低糖低氧对神经干细胞增殖和代谢的影响

目的:本研究旨在探讨低糖低氧对大鼠神经干细胞增殖和代谢的影响。方法:实验采用不同葡萄糖浓度的培养基以及不同的氧浓度进行处理:高糖(4.5g/L)、低糖(1.4g/L);常氧(20%O2)、低氧(3%O2);神经干细胞(NSCs)来自孕13.5d的大鼠中脑,在不同糖浓度下培养至第三代进行低氧处理,分为低糖常氧(L+N)、低糖低氧(L+H)、高糖常氧(H+N)、高糖低氧(H+H)组。神经干细胞在上述四种条件下分别培养1、3、5d后,利用CCK-8检测神经干细胞的增殖情况;生化分析仪测定细胞培养上清液中葡萄糖、乳酸、丙酮酸浓度;RT-PCR方法检测葡萄糖转运蛋白4(GluT4)、葡萄糖激酶(GK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)的表达变化。结果:在低糖低氧条件下培养3d时NSCs的数量增加最为明显;低糖低氧条件下,葡萄糖浓度降低最为显著;而丙酮酸浓度在低糖处理组均高于高糖处理组;同样地,在低糖低氧处理组培养上清中乳酸含量增加的幅度最大;此外,在低糖或低氧时Glut4和PK的表达也明显高于对照组。结论:低氧能促进NSCs的增殖,而以低氧和低糖共同作用时更为明显;在低氧低糖条件下,神经干细胞的代谢发生变化,葡萄糖的利用明显增加,主要通过糖酵解途径代谢产能。     

甜瓜果实糖含量相关性状QTL分析

以高糖栽培亲本自交系‘0246’为母本,低糖野生亲本自交系‘Y101’为父本,通过杂交得到了含135个单株的甜瓜远缘F2群体,分别测定甜瓜果实果糖、葡萄糖和蔗糖含量,将三者之和作为总糖含量,进行遗传连锁图谱构建及QTL分析。结果表明:(1)构建的甜瓜果实遗传图谱包含14个连锁群,覆盖基因组长度726.30cM,标记间平均距离为12.74cM。(2)检测到与总糖含量和果糖含量相关的QTL位点各1个,分别命名为Ts3.1和Fru4.1,贡献率分别为14.89%和13.02%,分布于第3、4连锁群,LOD值分别为3.60和3.10。2个QTL位点均为正向加性遗传,分别对增加总糖和果糖含量表现为增效累加效应。研究结果为开展甜瓜糖含量相关基因精细定位和克隆研究奠定了基础。     

木犀草素对高糖诱导的心肌微血管内皮细胞损伤的影响及机制

目的:探讨木犀草素对高糖诱导的心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)损伤的影响及其可能调控机制。方法:消化法分离大鼠CMECs,将原代CMECs随机分为4组:低糖组、低糖+木犀草素组、高糖组和高糖+木犀草素组。低糖+木犀草素组和高糖+木犀草素组分别加入30μmmol/L的木犀草素孵育24 h,低糖组和高糖组分别加入同等体积的DMSO孵育24 h。CCK-8实验检测CMECs增殖;Tunel法检测CMECs凋亡;Transwell检测CMECs的迁移能力;Western blot检测PKC-βⅡ的表达。结果:与低糖组和低糖+木犀草素组相比,高糖组CMECs增殖能力显著降低(0.341±0.018,P0.05),CMECs凋亡显著增加(P0.05),CMECs迁移能力显著降低(116±12.2,P0.05),PKC-βⅡ的表达显著增加(P0.05);与高糖组相比,高糖+木犀草素组CMECs增殖能力显著增加(0.550±0.023,P0.05),CMECs凋亡显著减少(P0.05),CMECs迁移能力显著增加(169±7.3,P0.05),PKC-βⅡ的表达显著降低(P0.05)。结论:木犀草素可能通过抑制PKC-βⅡ激活减少高糖诱导的心肌微血管内皮细胞损伤。     

罗汉果皂甙类成分代谢转化规律分析

目的:分析组织培养苗罗汉果皂甙类成分在果实成熟过程中的代谢转化规律,为罗汉果甜甙代谢关键酶的研究提供基础.方法:采用微波炉水煮法提取不同生长期罗汉果总甙,高相液相色谱(HPLC)分析各生长期罗汉果二糖甙(甙Ⅱ)、三糖甙(甙Ⅲ)和五糖甙(甙Ⅴ)的含量.结果:果龄10d的罗汉果中,能检测到甙Ⅱ(3 666.4/μg/100mg)及甙m(48.4ttg/100mg),甙Ⅴ检测不到;果龄50d时,能检测到甙Ⅴ(95.1μg/100mg)和高含量的甙Ⅲ(1213.8μg/100mg);随着果龄增长和果实逐渐成熟,低糖苦甙Ⅱ、甙Ⅲ含量逐渐减少,高糖甜甙Ⅴ含量逐渐升高.果龄70d时,苦甙Ⅱ、甙Ⅲ基本检测不到,而甜甙Ⅴ(1331.4μg/100mg)含量达到高水平.结论:罗汉果高糖甜甙可能是从低糖苦甙代谢转化而来.     

高糖高胰岛素促进小鼠胰腺星状细胞活化和半乳凝素-3表达

该研究观察了高糖高胰岛素对小鼠胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)活化、增殖、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成和半乳凝素-3(galectin-3,Gal-3)表达的影响。分离PSCs并培养至3~5代后进行实验。PSCs干预分为低糖对照组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、高胰岛素组(5 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L胰岛素)、高糖高胰岛素组(25 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L胰岛素)。细胞免疫荧光检测胰岛素受体(insulin receptor,IR)和胰岛素样生长因子-1型受体(insulin like growth factor-1 receptor,IGF-1R)在PSCs的表达;MTT法检测PSCs增殖;RT-PCR和Western blot测定平α-滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原(type I collagen,Col I)、纤连蛋白(fi bronectin,Fn)和Gal-3的m RNA和蛋白质水平。结果发现,PSCs细胞表达IR和IGF-1R;与低糖对照组相比,高糖组、高胰岛素组、高糖高胰岛素组均诱导PSCs活化、增殖并促进Col I、Fn生成和Gal-3表达,其中以高糖高胰岛素组最为显著。以上结果说明,2型糖尿病高糖、高胰岛素微环境可能促进PSCs活化、增殖、ECM生成和Gal-3表达,在一定程度上可导致胰腺纤维化。     

3,5-二硝基水杨酸法测定植物总糖含量的探讨

本文以淀粉和棉花为材料用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定了水解产物葡萄糖含量的变化。结果表明随着稀硫酸浓度增加和水解时间延长,淀粉水解得到的总糖含量逐渐增多,但是棉花水解得到的总糖含量很少且变化不明显。说明用DNS法测定植物总糖包含有淀粉大量水解产生的葡糖糖,而纤维素水解产生的葡萄糖很少。用碘液检测淀粉水解液为淡黄色时,测定的总糖含量较准确。     

基于微孔板比色法的总糖含量测定方法的建立及应用

采用单因素试验和响应面优化法研究了微孔板法高通量检测总糖含量的方法,并进行了方法学考察,研究了不同离子、氨基酸和蛋白质等对该方法测定的影响。并以微生物多糖、枸杞多糖、可溶性淀粉和多种单糖为试受对象,与传统在比色管中的硫酸蒽酮比色法和苯酚硫酸比色法测定结果进行了比较。结果表明,反应体系总体积为230μL,其中150μL浓硫酸,30μL 5%苯酚水溶液,在85℃水浴20 min,在此条件下,在490 nm处的光吸收值与葡萄糖浓度呈线性相关,拟合线性回归方程相关系数R2为0.994 1,线性范围为10~100 nmol/well。该方法相对标准偏差为0.4%,加标回收率在102.7%~104.10%之间。精密度试验、稳定性试验和干扰性试验进一步说明此方法简便快捷、准确可靠、干扰性小,能应用于总糖含量的高效测定。     

新疆紫草毛状根总糖及多糖含量分析

采用超声提取法,对新疆紫草固体培养毛状根、液体培养毛状根以及2～3年野生根中的总糖和多糖进行了提取测定.结果表明:毛状根中水溶性总糖含量为25.573%,是野生根总糖含量的3.4倍;固体培养的毛状根多糖含量最高,达4.289%,是液体培养毛状根的3.37倍,是野生根的4倍.稳定性试验和重复性试验表明,该研究结果可靠性强,重复性好且稳定.研究发现,新疆紫草毛状根中水溶性总糖和多糖的含量高于野生根.     

蒽酮法测定爬山虎果中糖类的含量

用蒽酮法测定爬山虎熟果中糖类的含量,波长620nm,检测线性范围0．01—0．5mg/ml,相关系数为0．9993,RSD＝5．64％回收率为98．56％。此方法操作简便准确、显色灵敏、重现性好、不受还原性物质的干扰。能测定总糖,还能测定可溶性糖,因此适合野生植物中糖类含量测定。     

营养型复制酒中还原糖对总酯测定的影响

分别运用气相色谱法和电位滴定法对营养型复制酒总酯含量进行测定,结果表明：气相色谱测试复制酒配制前后酒样中总酯含量保持不变;电位滴定法测定的营养酒总酯含量受复制添加的还原糖影响,测试的酒样总酯含量“增加“,且增加量与复制酒中还原糖浓度呈线性关系。当复制酒中还原糖浓度提高1.0g/L,则测定的总酯含量“增加“0.72g/L。用电位滴法测定的结果减去相应还原糖对应的“总酯“增加值,即为复制酒中的总酯含量。     

电导检测低压离子色谱法分析甘氨酸

采用低压离子色谱电导检测氨基酸分析方法,对甘氨酸含量进行了测定,实验结果表明采用该方法测定甘氨酸,标准偏差为4.72%(测定次数n=7),回收率分别为94.75%和97.30%,,表明用该方法分析样品中的甘氨酸含量准确度高,精密度好。     

低糖山楂果脯加工工艺研究

研究了低糖山楂果脯的加工技术,并对影响低糖山楂果脯饱满度、糖含量等品质因子的关键参数进行了研究。低糖山楂果脯的最佳工艺为：降水分活度柠檬酸∶氯化钠∶丙三醇比例为0.3∶2.0∶1.0、羧甲基纤维素钠和琼脂浓度均为0.5%、糖液浓度和淀粉糖浆均为50%、渗糖5min、浸糖5h、裹包浸泡2~3min（1.0%的羧甲基纤维素钠和1.0%的琼脂的裹包液中加入防腐剂0.01%苯甲酸钠和0.02%的山梨酸钾保鲜效果最佳,微生物污染最小）、65℃烘烤5h,所得产品颜色鲜红,口感酸甜适口,鲜山楂风味浓。     

我国市场常见饮料中糖含量现况调查

目的：了解我国市场上饮料中糖含量的分布状况,为修订食品安全国家标准GB 28050《预包装食品营养标签通则》提供科学依据。方法：在全国各地大中型超市进行采样或拍照,收集饮料标签信息并录入Excel表格,去除重复样本并进行分类,对各类饮料的糖含量进行统计,计算无糖、低糖、高糖饮料所占比例及其糖含量标示率。结果：共纳入903个样本,糖含量标示率为18.7%,其中碳酸饮料的糖含量标示率达到60%。饮料中糖含量范围为0～18.7g/100mL,中位数为8.7g/100mL,其中碳酸饮料和果蔬汁及其饮料糖含量水平为10.6g/100mL、植物蛋白饮料为3.7g/100mL。饮料中无糖饮料占3.2%、低糖饮料占15.6%、高糖饮料占21.3%,糖含量标示率分别为46.2%、14.1%和14.6%,其中果蔬汁及其饮料、含乳饮料和碳水饮料中高糖饮料所占比例分别为31.6%、29.4和24.7%。结论：目前我国饮料中糖含量较高,需对经饮料中摄入的糖进行控制,建议在标准修订时增加对饮料中糖含量标示的强制要求,并考虑进行“高糖”的警示标示。     

高浓度葡萄糖对小鼠囊胚Caspase-8表达的影响

目的:探讨高浓度葡萄糖对小鼠囊胚Caspase-8表达的影响.方法:通过促超排卵,获取妊娠3.5d小鼠囊胚,随机分成三组,即对照组(空白)、低糖组(葡萄糖浓度为7.5mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度为28.0mmol/L),分别培养在含0、7.5mmol/L和28.0mmol/L葡萄糖的M199培养基中,培养24h后,然后再吸出囊胚.每组随机吸取30个囊胚用免疫组织化学S-P法.检测不同浓度葡萄糖对小鼠囊胚Caspase-8表达状况,利用HPIAS-1000图像分析系统测定Caspase-8在以上三组中表达的平均光密度和平均阳性面积率.结果:Caspase-8表达结果:空白组中囊胚细胞胞浆中可见少量浅棕黄色颗粒,Caspase-8表达呈弱阳性.低糖组中囊胚细胞胞浆未见着色,Caspase-8表达呈阴性.高糖组囊胚细胞胞浆中可见较多的棕黄色颗粒,Caspase-8表达呈强阳性.空白组与低糖组囊胚Caspase-8表达的阳性面积率及平均光密度无显著性差异(P>0.05),高糖组与空白组和低糖组相比均存在显著性差异(P<0.01).结论:高浓度葡萄糖可诱导Caspase-8的过度表达,导致囊胚细胞数目过度减少,从而影响囊胚的正常发育和着床.     

白芍多糖分离纯化及性质分析

采用热水浸提.乙醇沉淀法中药白芍(Paeonia Albiflora Pall)水提取液中分离纯化得到一种多糖蛋白复合物,命名为PAⅡ(Paeonia Albiflora Pall PolysaccharideⅡ,PAⅡ).电泳、FPLC和HPLC检测其纯度;红外光谱和气相色谱法对其结构和组成进行初步分析.结果表明PAⅡ为均一多糖组分,是以D-葡萄吡喃糖为主的多糖-蛋白复合物,总糖含量为85.0%,蛋白含量为13.2%;该糖为吡喃型结构,糖肽键为非O-型;单糖组分为葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、木糖,摩尔比为153:2.6:1.25:1:1,平均分子量为5.25×104.     

菊苣中菊粉提取工艺条件的研究

新鲜菊苣干制后干菊苣粉中总糖的含量可达73.6%,采用干菊苣粉用循环方式进行水抽提菊粉,在料液比为1:15,温度为80℃,浸提时间为2 h时提取率达98%,浸提液总糖含量达48.1 g/L;干菊苣粉和菊粉提取液中总糖的测定采用酸解法时,采用0.2 mol/L HCl水解40 min时,可提高测定结果准确度。     

平衡型氨基酸透析液对维持性血液透析患者血浆游离氨基酸含量的影响

目的:研究一种平衡型氨基酸透析液,探讨其对维持性血透患者血游离氨基酸含量的影响。方法:实验采用自身对照设计,应用蛋白水解法测定、分析应用氨基酸透析液血透前后患者血浆氨基酸含量,并同时测定应用碳酸盐透析液患者及健康人血浆游离氨基酸作为比较。结果:经碳酸盐透析后,患者血浆大多数游离氨基酸和总氨基酸含量显著降低。给予平衡氨基酸透析液能不同程度改善患者血浆游离氨基酸的含量。结论:平衡型氨基酸透析液能减少血中部分氨基酸的丢失。     

葡萄糖浓度波动对原代培养的大鼠血管细胞和肾细胞的影响

探讨葡萄糖浓度波动对体外培养的原代大鼠血管细胞和肾细胞的影响。取SD大鼠的主动脉和肾脏进行血管细胞和肾细胞的体外原代培养,每种细胞均分为6组:正常对照组、持续高糖组、持续低糖组、波动组I、波动组II、波动组III。实验24h后,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的泄漏率,细胞液中的β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活力,细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果表明葡萄糖浓度波动各组均能对大鼠血管细胞和肾细胞造成损伤,使细胞外液LDH、NAG的泄漏量明显增加,细胞内GSH、SOD活力明显减少,与持续高糖组和持续低糖组比较差异显著(P<0.001)。且葡萄糖浓度波动对肾细胞的损伤比血管细胞更为明显。说明葡萄糖浓度波动能够导致大鼠血管细胞和肾细胞的损伤,并且其损伤远远大于持续高糖或持续低糖的单独作用效果,损伤的结果与低糖作用细胞的时间呈正相关,在相同的损伤条件下肾细胞比血管细胞对葡萄糖浓度波动更为敏感,损伤更为严重。     

高CO_2浓度对两种色型豌豆蚜体内营养物质含量及消化酶活性的影响

【目的】明确红、绿两种色型豌豆蚜Acyrthosiphon pisum(Harris)对大气CO_2浓度升高响应的生理机制。【方法】通过CO_2人工气候箱,设置中等浓度(550±27μL/L)和高浓度(750±37μL/L)CO_2浓度,并以当前浓度(375±18μL/L)为对照。在设置以上CO_2浓度的人工气候箱种植蚕豆苗并接入6 h以内的豌豆蚜初产若蚜,记录各虫态的蜕皮和存活情况直至羽化。测定连续3代饲养在蚕豆上的红、绿两种色型豌豆蚜体内营养物质含量和消化酶活力,同时测定蚕豆叶片组织营养物质含量。【结果】大气CO_2浓度升高可显著增加蚕豆叶片内可溶性蛋白、可溶性糖、游离氨基酸和淀粉含量。中等CO_2浓度(550±27μL/L)条件下,F0代两种色型豌豆蚜体内营养物质含量较对照均无显著变化,F_2代蛋白质、总氨基酸、可溶性糖和糖原含量较对照均显著增加,总脂肪和游离脂肪酸含量较对照显著降低,且F_2代绿色型豌豆蚜体内可溶性糖含量显著高于红色型的。高CO_2浓度(750±37μL/L)条件下,3世代两种色型豌豆蚜体内蛋白质、总氨基酸、可溶性糖和糖原含量均显著高于对照,总脂肪和游离脂肪酸含量显著低于对照。其中,F1和F_2代绿色型豌豆蚜体内蛋白质、总氨基酸、可溶性糖和糖原含量显著高于红色型的。CO_2浓度(550±27和750±37μL/L)升高条件下,F0代两种色型豌豆蚜体内消化酶活力较对照无显著变化,F_2代胃蛋白酶和胰蛋白酶活力较对照显著降低,脂肪酶和淀粉酶活力显著升高,3世代两色型间消化酶活力均无显著差异。【结论】高CO_2浓度下,蚕豆叶片组织营养物质含量发生改变从而引起以之为食的豌豆蚜体内营养物质含量与消化酶活力的变化,且绿色型豌豆蚜体内蛋白质、总氨基酸、可溶性糖和糖原含量的变化大于红色型豌豆蚜的,这对未来大气CO_2浓度升高的环境下豆科植物主要害虫豌豆蚜的防治具有参考价值。     

LncRNA H2k2促进高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的研究

该研究主要探讨lncRNA H2k2对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的影响,采用qRTPCR检测lncH2k2在正常及糖尿病肾病小鼠肾脏组织中的表达,以及高低糖培养的系膜细胞中的表达;FISH与qRT-PCR检测lncH2k2的亚细胞定位;qRT-PCR检测lncH2k2过表达质粒及siRNA的转染效率;EdU检测转染lncH2k2过表达质粒或siRNA后系膜细胞增殖的变化。结果表明,lncH2k2在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及高糖培养的系膜细胞中的表达升高,且lncH2k2主要分布于系膜细胞的细胞质中。在低糖培养的系膜细胞中转染lncH2k2过表达质粒后,与低糖培养的系膜细胞相比,过表达lncH2k2的低糖培养的系膜细胞增殖能力显著提高,并且将qRT-PCR检测筛选出的一条lncH2k2 siRNA转染到高糖培养的系膜细胞内,与高糖培养的系膜细胞相比,敲低lncH2k2后系膜细胞增殖能力显著降低。研究结果揭示,lncRNA H2k2在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及系膜细胞中表达显著,lncRNA H2k2促进了系膜细胞增殖,这些结果表明,lncRNA H2k2可能参与了糖尿病肾病的发生发展。