶ－ｔｋ）的复制缺陷型重组腺病毒Ａｄ（ＨＳＶ－ｔｋ）结合使用ＧＣＶ治疗Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｂ１６黑色素瘤的离体及动物试验。     

SAHA与顺铂联合用药对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响

该文研究了组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)联合顺铂(cisplatin,DDP)对骨肉瘤细胞的作用。骨肉瘤143B细胞分别经不同浓度的SAHA、DDP、SAHA+DDP作用48 h。利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;分别采用MTT法、流式细胞术、细胞划痕实验、克隆形成实验检测SAHA、DDP及二者联用对143B细胞活力、细胞凋亡、细胞迁移和集落形成能力的影响。利用Western blot检测143B细胞中cleaved-Caspase-8、cleaved-PARP蛋白表达水平。结果显示,SAHA+DDP组143B细胞大量坏死,抑制细胞增殖的现象明显高于单药组;中低剂量SAHA与DDP联用表现为协同作用,而较高剂量的联用表现为单纯相加作用;SAHA+DDP组较单药组细胞早期凋亡率增加、迁移率明显降低,且SAHA+DDP组的细胞集落形成能力明显降低;SAHA+DDP组能够促进cleaved-Caspase-8、cleaved-PARP的蛋白表达。以上结果表明,SAHA联合顺铂对骨肉瘤细胞143B细胞有协同增敏作用,能够明显抑制其增殖和迁移并促进其凋亡。     

抑制 Livin 基因对肺腺癌 SPC-A1 细胞增殖及顺铂敏感性的影响

目的:Livin是近年来发现的人类凋亡抑制蛋白(inhibitorof apoptosis protein,IAP)家族的新成员,发现在多数肿瘤中表达,与肿瘤发生有密切关系,并可能作为肿瘤诱导凋亡治疗的新靶点。本研究旨在探讨si RNA-Livin和夫拉平度(Flavopiridol,FP)协同凋亡诱导配体(TRAIL)两种方式有效抑制Livin表达,诱导非小细胞肺癌SPC-A1凋亡并增强对化疗药物顺铂的敏感性。方法:si RNA-Livin转染SPC-A1,Real-Time PCR检测Livin基因的表达水平,MTT检测干扰组和干扰加药组肿瘤细胞的增殖及活性;TRAIL、FP单独及联合作用诱导细胞凋亡,蛋白质印迹法检测凋亡抑制蛋白Livin的表达水平,MTT检测各处理组细胞的增殖及活性。结果:100 nmol/LFP处理组(F)细胞存活率为(84.30±1.34)%,100 ng/m LTRAIL处理组(T)为(93.40±1.56)%,FP和TRAIL联合组(F+T)为(48.02±1.35)%,si RNA-Livin处理组为(50.88±1.14)%,1.2μg/m L Cisplatin处理组为(19.30±0.89)%,si RNA-livin+Cisplatin组为(14.37±0.81)%,FP+T+Cisplatin组为(10.86±0.87)%,C组存活率为100%。F+T组对细胞的增殖抑制作用显著高于单独用药组,si RNA-livin+Cisplatin与si RNA-Livin组相比、FP+T+Cisplatin与FP+T组相比都显著增强了化疗药物对SPC-A1的杀伤作用。50μmol/LZ-VAD-FMK预处理后联合用药组细胞的存活率为(88.16±1.64)%,caspase抑制剂能明显抑制F+T联合处理组的凋亡效应。结论:RNA干扰和F+T联合用药都能显著降低凋亡抑制蛋白Livin的表达,有效抑制肿瘤细胞的增殖生长,并增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性,为肺腺癌的靶向治疗提供新的理论依据。     

LncRNA ITGA9-AS1抑制乳腺癌细胞增殖并增强其对顺铂的敏感性

长链非编码RNAs (long non-coding RNAs, lncRNAs) 是一类长度大于200 nt,无蛋白质编码功能的RNAs。近年来,lncRNAs在肿瘤发生发展中的作用备受关注。LncRNAs芯片分析结合后期实时荧光定量PCR验证发现,ITGA9-AS1在MCF-7细胞中的表达量显著高于耐药细胞MCF-7/5Fu,且其在乳腺癌细胞中的表达量显著低于正常乳腺上皮细胞。生物信息学预测,ITGA9 AS1无蛋白质编码功能。在乳腺癌细胞T47D中过表达ITGA9-AS1,可显著抑制该细胞的增殖和克隆形成能力,增加该细胞对化疗药物顺铂（cisplatin, cDDP）的敏感性。相反,在乳腺上皮细胞MCF-10A中敲低ITGA9-AS1的表达,能够明显增加该细胞的增殖能力和克隆形成能力,同时降低该细胞对cDDP的敏感性。总之,lncRNA ITGA9-AS1可抑制乳腺癌细胞增殖,增强乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性。     

重组卡介苗HSP65抑制小鼠移植黑色素瘤的初步药效学研究

观察卡介苗来源的热休克蛋白HSP65对小鼠移植黑色素瘤的抑制作用并初步探讨可能的作用机制。通过基因工程手段获得纯化的重组HSP65蛋白,与弗氏佐剂联合给药C57BL/6J小鼠。分别设计了两组免疫方案,一组于肿瘤细胞接种前免疫3次,另一组于肿瘤细胞接种前免疫7次。结果在免疫3次的情况下,虽然也能激发较高的特异性抗HSP65抗体,但抑瘤效果不明显(抑瘤率14.2%);增加免疫次数到7次后,抑瘤率高达73.2%,效果显著。经肿瘤组织病理切片发现,增加免疫次数导致肿瘤组织中灶性坏死增加,淋巴细胞浸润增加,且肿瘤细胞病理性核分裂相减少,提示了该疫苗作用的可能机制。     

两种天然产物对B16F10细胞增殖及黑色素合成抑制机理研究

旨在研究10-羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin,HCPT)和白藜芦醇(Resveratrol,Res)对体外培养的小鼠恶性黑色素瘤B16F10细胞的增殖及黑色素合成抑制机理。利用MTT法、显微观察、L-Dopa氧化法、Na OH裂解法分析不同浓度HCPT和Res对细胞增殖、细胞形态、酪氨酸酶活性及黑色素合成含量的影响。荧光半定量PCR方法(Semi-RT-PCR)分析该化合物对黑色素合成关键因子酪氨酸酶(TYR)和小眼相关转录因子(MITF)基因表达的影响。结果表明HCPT(40、80、120、160和200μmol/L)和Res(80、120、160和200μmol/L)能够通过诱导细胞凋亡抑制B16F10细胞的增殖,同时对酪氨酸酶活性和细胞黑色素生成具有明显抑制作用(P0.05),且呈现浓度依赖性。另外,不同浓度的HCPT以及高浓度Res(120和160μmol/L)能够显著下调B16F10细胞TYR和MITF基因的mRNA水平。HCPT和Res可能通过诱导细胞凋亡抑制B16F10细胞的增殖,同时通过下调MITF基因转录,抑制TYR m RNA的表达及TYR酶活性,进而抑制细胞黑色素的生成。     

二甲双胍联合顺铂对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用

为研究二甲双胍联合顺铂处理对人成骨肉瘤MG-63细胞的影响及潜在作用机制,本研究使用无药物处理组为对照组细胞,使用二甲双胍和顺铂联合处理MG-63细胞,采用CCK8法和流式细胞术检测细胞的增殖凋亡情况;用细胞克隆形成实验检测各组克隆形成率;用Trans well实验检测各组细胞迁移侵袭能力,用qPCR法和蛋白质印迹法检...