病毒疫苗制备用不同核型VERO细胞系在裸鼠体内致癌/致瘤性的系统实验研究

生产疫苗用细胞系可能具有致瘤性,一些常用的细胞系需要检查不同代次有无致癌性。在建立传代细胞种子库与工作库基础上,对研制生产病毒活疫苗所用8株VERO细胞系在219只裸鼠进行了致癌(瘤)实验。本研究结果表明,VERO细胞染色体核型可发生变异,亚四倍体JA株与超二倍体KA株具有强的致癌性,不能用于致弱活病毒疫苗制备,但可替代HeLa细胞系用作恶性肿瘤阳性对照细胞。筛出无致瘤性的YB、dC、M和JB株亚二倍体VERO细胞系,可替代BHK-21细胞用于狂犬病减毒活疫苗制备。VERO细胞系染色体遗传相对稳定。不同代次变化不大。研究发现细胞染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性,不同核型细胞致瘤性不同,细胞染色体数目变异大小和致癌性成正相关,通过体内外交替选育可在裸鼠体内快速选育成功高变异率肿瘤细胞系。高变异率HeLa或VERO细胞系移植于裸鼠可能产生恶性横纹肌样瘤。因此,应当强调疫苗生产用细胞系致瘤性评价的重要性。     

禽类染色体制备方法的比较研究

以引进品种尼克红鸡为研究对象,对制备禽类染色体的外周血淋巴细胞培养法、羽髓法和改进的骨髓法进行了比较研究。结果表明：(1)外周血淋巴细胞培养法和羽髓细胞培养法制备染色体均未获得成功,因其操作复杂,技术条件要求高,周期长,成本高,可能不适宜于禽类的染色体制备。(2)直接羽髓法和改进的直接骨髓法以及骨髓短期孵育法却获得了成功,由于操作简便。周期短,成本低,适宜于禽类的染色体制备。     

人白血病细胞系(J_(6-1))染色体带型分析和标记染色体的发现

J_6-1细胞系是我所第五研究室于1976年培养成功的非淋巴细胞型白血病细胞系。为了了解该细胞系的核型特点,我们对本细胞系,在每隔10代连续6次常规染色体分析的基础上,用染色体显带技术(包括G带和C带),对其染色体进行了带型分析。除证明J_6-1细胞系具有男性核型外,还发现有两个标记染色体。现将我们所采用的方法以及分析的结果报告如下,并就其来源和意义进行初步讨论。     

含结构性倒位inv（5）（p13.1 q13.3）的毛细胞白血病细胞系的建立

为从分子水平揭示毛细胞白血病（HCL）的发病机理提供研究材料,将患者外周血淋巴细胞分离,用EBV病毒转化后进行细胞培养,建立细胞系,在连续传代3个月后,进行染色体组型分析,所培养细胞的染色体组型分析结果,与患者新鲜的外周血淋巴细胞的完全相同,证实该细胞系构建成功。     

人体胃低分化粘液腺癌细胞系MGc80-3的建立及其生物学特性的初步观察

从人体胃低分化粘液腺癌原发组织块培养的MGc80-3细胞系已建立成功,目前已传124代,存活23个月,并冻存21个月。单层增养细胞最短的倍增时间为25.4小时。细胞保持着胃粘液腺癌细胞的特征,并能在射线可的松处理过的大鼠皮下移植再现。该细胞系的染色体组型为超三倍体,染色体众数为75。     

利用相互染色体涂色技术分析两株人肺腺癌细胞系(A549和GLC-82)的核型特征

肺癌是全世界癌症死亡中的一个主要的原因。除吸烟外,一些肺癌患者的发病与氡气污染相关。该研究采用包括染色体分选、正向和反向染色体涂色技术,分析了两株肺腺癌细胞系A549和GLC-82的核型特征。A549和GLC-82细胞系都属于非小细胞肺癌细胞系,但诱因不同,后者来源于一个长期生活在氡气污染环境肺癌病人的癌组织。染色体涂色结果表明,这两株肺癌细胞系发生了复杂的染色体重排。在A549和 GLC-82细胞系中,除正常染色体拷贝数变化外,还分别存在13条和24条畸变染色体。约一半的畸变染色体是通过非相互易位形成的,其余的畸变染色体则是通过一些正常染色体的片段缺失或重复而产生的。尽管这两株肺癌细胞系都没有共同的畸变染色体, 但它们似共享两个染色体易位断裂点：HSA8q24和12q14。     

蟾蜍骨髓细胞染色体制备方法

蟾蜍骨髓细胞染色体制备方法檐除染色体数目少（２—２２）,个体大,核仁组成区具有多态性,是观察研究染色体的好材料。其染色体制片方法,最早使用切片法或压片法,效果不够理想。近年来发展为用血淋巴细胞培养制备法,很容易得到染色体分散良好的标本片,为闽练染色体...     

小麦与禾草对称融合中杂种染色体组成与亲缘关系的初步探究

采用PEG 法诱导普通小麦的原生质体与新麦草、无芒雀麦及韦氏雀麦等3 种近缘或远缘属间禾草的原生质体进行对称融合。对融合再生细胞系进行形态比较、同工酶分析及5S rDNA间隔序列差异分析, 以鉴定其杂种性质。对部分杂种细胞系进行了染色体组成的分析, 就体细胞杂种中小染色体及染色体断片的产生与异源核质的互作及亲缘远近的关系等问题进行了讨论。     

朱鹮细胞系的建立及其生物学特性观察

濒危级生物朱鹮是朱鹮属的唯一物种。为保藏朱鹮的遗传资源并为开展其相关生物学研究提供方便的实验材料,利用采自雌、雄两只成年朱鹮的皮肤样品,成功建立了两株朱鹮的细胞系。两株细胞系的形态均为典型的成纤维样细胞;免疫荧光染色检测显示细胞强表达平滑肌特异α-actin,表明两株细胞均来源于血管平滑肌组织;生长特性分析显示细胞增殖能力在10代以前较强,在15代以后逐渐减弱,25代以后则生长缓慢,难以生成单层细胞;染色体分析显示,两株细胞系均为正常二倍体,核型为2n=68,ZZ(♂),ZW(♀)。该研究首次报道了朱鹮染色体的Ag带、C带和G带,并通过带型分析和荧光原位杂交鉴别了朱鹮的性染色体。该文建系所用的皮肤组织块贴壁种植法,可以应用于其他鸟类,特别是珍稀濒危鸟类细胞系的建立。     

小麦与禾草对称融合中杂种染色体组成与亲缘关系的初步探究

采用ＰＥＧ法诱导普能小麦的原生质体与新麦草、无芒雀麦及韦氏雀麦３种近缘或缘间禾草的原生质体进行对称融合。对融合再生细胞系进行形态比较、同工酶分析及５SrDNA间隔序列差异分析,以鉴定其杂种性质。对部分杂种细胞系进行了染色体组成的分析。就体细胞杂种中小染色体及染色体断片的产生与异源核质的互作及亲缘远近的关系等问题进行了讨论。     

乌珠穆沁白马成纤维细胞建系及其生物学特性分析

本研究以内蒙古乌珠穆沁白马(Equus caballus)雄性和雌性为实验材料,利用组织块贴壁培养法进行耳组织成纤维细胞原代建系,研究耳组织来源的细胞贴壁率、冷冻前及复苏后存活率、生长曲线,进一步绘制乌珠穆沁白马成纤维细胞核型图。实验结果显示,雌、雄乌珠穆沁白马耳组织成纤维细胞经组织贴壁法建系培养,生长为典型的成纤维细胞形态,并呈现“S”型生长曲线特征;细胞冷冻前后存活率存在显著差异,但仍具有较好的耐受冷冻性;根据染色体核型分析,雌、雄乌珠穆沁白马耳组织成纤维细胞染色体条数为2n = 64,其中31对常染色体,1对性染色体。本研究成功建立了雌、雄乌珠穆沁白马耳组织成纤维细胞系,并且得到可稳定培养、具有良好遗传学特性的细胞系,为后续的相关深入研究奠定了基础。     

制备小鼠染色体新法——利用腹腔引流细胞制备染色体

利用外周血淋巴细胞体外培养法制备染色体,已被广泛应用于各类动物。在小鼠也有成功的报道,但在实际应用中还极不稳定,用同样的材料和条件,分裂相也会     

建立人类异常染色体核型的成纤维细胞系及滋养层细胞系

从自然流产绒毛或者中期妊娠羊水中分离细胞体外培养, 建立人类异常染色体核型成纤维细胞系及滋养层细胞系.中期妊娠羊水染色体诊断或自然流产绒毛染色体诊断过程中, 行G显带细胞核型分型, 对于发现异常核型的细胞, 进行分离、培养、传代、冻存、复苏及鉴定, 建立细胞系, 用PowerPlex 16系统行DNA-STR基因型检测.建立1株来自羊水的21三体成纤维细胞系, 以及7株来自绒毛的滋养层细胞系, 核型分别为47, XX 21; 69, XXX; 69, XXY; 47, XY 12; 47, XX 5; 48, XY 21, 22; 47, XY 18.所有细胞系体外传代均超过10代, 冷冻复苏率大于50%, 核型维持稳定, DNA-STR基因检测能对人细胞系进行个体识别.人异常染色体核型的成纤维细胞系和绒毛膜滋养层细胞系的建立,可以为探讨异常染色体产生机制及相关的分子遗传学研究提供细胞来源.     

人17号染色体计数探针的制备及应用

[目的]利用PCR法(链式聚合酶反应)制备17号染色体的绿色荧光计数探针。[方法]首先通过对人类基因组17号染色体着丝粒序列分析,找出其特异性的重复序列,设计引物,通过PCR法制备绿色荧光探针,然后利用荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)实验检验所制备17号染色体计数探针质量。[结果]FISH实验结果显示,利用PCR法制备的计数探针荧光信号清晰可辨。[结论]PCR法可良好地应用于17号染色体计数探针(Chromosome 17 enumeration probe,Cep17)的制备,制备的探针可用于相关疾病的检测。     

牦牛乳腺上皮细胞系的建立与生物学特性

本研究旨在建立牦牛乳腺上皮细胞体外培养体系。采用胶原酶消化法成功地建立了牦牛乳腺上皮细胞系(YMEC),通过免疫细胞化学、超微结构观察和RT-PCR 法对YMEC 细胞进行了鉴定,并研究了其形态、活力、生长曲线以及核型等生物学特性。结果表明,YMEC 细胞染色体2n = 60,群体倍增时间为45 ～ 48 h,持续培养25 代后出现细胞分化;细胞呈典型的“铺路石样”形态,其表面有丰富的微绒毛,细胞质内含丰富的线粒体和粗面内质网。污染检测结果为阴性。在激素诱导培养时,检测到了β - 酪蛋白mRNA 的表达。表明本研究成功建立了保留泌乳功能的牦牛乳腺上皮细胞系,为研究牦牛乳腺上皮细胞的功能提供了理想的工具。     

动物细胞系的染色体组型与遗传变异率分析

在建立国内首家犬,猫,猴,鼠传代细胞库,即7种动物肾细胞系（F－81,CRFK,MDCK,Vero,Vero-2,MA-104,BHK-21)的种子库和工作库的基础上,通过细胞染色体组型,G带核型,染色体数目变异率,结构畸变率分析,了解7种细胞系传代培养不同代次的染色体变异情况,以相应的细胞株皮下接种褐 形成肿瘤实验,软琼脂细胞克隆一苦恼经与植物凝集素作用下细胞凝集实验为对照,筛选出无致癌／致瘤性,符合细胞遗传学要求,无传染因子污染的细胞系（F－81,CRFK,Vero,Vero-2)或极低致癌性的MDCK细胞系用于制苗,发现肿瘤细胞系高变异率株可在裸鼠体内快速选育成功,细胞系染色体遗传特征决定致性质并具有种属特异性,得到一些100％成瘤和100％不成瘤的细胞株并了与染色体组型的关系,对于肿瘤的发病机理及实验治疗,都是非常好的模型,一些细胞系不仅成瘤而且还可转移（致恶性横纹肌样瘤的BHK－21和Vero 细胞株）,其他致瘤细胞株只成瘤不转移或不明显转移。     

大鼠Y染色体探针的制备与鉴定

目的:研究制备地高辛标记的大鼠性别决定基因Y区(Y染色体,SRY)探针,用于检测雄性大鼠来源的细胞在雌性受鼠体内的SRY基因表达情况.方法:按已知的雄性大鼠Y染色体上性别决定基因(SRY)的序列,请上海博亚公司合成oligoDNA,采用PCR技术连接并扩增,地高辛标记的方法制备基因探针.以雌性大鼠为对照,原位杂交法检测大鼠肾组织切片Y染色体阳性细胞情况.结果:用原位杂交法证实在雄性大鼠肾脏内有SRY表达,而雌性大鼠肾脏无Y染色体阳性细胞,证实这种探针具有较高的敏感性和特异性.结论:大鼠性别决定基因SRY探针的制备成功,为进一步研究异体雄性大鼠细胞移植后的分布和表达提供了实验基础.     

植物有丝分裂染色体标本制作的新方法

近年来,有人试图将人类染色体标本制备方法引用到植物材料上来,取得一些进展,但是目前在国内尚无此方面的报道。我们于1979年在 Kurata 和 Omura 工作的基础上,并参照人类染色体标本制备技术,开展了对植物细胞去壁、低渗、火焰干燥方法的研究,简称去壁、低渗法。并首次在黑麦、大麦、小麦上均获成功。材料和方法     

人单拷贝及重复DNAF序列的原位PCR

在培养的人小肠癌转移腹水细胞系细胞中进行了Ｙ染色体特异的重复序主单 拷贝序列的原位扩增与检测,结果显示原位ＰＣＲ法的灵敏度比直拉的原位杂交法明显提高。     

“重悬法”制备低等动物染色体

本文介绍利用"离心重悬法"对低等扁虫类生物染色体的制备方法,此法改进了以空气干燥法为主的对低等扁虫类动物染色体的制备方法。结果表明:能得到形态更清晰的中期分裂相,有利于对染色体的进一步统计分析。