制备用于结晶的蛋白质样品

制备高质量蛋白质晶体是通过X射线衍射解析蛋白质分子三维结构的关键环节,是结构生物学领域中的瓶颈问题之一。蛋白质的结晶受多因素控制,其中蛋白质样品自身的质量是影响蛋白质能否结晶及晶体质量好坏的关键因素。我们从蛋白质纯度、可溶性、均一性及表面修饰等方面介绍了如何获得适于结晶的蛋白质样品,以及如何借助相关仪器检测蛋白质样品的质量,预测蛋白质的可结晶性。     

溶菌酶晶体及其交联技术的研究进展

在结晶蛋白中,溶菌酶成为一种典范,是一种模型蛋白.在不同的环境中,通过调变各项反应条件,可以实现对不同晶系溶菌酶晶体形貌、结构的控制并进行最优化,然后对其进行交联,讨论其反应机理.所采用的方法还能扩展到其他类型蛋白质晶体中,为设计和制备具有优良应用性能的不同形貌的蛋白晶体及交联晶体材料奠定基础,必将大大促进蛋白晶体材料在我国生物材料应用方面的研究.     

一步酶法制备药物中间体7-氨基头孢烷酸的研究分析

医学临床实验证明,将头孢菌素类抗生素用在中度以及重度干扰症状的疾病上有着非常明显的疗效作用,对于提高患者的免疫力有着非常重要的意义,而7-氨基头孢烷酸则属于头孢类抗生素合成过程中不可或缺的重要中间体,常见的7-氨基头孢烷酸制备工艺有化学法以及生物酶法两种类型。本文将针对7-氨基头孢烷酸的生物酶法制备工艺中的一步酶法制备工艺进行具体的研究和分析。     

杂质对蛋白质晶体影响研究进展

综述了杂质对蛋白质晶体生长影响研究领域的进展情况. 对可能的杂质来源以及杂质对结晶过程的影响进行了介绍.重点介绍了和结晶蛋白质分子结构相似的杂质分子的影响, 包括晶体成核、生长形态、表面形貌、生长动力学、质量等,以及杂质在晶体中的重新分配.     

中等强度稳态磁场影响小分子结晶的初步探索

葡萄糖、钙和钠等生命所需基本物质在维持生物体生理机能,改变电势能和调控细胞和细胞器功能等多项生命活动中起着关键作用。细胞功能的实现很大程度上依赖于特定分子在一定浓度下的聚集和解聚,而越来越多的证据表明相分离过程可能参与其中。溶液结晶本身也是一种特殊的相分离,虽然磁场影响溶液结晶已有零星报道,但不同参数磁场对不同物质结晶的影响尚未有报道。本文使用2种不同强度的外加磁场（0.036 T、0.068 T）对葡萄糖、葡萄糖酸钙和氯化钠的结晶过程进行了初步探究。试验结果显示：虽然2种磁场对3种物质析出晶体的质量影响程度不同,但均有促进;从结晶数量上来讲,磁场对葡萄糖和葡萄糖酸钙也有促进,但对氯化钠无显著影响。虽然溶液蒸发量受不同强度磁场影响不同,但与溶液质量浓度成反比。根据结果可以推测,对于蒸发结晶过程来说,磁场可能通过对蒸发量和对带电粒子的影响共同调控结晶过程。本研究通过对磁场影响结晶过程的初步探究,不仅为进一步研究磁场生物学效应及机制提供了理论基础,也为工业生产中提高结晶效率提供了新的思路。     

猪呼吸道上皮细胞体外分化模型的建立及其应用研究

猪是许多呼吸道病毒感染的天然宿主,其与人类在肺生理学、呼吸道形态学和呼吸道细胞类型以及受体分布都有相似之处。为了解呼吸道病毒感染机制和筛选呼吸系统疾病药物,选择以猪肺组织为原料采用无血清气液界面培养法构建一种猪呼吸道上皮细胞(Porcine airway epithelial cell,PAEC)体外分化模型,然后通过扫描电子显微镜、电生理和免疫组织化学等方法鉴定该模型。采用三质粒共转染法构建重组腺相关病毒rAAV6-GFP(rAAV6-green fluorescent protein,rAAV6-GFP),通过顶端表面感染PAEC模型,探讨AAV6在PAEC模型中基因治疗领域的应用。结果显示分化成熟的PAEC模型为多层上皮结构,顶端表面含有纤毛细胞、黏液分泌细胞和基底细胞。rAAV6-GFP能通过顶端表面感染PAEC,有效地介导外源基因的长期表达。本文建立的猪呼吸道上皮细胞体外分化模型为呼吸道病原体感染和呼吸系统疾病药物筛选和基因疗法等研究奠定了良好的基础。     

电场中的蛋白质结晶

人们一直致力于寻求提高蛋白质晶体质量的方法,利用电场诱导蛋白质结晶即是诸多方法中的一种。已有文献报道显示,电场对蛋白质结晶的影响是积极的。我们从直流电场、交流电场、内置电场、外置电场对蛋白质结晶的影响及相关结晶设备,电场中生长的蛋白质晶体质量的评估,电场中蛋白质结晶的原理及影响因素等方面,对已报道的电场中的蛋白质结晶研究工作进行了总结。     

L-赖氨酸·L-谷氨酸盐制备工艺的研究

本文研究了L -赖氨酸·L -谷氨酸盐制备过程中脱盐、复合、结晶等工艺对产品的收率和质量的影响。研究了工艺过程的控制方法 ,为此产品的工业化生产提供了重要的参数     

黄花蒿青蒿酸制备及其生物稳定性研究

基于青蒿酸重要的药用和开发价值,采用溶剂法、吸附分离法从黄花蒿植物制备青蒿酸,采用光谱、质谱和熔点法表征青蒿酸晶体,采用HPLC法分析其生物稳定性。通过制备工艺获得纯度为96%的青蒿酸结晶,产率为61.7%。4℃、室温、60℃以及自然光照条件下保存30 d青蒿酸具有较好的生物稳定性;植物体内外青蒿酸均能稳定保存一年,含量基本不变。紫外光照条件下青蒿酸易光解,6 h后基本检测不出青蒿酸。通过制备工艺获得高纯度的青蒿酸结晶,青蒿酸对温度和自然光照较为稳定,在植物体内外均可保存一年。紫外光对青蒿酸具有较强的破坏作用。     

肾综合征出血热实验动物模型的研究和应用

建立肾综合征出血热(HFRS)疾病动物模型是进一步深入研究其发病机理、药物筛选、疫苗制备、临床治疗的迫切需要。最早用于肾综合征出血热病毒(HFRSV)分离和实验研究的动物是非疫区黑线姬鼠,以后相继发现实验饲养的一些动物对HFRSV亦很敏感。目前有二种动物模型:一种为感染动物模型,供分离和培养病毒及感染试验用;另一种为致病模型,主要用于发病机理,疫苗制备及实验治疗等方面的研究。细胞培养分离病毒成功之后,大大简化了病毒的培养和扩增,然而体外细胞感染不可能代替完整的动物机体对病毒感染的反应性。因此建立一个     

朝鲜蓟提取物颗粒剂的制备工艺研究

以单因素试验为基础，采用正交实验设计优化制备朝鲜蓟(Cynara scolymus)提取物颗粒剂的最佳工艺条件。以原料与辅料配比、原料药比例、乙醇浓度及干燥温度为考察因素，以颗粒合格率、溶化时间作为评价指标，采用L₉(3⁴)正交试验分别对颗粒合格率、溶化时间进行直观分析及方差分析。结果表明，最佳成型工艺为乳糖:糊精=3:1，乙醇浓度60%，原料药比例7.0%，干燥温度50 ℃。按此方案进行验证实验，颗粒性状良好，颗粒合格率为91.45%，含水量4.90%，减失重量不超过2.0%，溶解时间85.67 s，均符合2020年中国药典有关规定。通过正交试验优选的颗粒剂制备工艺稳定、简便易行，为朝鲜蓟提取物的剂型开发及工业化生产颗粒剂提供理论依据。     

最新专利文摘

CN101108975:耦合制备蓖麻油生物柴油的方法本发明公开了一种“浸出+反应”耦合法制备蓖麻油生物柴油的方法。以蓖麻籽为原料,在超声条件下或无物理场作用条件下,蓖麻油浸出与酯交换反应耦合制备生物柴油。浸出与酯交换反应一步完成,极大地简化工艺流程,节约生产成本;甲醇既为浸出溶剂又为酯交换剂,有利于循环和节约原料,也有利于后期物料的分离。解决了现有的生物柴油制备方法对油脂的质量要求较高,工艺路线较长,各种原料、试剂及设备消耗较大,试剂污染也比较严重,生产成本比较高的问题。CN101108976:一种生物柴油及其制备方法本发明涉及一种生物柴油及其制备方法。生物柴油在制备过程中,将原料油和预处理剂按一定比例在预处理装置中,加热搅拌反应后,过滤,进入预脂化装置中再添加酸性催化剂和粗甘油,加热、搅拌,循环后进入脂化装置中,加甲醇和碱性催化剂或酸性催化剂,加热,加速循环反应后,回收甲醇,放出甘油和分离出皂化物,得到的生物柴油水洗后蒸馏即可完成。所得的生物柴油产品满足现行德国、美国和我国新实行的《GB/T20802~2007》标准。不仅节约了能源,且甲醇、催化剂等消耗量少,能耗低,适用于各种原料油,经济性价比高,工艺简单...     

脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的标准化研究

目的用干粉原料完全替代以消化液为主要原料的培养基配方,实现脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的标准化生产。方法用筛选改良的酪蛋白酸水解物干粉替代50%盐酸酪蛋白水解液,以改良酵母浸出粉替代酵母透析液和酵母浸出粉,适当调整培养基配方,改进并稳定培养基制备工艺,确定适宜质量指标,并对各项质量指标数据进行分析。结果改进后的脑膜炎球菌多糖疫苗干粉培养基有效地降低了批间差异,各项质量指标均符合脑膜炎球菌培养要求,培养基的各项质量指标更加稳定可控,在生产中得到了良好、稳定的生长结果。结论用干粉原料完全替代脑膜炎球菌多糖疫苗培养基中的消化液和酵母透析液是成功的,同时改良的干粉培养基进一步明确了配方标准,使原料准备、制备工艺、质量指标控制更加标准化,有效提高了培养基质量,有利于规模化生产,促进了脑膜炎球菌多糖疫苗生产用培养基的标准化工作。     

右布洛芬脂肪乳注射液的分析方法及处方筛选

为研究右布洛芬脂肪乳注射液并建立分析方法,对右布洛芬原料药稳定性及原辅料相容性等进行研究以筛选处方。建立了一种反相高效液相色谱法,可测定右布洛芬含量及杂质。通过高温、高湿、强光照条件考察原料药及原辅料混合物的有关物质特性。制备含15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯(Kolliphor HS 15)不同浓度的右布洛芬脂肪乳注射液,考察剂型的质量。结果发现:线性范围为2.0～50.0μg/mL(R~2=0.999 9);原料药对热不稳定,原辅料混合物有关物质均小于1.0%;含Kolliphor HS 15 0.5%的右布洛芬脂肪乳注射液溶液稳定,有关物质小于1.0%。本研究不仅建立了适用于右布洛芬测定的分析方法,还确认了右布洛芬与所选择辅料无配伍禁忌,筛选的处方可满足质量要求,为产品进一步研究提供了数据支持。     

双载体制备青蒿素速释型固体分散体工艺优化研究

对载体类型影响青蒿素固体分散体中药物溶出度进行研究及优化制备工艺。以大豆卵磷脂与PEG 6000或聚乙烯吡咯烷酮为双分散载体,采用溶剂法制备青蒿素速释型固体分散体,以溶出度为考察指标,单因素试验筛选载体类型及最佳制备工艺;并采用红外吸收光谱法(IR)、差示扫描量热法(DSC)进行物相表征,明确载体-药物存在状态。结果表明在50 min内卵磷脂-PVP K30双载体比卵磷脂-PEG 6000药物溶出度更高,制备固体分散体为速释型,50 min内总溶出度87%以上,显著高于原料药和物理混合物,且优化最佳工艺条件为卵磷脂与PVP K30比为1∶7,搅拌时间30 min,无水乙醇用量20 mL。IR及DSC结果显示在固体分散体中药物可能以无定型状态存在。双载体制备青蒿素速释型固体分散体工艺简单可行,可显著提高药物溶出度,为提高青蒿素疗效奠定重要基础。     

棉铃虫细胞色素P450 337B3(CYP337B3)的表达、纯化及结晶

【目的】以抗性棉铃虫Helicoverpa armigera体内发现的一种基因重组导致的嵌合型P450酶CYP337B3作为研究对象,通过基因克隆、体外重组表达、蛋白质结晶等技术手段,获得CYP337B3(△23)的晶体结构,为深入了解棉铃虫P450酶CYP337B3的结构与功能奠定基础。【方法】对CYP337B3编码基因进行了密码子优化,通过基因重组,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达尝试,通过亲和层析及RESOURCETM Q离子交换层析对CYP337B3(△23)进行体外纯化,利用气相悬滴结晶方法对CYP337B3(△23)进行结晶条件的筛选及X射线晶体衍射。【结果】通过密码子优化,实现了CYP337B3(△23)在大肠杆菌原核表达系统内的大量表达,经过体外纯化及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,CYP337B3(△23)蛋白纯度可达到95%左右,我们对CYP337B3(△23)进行了蛋白结晶条件的筛选,最终获得了CYP337B3(△23)的结晶条件和蛋白晶体。【结论】本文利用气相悬滴结晶方法获得了CYP337B3(△23)的蛋白晶体,为今后CYP337B3的三维结构解析、功能研究以及最终阐述该种新型的棉铃虫抗药机制奠定了良好的基础。     

在小鼠模型中抗闭锁蛋白单克隆抗体完全阻止了丙型肝炎病毒的感染

丙型肝炎病毒(HCV)进入宿主细胞的过程分多步完成。过程中需要多种宿主因子,闭锁蛋白(OCLN)作为紧密连接蛋白被包括在内,并且体外细胞培养系统业已表明其在HCV感染过程中不可或缺。然而,由于缺乏能够识别完整OCLN细胞外环状结构域并抵御HCV感染的连接子,研究者们尚不清楚OCLN是否能够作为HCV治疗手段中有效且安全的目标物。通过使用基因免疫法和独特细胞差异化筛选技术,研究者成功制备了四种大鼠抗OCLN单克隆抗体(mAb)。     

黄芩叶茶生产过程中杀青工艺探究

黄芩叶茶是用黄芩的叶片制作而成的中药保健茶,黄芩叶中富含多种营养成分,具有较好的解热抗炎作用。目前民间黄芩叶茶的加工方式多种多样,致使其质量参差不齐,其中杀青工艺对产品的质量影响很大。目的:旨在探寻杀青工艺的最优条件,在保持其较好的外观和风味口感同时,也能充分保留其营养成分。方法:选取漂烫、蒸汽、微波三种杀青方式,以黄芩叶中过氧化物酶(Peroxidase, POD)活性,化学成分含量以及外观性状作为评价指标,在每一种杀青方式中筛选出各自最优的工艺参数,最后对经过最优工艺条件处理的三种杀青方式之间作比较,筛选出最好的杀青方式。结果:每种杀青方式筛选出的最优工艺条件分别为:1.漂烫杀青:95℃热水漂烫2 min。2.蒸汽杀青:摊放厚度2 cm,熏蒸3 min。3.微波杀青:摊放厚度3 cm,600 W微波输出功率下处理50 s。经化学成分含量比较,确定最佳杀青工艺为微波杀青。结论:良好的杀青工艺能够钝化酶活性,使青草气挥发,香气显露,叶质变软,有利于之后工序的开展以及产品质量的提升。     

果梗在梅鹿辄干红葡萄酒酿造中的作用

梅鹿辄是酿造葡糖酒的一种优良品种,梅鹿辄干红葡萄酒是一种较为珍贵的葡萄酒类型。在对其进行酿造和制作的过程中需要采用正确的酿造方式和发酵材料,才能够保证葡萄酒的质量。本文主要是对梅鹿辄干红葡萄酒酿造过程中果梗进行研究,从而进一步分析梅鹿辄干红葡萄酒的酿酒工艺优劣,以提高梅鹿辄干红葡萄酒的质量。     

假病毒技术用于抗HIV-1药物筛选及抗药性分析

HIV抗药性的产生严重阻碍了HIV疾病的治疗进程,因此开发新的抗HIV药物以及对病毒进行抗药性分析对于提高HIV疾病的治疗效果非常重要。将利用HIV假病毒构建的抗HIV药物评价系统及病毒抗药性分析系统应用于药物筛选及耐药性分析具有常规方法无法替代的优点。介绍了目前常用的几种类型HIV假病毒的特点和构建方法,同时介绍了假病毒感染细胞的系统及其在细胞水平筛选抗HIV药物和对HIV临床分离株进行耐药性分析这两方面的应用,并通过与常规方法进行比较来分析利用假病毒技术进行研究的优势及局限性, 还通过总结大量学者的研究成果证明了利用假病毒技术进行药物筛选和抗药性分析具有准确、安全和高效的特点。