金雀异黄素对小鼠红白血病细胞系MEL的抑制作用

选择小鼠红白血病细胞系MEL作为金雀异黄素 (genistein)的作用对象 ,以探讨其对MEL的抑制作用及其可能的作用机理 .MTT和生长曲线表明 ,金雀异黄素对MEL细胞具有很强的生长抑制作用 (半数最大抑制效应浓度IC50 为 7 12mg L) .流式细胞术显示 ,金雀异黄素能够使MEL细胞发生G2 M期阻滞 ,但是诱导MEL凋亡作用并不明显 .DNA凝胶电泳发现金雀异黄素能够造成MEL细胞DNA的损伤 .联苯胺染色显示金雀异黄素对MEL细胞具有很强的诱导分化作用 ,且这种作用是时间和剂量依赖性的 .RT PCR显示 ,金雀异黄素能够抑制MEL细胞中原癌基因c myc的表达 .生物流变学检测发现 :金雀异黄素作用后 ,MEL细胞表面电荷密度减少、渗透脆性增大、细胞最大变形能力下降     

多柔比星诱导人前列腺癌细胞免疫原性死亡

钙网蛋白(calreticulin,CRT)是介导肿瘤细胞发生免疫原性死亡的关键性信号分子,在某些理化因素诱导肿瘤细胞发生凋亡的过程中,内质网上的CRT迅速转位到细胞膜上。作为一种特异的信号分子,凋亡肿瘤细胞膜上的CRT能介导吞噬细胞对凋亡肿瘤细胞的识别和吞噬。目前有关免疫原性肿瘤细胞死亡的实验数据大多由动物细胞和动物活体实验得到,人肿瘤细胞在发生免疫原性细胞死亡时,是否也具有CRT膜转位这样的分子事件还需要进一步探讨。研究分析了3种临床常用的肿瘤化疗药物(柔红霉素、长春新碱、顺铂)对人前列腺癌PC3细胞CRT亚细胞定位的影响,及其在介导肿瘤细胞免疫原性死亡中的作用。在对比分析的3种临床抗肿瘤药物中,柔红霉素和顺铂可诱导人前列腺癌PC3细胞发生凋亡,但仅柔红霉素处理的PC3细胞膜上CRT的表达量显著增加。膜上高表达CRT的PC3细胞能更有效地被吞噬细胞吞噬。结果表明,柔红霉素作为抗肿瘤药物,能诱导敏感人肿瘤细胞的免疫原性细胞死亡。     

小鼠红白血病细胞分化的诱导

在我们的实验里,建立了小鼠病毒(按即Friend 病毒——译者)所诱发的红白血病组织培养细胞株,从而有可能研究肿瘤发生与正常细胞生长的调节机制之间所涉及的复杂的相互关系。当前有许多人从事这项工作。这种细胞在某些情况下能接受刺激,进行分化,因此使详尽的研究类红血细胞分化的分子控制成为可能。把 Friend 病毒诱发白血病濒于晚期的小鼠的脾脏碎块作皮下接种,可以形成肿瘤,但肿瘤细胞并没有类红血细胞的特征,而是类似网     

电场诱导小鼠红白血病细胞融合

本文以小鼠红白血病细胞株(MEL)为实验材料,用自制的设备和电极进行细胞电融合研究.经Pronase E(0.5mg/ml)预处理的细胞,融合率可高达90%.融合的多核细胞经培养能存活三至四天,有的能存活六天,并且用DMSO诱导保持原有的主物活性,具有分化能力.     

诱导小鼠红白血病细胞分化过程中钙调素水平变化

本文主要以病毒感染的小鼠红白血病细胞为模型,使用显微分光光度术,利用荧光染料ＦＩＴＣ以及ＰＩ,同时测量了在５ｍｍｏｌ／Ｌ ＨＭＢＡ诱导ＭＥＬＣ分化过程中不同周期时相单细胞内钙调素水平及ＤＮＡ含量,结果表明,在ＭＥＬＣ分化过程中细胞内钙调素水平在各周期时相均下降,这可能与ＭＥＬＣ分化和细胞增殖受到抑制。Ｇ１期延延长有关。     

端粒酶抑制剂6-硫代-2’-脱氧鸟苷诱导肿瘤细胞免疫原性死亡

该文主要探讨端粒酶抑制剂6-硫代-2’-脱氧鸟苷(6-Thio-2’-deoxyguanosine, 6-Thio-dG)是否诱导肿瘤细胞免疫原性死亡(immunogenic cell death, ICD),并揭示所产生的ICD的免疫应答特征,为利用6-Thio-d G诱导肿瘤细胞ICD开展免疫治疗提供基础。首先,用不同浓度的6-Thio-d G处理小鼠黑色素瘤B16-F10、结肠癌CT26、宫颈癌相关肿瘤TC-1和乳腺癌4T1细胞,在不同时间点用显微镜观察细胞死亡情况及形态特征;利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)试剂盒定量分析细胞死亡情况;以检测试剂盒以及酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)分析细胞死亡过程中免疫介质释放情况;免疫荧光染色实验考察钙网蛋白(calreticulin, CALR)向细胞膜的迁移定位。进一步,建立皮下移植TC-1小鼠肿瘤模型,当肿瘤长至4～5 mm时,注射6-Thio-d G对荷瘤小鼠进行治疗性干预,通过酶联免疫斑点技术(enzyme-linked imm...     

TFAR19基因对小鼠红白血病MEL细胞生长及其流变学特性的影响

通过脂质体介导基因转染的方法, 获得了稳定携带TFAR19基因的小鼠红白血病细胞系MEL-TF19. 经Western blot证实该细胞系有TFAR19蛋白表达. 生长曲线及流式细胞仪检测结果表明, 转染TFAR19基因后MEL细胞生长受到抑制, 并且在凋亡诱因的存在下使细胞凋亡率增高. 流变学研究结果显示, 转染TFAR19基因在加速MEL细胞凋亡的同时, 使细胞对低渗的抵抗力降低, 渗透脆性加大, 细胞表面电荷减少, 电泳率降低; 与细胞最大变形能力呈负相关的弹性模量K₁增加, K₂无明显变化, μ 明显减小. 以上结论从生物流变学角度为全面、深入地认识凋亡新相关基因TFAR19的功能提供了理论基础.     

小鼠红白血病细胞被诱导向终末期定向分化的观察

小鼠病毒性红白血病细胞(Murine Erythroleuklmia Cell,以下筒称MEL细胞)在红系祖细胞分化过程中相当于CFU-e阶段。在体外培养的条件下,MEL细胞能被一些化学物质诱导而向终末期定向分化,表现在逐渐丧失无限增殖能力,并合成和积累血红蛋白。这种定向分化是一项复杂的多步骤过程。细     

去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

体外实验证明１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ,可诱导Ｋ５６２细胞发生凋亡。提取加药组细胞ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳呈现典型的ＤＮＡ“梯子”,同时加药组细胞出现核固缩、碎裂及胞浆浓缩等形态学变化。流式细胞测试结合形态学观察,特别是细胞超微结构观察,证明去甲斑蝥素诱导的Ｋ５６２细胞凋亡大部分发生在细胞周期的Ｍ期,也有部分发生在间期。免疫细胞化学结果表明,１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ,与对照组相比,加药组细胞中ｂｃｌ┐２蛋白表达增强,而Ｂａｘ蛋白表达减弱,两组间有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。     

小鼠白血病实验模型

动物白血病模型包括自发性白血病、由物理、化学及生物致癌因子诱发的白血病以及在纯系动物中传代的细胞移植性白血病.它们在研究人类白血病和其它恶性肿瘤的病因学、发病学、实验治疗和新抗癌药物的筛选中都发挥了重要作用.早在1908年,有学者用鸡白血病组织的     

重组CHO细胞乙肝表面抗原诱导小鼠细胞免疫应答的研究

为了研究重组CHO细胞乙肝表面抗原(CHO-rHBsAg)在小鼠中诱导T细胞免疫应答的能力,全面评价疫苗的免疫原性,以CHO-rHBsAg免疫BALB/c小鼠,常规制备小鼠脾脏淋巴细胞并在体外以抗原或特异多肽刺激;采用ELISA法测定抗原特异性T淋巴细胞分泌的细胞因子,乳酸脱氢酶法(LDH)测定抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性,酶联斑点法(ELISPOT)测定CTL频数(CTLp),应用流式细胞仪分析T淋巴细胞亚群。结果显示,rHBsAg可在小鼠中诱导Th1及Th2类细胞因子;加铝佐剂的rHBsAg较未加佐剂的抗原可诱导较高水平的IFN-γ、CTL克隆及较高百分比的CD8+T淋巴细胞亚群。重组CHO细胞来源的HBsAg可在BALB/c小鼠中诱导一定程度的细胞免疫应答。     

康莱特联合阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究康莱特对骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用及其相关机制,探寻骨肉瘤的中西医结合化疗方案.方法免疫组化及RT-PCR方法检测不同浓度康莱特作用下骨肉瘤细胞的Fas表达,并将康莱特与阿霉素单独及联合应用于骨肉瘤细胞,采用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜、荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变.结果康莱特可上调骨肉瘤细胞的Fas表达并诱导凋亡,康莱特浓度达到10μl/ml时,细胞抑制率不再明显改变,但如与1μlg/ml阿霉素合用将使细胞抑制率进一步提升(P<0.01).细胞形态观察及凋亡率测定也显示,康莱特与阿霉素联用可诱导更多骨肉瘤细胞凋亡.结论康莱特可通过上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡,康莱特与阿霉素合用可提高杀伤骨肉瘤细胞.     

灵芝多糖对小鼠细胞免疫功能调节作用的实验研究

研究灵芝多糖 (GLB7)对小鼠细胞免疫功能调节作用的影响。实验小鼠分成 4组 ,分别经胃灌注不同剂量 (高、中、低 )灵芝多糖 ,每天 1次 ,连续 14d ,对照组小鼠用以等量蒸馏水代替。分别于实验第 15 ,2 8d进行小鼠细胞免疫功能调节作用的测试。灵芝多糖喂药后 2周 ,3个剂量组小鼠脾淋巴细胞转化试验、小鼠腹腔巨噬细胞对鸡血红细胞的吞噬百分率和吞噬指数 ;低剂量组小鼠迟发型变态反应 (DTH)、小鼠碳廓清 ;高剂量组小鼠NK细胞活性和对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。喂药后 4周 :上述实验结果和对照组比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结果提示灵芝多糖能提高小鼠的非特异性和特异性细胞免疫功能。     

阿霉素联合顺铂诱导宫颈癌细胞凋亡实验研究

目的:研究化疗药物阿霉素(ADM)联合顺铂(DDP)对宫颈癌CaSki细胞株的增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的相互作用机制。方法:应用MTT比色法检测不同浓度阿霉素、顺铂单独和联合应用对宫颈癌CaSki细胞的增殖抑制作用;同时RT-PCR法在mRNA水平上检测Bcl-2和TNF-α基因表达量的变化。结果:两种药物单独应用均可抑制CaSki细胞的增殖,联合用药(<12μg/mL)时具有协同抑制作用并与各药物单一应用比较具有显著性差异(P<0.05);阿霉素、顺铂作用CaSki细胞后能上调TNF-α基因和下调Bcl-2基因的表达。结论:宫颈癌CaSki细胞在化疗药物阿霉素和顺铂两药联合作用下通过诱导TNF-α和Bcl-2 mRNA表达量的变化发挥协同抑制作用,同时TNF-α的高表达增强了化疗药物阿霉素和顺铂诱导肿瘤细胞凋亡的敏感性,其机制主要与凋亡诱导效应有关。     

鬼毛针多糖对小鼠细胞免疫功能影响的实验研究

20世纪80年代后多种真菌多糖的抑瘤活性被发现以来,真菌多糖作为一类新型药物引起越来越多的关注,成为一个非常活跃的研究领域。目前已证实多种真菌多糖可以通过激活T淋巴细胞、B淋巴细胞、活化巨噬细胞和NK细胞、激活补体、调节细胞因子分泌等对免疫系统发挥多方面的调节活性[     

结核感染小鼠肺部病理变化与T细胞免疫关系的实验研究

目的探讨结核病小鼠肺部病理变化与T细胞亚群的关系。方法将60只C57BL小鼠随机分为3组,每组20只。结核病模型组小鼠经球后静脉丛注射人型结核分枝杆菌标准毒力珠（H37RV）;免疫调节剂组结核病模型小鼠于H37RV感染后第3、10、17天分别肌注22.5μg母牛分枝杆菌菌苗（微卡菌苗）;正常对照组小鼠未做处理。感染4周后,留取外周血用流式细胞仪测定T细胞亚群;取肺组织,采用常规苏木精-伊红染色和抗酸染色后病理切片观察病理变化。结果结核病模型组小鼠大部分肺组织实变,多数肺泡腔消失,肺泡隔重度增宽,肺间质内可见大量炎性细胞浸润,浸润细胞以中性粒细胞为主,淋巴细胞较少。残存的肺泡腔中有红细胞、纤维素渗出。肺实变区内分布大量的紫红色结核分枝杆菌,主要存在于单核-巨噬细胞胞质内。外周血T细胞亚群的相对比率明显减少。免疫调节剂组肺组织病变和结核病模型组大致相似,但实变病灶较少,多数肺泡腔存在,肺泡隔内浸润淋巴细胞较多,肺泡腔内有渗出单核-巨噬细胞。肺实变区内结核分枝杆菌明显少于结核病模型组,CD3^＋与CD4^＋T细胞比例增加,能显著增加γδT细胞比例。结论微卡菌苗可增强结核病小鼠的免疫功能,使肺实变病灶较少和病灶内结核分枝杆菌明显减少,肺泡腔内单核-巨噬细胞增多,为免疫调节剂辅助治疗结核病提供理论依据。     

结核分枝杆菌海藻糖磷酸磷酸酶诱导小鼠体液和细胞免疫应答

目的 研究结核分枝杆菌(M．tuberculosis)海藻糖磷酸磷酸酶(TPP)诱导小鼠体液和细胞免疫。方法 差速离心分离结核分枝杆菌H37Rv和卡介苗(BCG)的各细胞组分,通过Western杂交检测抗原TPP在结核分枝杆菌H37Rv和BCG中的亚细胞定位情况。分别用5×10~6CFU的BCG和50μg的TPP蛋白免疫C57BL/6小鼠,检测小鼠血清中抗TPP的IgG1和IgG2a抗体效价。取免疫小鼠的脾细胞,体外抗原刺激,用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测γ干扰素(IFN-γ)分泌细胞。结果 TPP亚细胞定位于结核分枝杆菌H37Rv和BCG的胞壁和细胞膜组分。TPP蛋白免疫后小鼠产生的TPP特异性IgG1和IgG2a抗体效价明显高于BCG免疫小鼠,并且IgG2a的抗体效价高于IgG1。体外抗原刺激TPP蛋白和BCG免疫小鼠的脾细胞,都能诱导较高的IFN-γ分泌。结论 结核分枝杆菌细胞壁蛋白TPP能诱导小鼠Ⅰ型辅助性T细胞介导的免疫反应,可作为抗结核疫苗的候选抗原。     

阿霉素诱导足细胞凋亡模型的研究

[目的]建立由阿霉素(Adriamycin,ADM)诱导的足细胞凋亡模型,深入了解不同浓度阿霉素对足细胞凋亡及相关蛋白的影响,为进一步研究肾病综合征及相关抗足细胞凋亡药物的作用机制奠定实验基础。[方法]采用温度敏感型足细胞在33℃完全培养基中(含IFN-γ)进行增殖培养,在37℃完全培养基中(不含IFN-γ)诱导培养14 d后形成终末分化足细胞;采用MTT法检测不同浓度ADM(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、0.9μg/mL)在24 h时对足细胞活性的影响;采用流式细胞术检测不同浓度ADM对足细胞凋亡的影响;采用Western Blot法检测P53、Bcl-2/Bax、Caspase-3和Podocin相关蛋白的表达情况。[结果]阿霉素在0.2~0.3μg/mL时即可显著影响足细胞活力(p0.05),且相关蛋白表达有显著变化(p0.05)。[结论]0.2~0.3μg/mL范围内的阿霉素即可有效诱导足细胞凋亡,为后期建立阿霉素肾病的细胞模型提供实验基础。     

微量元素对小鼠细胞免疫功能影响的研究

用灌胃法观察了微量元素锂、锌、硒对小鼠细胞免疫功能的影响。结果显示 ,锂、锌、硒均可促进胸腺、脾脏增长 ,显著提高小鼠E 花结形成、淋巴细胞增殖反应 ,亦可显著提高小鼠巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数。各实验组之间无明显差异。可见 ,适量的锂、锌、硒可促进胸腺、脾脏增长 ,提高机体巨噬细胞吞噬功能 ,增强细胞免疫功能     

红细胞免疫调控功能的研究进展

红细胞内富含血红蛋白,血红蛋白可以根据氧分压的高低与氧气结合或解离。除氧气运输外,红细胞可通过免疫黏附、调节补体系统活性、直接杀伤病原体等机制执行免疫调控功能。哺乳动物与非哺乳动物内处于不同发育阶段的红细胞分别具有各自的免疫功能,并且通过多种机制来执行免疫调控功能。随着对红细胞免疫功能研究的不断进展,哺乳动物CD71⁺有核红细胞已被证实在多种生理与病理模型中发挥着免疫调控功能,在机体正常发育过程以及疾病的发生发展中起到了重要的作用。使用单细胞转录组测序技术可以研究红细胞群体内的异质性,具有免疫特性的免疫红细胞亚群展现出广泛的临床应用价值。