一种简易RNA甲醛—琼脂糖凝胶变性电泳

构建ｃＤＮＡ文库 ,进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析以及ＲＴ ＰＣＲ等分子生物学研究 ,都需要纯度高、完整性好的ＲＮＡ。鉴定ＲＮＡ的完整性通常需要进行甲醛 琼脂糖凝胶电泳。然而 ,传统的甲醛 琼脂糖凝胶电泳操作步骤繁杂[1 ] ,本文提出一种改进的甲醛 琼脂糖凝胶电泳 ,不仅简化了操作 ,而且效果很好。我们以向日葵总ＲＮＡ和ｍＲＮＡ甲醛 琼脂糖凝胶电泳为例 ,对这一方法进行介绍。1　材料与方法1.1　总ＲＮＡ的提取及ｍＲＮＡ的分离取向日葵花蕾 1ｇ ,按照改进的异硫氰酸胍法提取向日葵总ＲＮＡ[2 ] 。利用磁珠法分离ｍＲＮＡ[3] 。…     

常春藤代谢气体甲醛中间产物及甲醛胁迫下叶片相关生理特性变化分析

很多研究发现常春藤(H.helix)能吸收甲醛(HCHO),对常春藤气体HCHO吸收能力分析表明常春藤能有效清除空气中污染的气体甲醛.13CNMR分析发现用高浓度气体H13CHO处理常春藤,在叶片中出现的主要代谢中间产物为13CH3OH、[[5-13C]Met、U-13C]Gluc、[U-13C]Fruc、[3-13C]Ser、[2-13C]Gly、[5-13C]Arg、[3-13C]Ala、[4-13C]malate、[3-13C]malate及少量的[2-13C]Ser和H13COOH.此外,在气体H13CHO处理短时间的叶片抽提物中有游离H13CHO和甲醛加合物H13CHO-Gln,证实H13CHO确实被吸收到叶片细胞中,随着处理时间的增加这两个峰消失,说明通过自身的代谢作用H13CHO被有效清除.在气体甲醛胁迫下,常春藤叶片丙二醛、过氧化氢和羰基化蛋白质的含量升高,说明甲醛胁迫在常春藤叶片里诱发了氧化损伤,从而使叶片气孔传导率下降,甲醛吸收速率和效率减小.     

表面活性剂对球孢白僵菌生物合成D-HPPA的影响

[目的]提高目的产物R-(+)-2-(4-羟基苯氧基)丙酸(D-HPPA)的产量，研究不同表面活性剂对球孢白僵菌生物合成D-HPPA的影响。[方法]在固态发酵、液态发酵和全细胞催化三种生物合成方式中，分别考察表面活性剂的种类、浓度以及添加时间对D-PPA转化率的影响。[结果]固态发酵中添加0.5%的斯盘-80,液态发酵及全细胞催化中添加2.5%的斯盘-80均取得较高的D-PPA转化率，分别为99.64%±0.47%、60.60%±0.85%和54.50%±0.69%。在固态发酵和液态发酵方式中，发酵48 h时添加表面活性剂结果均为最佳，且表面活性剂添加时机与D-PPA一致。[结论]在三种生物合成方式中添加斯盘-80均能提高D-PPA的转化率。     

饲料精氨酸水平对斜带石斑鱼幼鱼生长和肠道形态的影响

正精氨酸作为一种鱼类生长发育所必需的碱性氨基酸,是机体合成蛋白质的重要成分[1],对肠细胞的增殖分化和维持细胞形态结构具有重要的保护作用[2]。对陆生动物如羊[2]、仔猪[3,4]和鼠[5]等的研究表明,日粮中添加精氨酸能显著提高肠道绒毛高度和隐窝深度,从而提高肠道消化吸收能力。目前,在鱼类的相关研究中,Cheng等[6]报道在饲料中添加精氨酸或谷氨酰胺能显著提高杂交条纹鲈(Motone chrysopsxMorone,saxatilis)和美国红鱼(Sciaenops ocellatus)[7]前肠和中肠的皱襞和微绒毛高度,增大肠道吸收面积。肠道是动物吸收利用精氨酸的     

除草剂（草丁膦）抗性基因的遗传与利用

草丁膦 (商品名有Ｌｉｂｅｒｔｙ、Ｂａｓｔａ等 )是一种高效低毒的广谱除草剂。它的有效成分为膦丝菌素(ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎ ,ＰＰＴ) ,是谷氨酰氨合成酶的一种强力抑制剂[1] ,谷氨酰氨合成酶是唯一能降解氨毒的酶 ,它能除去硝酸盐还原、氨基酸降解和光呼吸释放的氨。抑制谷氨酰氨合成酶活动会导致氨积累 ,引起植物中毒死亡[2 ] ,所以ＰＰＴ是一种植物生长强效抑制剂。已从土壤吸水链霉菌 (Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ)分离出ｂａｒ基因 ,它具ＰＰＴ乙酰转移酶编码[3] ,使ＰＰＴ的自由氨基 (ＮＨ2 )…     

烟曲霉相关基因、转录因子在其细胞壁重塑、稳态和生长定位中的作用

<正>烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是一种腐生的丝状真菌,其营养菌丝存在于土壤、空气和有机物质中,是免疫功能严重受损患者最常见的感染性死亡原因之一。烟曲霉细胞壁是一个动态的结构,这种动态结构成为其对抗环境的主要防线[1]。由于支持烟曲霉生长和繁殖的自然过程的变化或者所处环境应激反应,其细胞壁会经历持续的生物合成和重塑[2]。研究发现,许多基因可通过改变细胞壁成分含量而使细胞壁结构重塑。烟曲霉分生孢子的形成也会伴随着孢子细胞壁的重塑[3-4]。另外,相关基因、转录因子会控制细胞壁的生物合成,调节烟曲霉细胞壁的稳态[5-6]。分生孢子发展形成菌丝的过程、基因的正确定位对烟曲霉的致病相当关键[7]。抵抗宿主环境压力的机械强度主要由其细胞壁提供,所以细胞壁的破坏对菌丝形态有深远的影响。鉴于烟曲霉细胞壁在真菌生理学中的重要作用,它被认为是抗真菌药物的一个极好的靶点。     

中药提取液对灵芝深层发酵的影响

我国中医药历史悠久 ,中药资源丰富 ,为保证广大人们的身体健康起到巨大作用。但近几十年来 ,我国在中药现代化方面进展缓慢 ,其中原因之一就是中药加工技术陈旧[1] ,近来有学者提出了中药发酵制药技术[1,2 ] 。药用真菌是中药的组成部分 ,它们中的许多种类都能以液体发酵进行生产[3] ,以适当的中药为培养基或在培养基中添加适量的中药 ,利用它们强大的分解转化能力 ,不仅可对中药中的纤维、糖类和蛋白等物质加以利用 ,而且在代谢过程中可能对中药中的一些成分进行转化 ,从而提高中药活性成分在复合制剂中的比例及效价 ;另外中药中的某些成…     

单细胞因子支持人胚胎干细胞生长的培养体系

[目的]为2株中国人胚胎干细胞系建立培养液中仅添加1种细胞因子的培养体系。[方法]两株人胚胎干细胞h ES-846XX和h ES-18 46XY分别使用含有成纤维细胞生长因子(b FGF)160ng/ml、转化生长因子(TGFβ1)20ng/ml和noggin 200ng/ml的培养液进行无饲养层培养,观察细胞的生长情况并对所得细胞进行鉴定。[结果]培养液中添加b FGF 160ng/ml可以有效地支持人胚胎干细胞的长期增殖,传代8次的细胞仍然保持胚胎干细胞的特性。添加TGFβ1或noggin的培养基无法维持人胚胎干细胞的长期增殖,3代以后细胞完全分化。[结论]证明培养液单独添加高浓度b FGF 160ng/ml支持2株中国人胚胎干细胞长期保持未分化状态增殖,实际未分化率为68.2±1.08%。     

抗原修复技术在免疫组织化学中的作用

免疫组织化学是一门免疫学与病理形态学相结合的新兴学科 ,是现代生物医学的一项重要方法学 ,具有操作简单、敏感性高、特异性强等特点 ,已经广泛应用于临床病理及其相关学科的研究之中 [1,2 ] 。目前采用甲醛为常规标本固定剂 ,醛基与组织蛋白质中的氨基形成交联使抗原决定簇被遮蔽 ,从而影响免疫组织化学结果 ,而且这种作用随着固定时间增长而加重 [3 ]。抗原修复技术的出现 ,使得原来许多只能在冰冻切片作免疫组织化学得以在石蜡切片上实现 ,抗原修复技术在免疫组织化学中的作用愈加明显 ,并且对免疫组织化学方法的敏感性起着决定性作用[…     

常用消毒剂对布鲁氏菌疫苗株的灭菌效果评估

[背景]布鲁氏菌是一种重要的人畜共患胞内寄生菌,是引起动物和人发生布鲁氏菌病(布病)的病原体.高效消毒剂杀灭环境中的布鲁氏菌是防控布病的关键措施.[目的]评价市面上常用消毒剂对布鲁氏菌的灭菌效果及差异.[方法]选用市面上9种不同类型的常用消毒剂,以高、中、低3种不同使用浓度分别研究其对牛种、羊种和猪种布鲁氏菌的杀灭效果...     

人尿中一种抗菌物质三甲氧苄二氨基嘧啶的分离、纯化和鉴定

三甲氧苄二氨基嘧啶 (trimethoprim)作为一种二氢叶酸还原酶的抑制剂[1,2 ] ,它对E .coli二氢叶酸还原酶的抑制率是对人的 10 0 0 0倍[3 ,4] ,是一种常见的用于治疗细菌感染的化学药物 .它抑制细菌的主要机理是通过阻止四氢叶酸的合成从而达到抑菌作用 ,如果与磺胺类药物 (sulf     

甲基营养微生物的甲醛代谢途径及其在环境生物技术中的应用

甲醛是一种毒性很高的一碳化合物,甲基营养菌是一类能在有高浓度甲醛的环境中生存的微生物,它们体内有多种降解甲醛的氧化途径和将甲醛转化为细胞组分的同化途径。丝氨酸途径和酮糖单磷酸途径是同时存在于甲基营养型细菌中的两种甲醛同化途径,木酮糖单磷酸途径是甲基营养型酵母菌中独有的甲醛同化途径。为了充分挖掘甲基营养型微生物在环境生物技术中的潜在应用价值,最近有很多研究尝试利用甲基营养微生物的细胞及其甲醛代谢途径关键酶开发甲醛污染检测方法和生物治理技术,对这方面的研究进展进行综述。     

一种富集高温栅藻Desmodesmus sp. F51的新型生物絮凝剂

[背景]海科贝特氏菌(Cobetia marina)可产生大量具有絮凝活性的胞外产物,可视为一种新型的生物絮凝剂。高温栅藻(Desmodesmus sp.F51)是一种具有较高叶黄素含量的微藻,被认为是一种新兴的叶黄素来源,但利用该生物絮凝剂高效富集高温栅藻的相关研究迄今尚未见报道。[目的]以高温栅藻为对象,研究该新型生物絮凝剂的絮凝效率,并对絮凝机理进行初步探讨。[方法]探索在不同生长阶段微藻培养液添加生物絮凝剂、添加量、絮凝时间、pH对絮凝效率的影响,分析生物絮凝剂的功能基团,并测定在不同pH条件下添加生物絮凝剂前后高温栅藻的Zeta电位变化,以及在显微镜下分析藻细胞在添加生物絮凝剂前后的形态。[结果]在高温栅藻生长至稳定期(pH 8.0)添加2 mL生物絮凝剂,絮凝15 min絮凝效果最佳,达82.1%。傅里叶红外光谱(fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)显示了多糖及酰胺结构的特征吸收峰,由此推测生物絮凝剂主要是多糖的混合物,含有少量蛋白质。根据Bradford法测定絮凝剂中蛋白含量约为0.4%(质量比),通过苯酚-硫酸法测定总糖质量分数约为34.5%(质量比),与FTIR分析结果基本相符。生物絮凝剂在pH 4.0-11.0保持60%以上的絮凝效率,说明无论是酸性或是碱性条件下絮凝效率都较高,结合Zeta电位的分析表明,推测生物絮凝剂对高温栅藻的絮凝机理中占主导地位的可能是吸附架桥作用。[结论]该研究对微藻生物絮凝具有重要的理论和实践意义。     

基于高通量测序的福建北部马铃薯晚疫病株根际土壤细菌群落分析

[背景]马铃薯晚疫病是一种由致病疫霉[Phytophthora infestans(Mont.)de Bary]引起的毁灭性病害,当环境条件适宜时,残留在土壤中的病原菌会侵染马铃薯植株导致病害的发生.[目的]明确健康马铃薯植株与发病植株的根际土壤细菌结构与多样性.[方法]采集马铃薯晚疫病发病地的健康植株根际土壤(M2J...     

亚嗜盐链霉菌新种的鉴定

在分离极端嗜盐细菌的过程中,在含25％NaGI的Gibbons[1]培养基上发现一个放线菌菌落A75,经两代转种之后便不再生长。此菌仅能在含5—8％NaCI的Gibbons培养基上较好地生长,当NaGl浓度高于18％时则完全不生长。经鉴定,此菌株属于链霉菌属中的白孢(Albosporus)类群[2],但它与本类群中的已知种差异明显。在不另外添加NaCl的其它供试培养基上,一般不产生气生菌丝体,对供试碳源均不利用。在5—8％NaGl的Gibbons培养基上孢子丝呈白色,常成圈,幼龄菌落形成同心圆,液体培养菌体呈团状。在普戈二氏基础培养基[3]中添加8％ NaCl,除D-木糖和L-阿拉伯糖外,对多种碳源均可利用,但生长弱。经鉴定认为A75菌株是链霉菌属中的一个新种,命名为亚嗜盐链霉菌(Streptomyces subhalophilus n.sp．)。     

禽呼肠孤病毒分离株P10、P17、δ3蛋白基因的表达及抗血清的制备

禽呼肠孤病毒的感染在我国鸡群中非常普遍,它除了可引起鸡传染性关节炎外,还可能引起矮小综合症和免疫抑制等。从鸡群中分离到的不同毒株ARV的毒力差别较大,抗原性也不尽相同[1]。ARV是一种双股RNA病毒,病毒颗粒中的基因组有10个不同的独立节段组成[2]。其中对S1节段研究的比较     

钝顶螺旋藻富硒培养条件的优化

硒是人和动物必需的微量元素 ,补硒可以防治多种疾病。有机硒具有低毒、高生物利用度的优点 ,目前主要寄希望于生物转化的途径来获得有机硒[1 ] 。植物对硒的生物有机化作用已有综述[2 ] ,并开发有富硒酵母[3 ] 、富硒菇类[4] 、富硒大蒜、富硒黄芪、富硒西洋参、富硒麦芽、富硒茶以及富硒鸡蛋、富硒牛奶等[5] 。螺旋藻是一种很有开发利用前景的藻类 ,但其含硒量极微 ,实验报道富硒螺旋藻对60 Ｃｏ γ射线胸部照射大鼠诱发肺炎和早期肺、肝纤维增生有防治作用[6] 。在培养液中添加亚硒酸钠可以实现藻类对硒的富集和转化 ,而且螺旋藻对无机硒…     

甲醛对果蝇发育和繁殖的影响

甲醛已被广泛用于人们的日常生活中,成为室内环境的主要污染源.为探讨甲醛对动物不同发育阶段的毒性,本文以模式生物果蝇Drosophila melanogaster为对象,研究了饲料中添加不同浓度甲醛对果蝇生长发育的影响.结果显示,当对照组发育至3龄幼虫（孵化后3d）时,与未添加甲醛的对照组相比,饲料中添加0.25％或0....     

江豚染色体的初步研究

江豚是一种广泛分布于浅海和河湾的无背鳍豚。其分类学研究[b]、说明该属中有多个种。分布在我国沿海和长江中的江豚,过去曾被认为与日本的江豚同属一种,命名为Neophocaena asiaeorientalis。有关它的染色体组型     

优化的复合自动诱导培养基（CAI-4）对外源蛋白在大肠杆菌中 表达的影响

[目的]原核表达系统是目前最为广泛使用的一种外源蛋白表达系统。在利用原核表达系统表达目的蛋白的过程中,可溶性外源蛋白的产量是决定成本和效率的决定性因素。[方法]本项研究中利用本实验室构建的7种不同的重组质粒(-1、p-2、p-3、p-4、p-5、p-6、p-7),检测其在复合自动诱导培养基中的表达情况,评价哪一种培养基更适合于外源蛋白的表达,提高目的蛋白的产量。[结果]结果显示,这7种重组蛋白在复合自动诱导培养基的表达量是普通LB培养基的4~8倍;并在此基础上,对复合培养基的成份进行进一步优化,形成了一种优化培养基(改良培养基-4),P-1、P-2、P-3这3种融合蛋白在这种改良培养基中的表达量比优化前提高了至少2倍。