叶酸偶联牛血清白蛋白负载卡铂和紫杉醇肿瘤靶向纳米粒制备、表征及体外释放性能评价

紫杉醇（Paclitaxel,商品名Taxol）是一种在红豆杉科(Taxaceae L.)红豆杉属(Taxus L.)生长缓慢的常绿乔木中分离提取的天然化合物。卡铂和紫杉醇均是目前临床上使用率很高的抗肿瘤药物,并在临床上经常配伍使用治疗不同的癌症。本研究以叶酸偶联的牛血清白蛋白作为药物载体,采用去溶剂技术制备了叶酸靶向卡铂—紫杉醇的白蛋白纳米粒,并研究了靶向制剂体外释放性质。研究结果表明：卡铂—紫杉醇白蛋白纳米粒平均粒径为199.4 nm,Zeta电位为-30.90 mV。卡铂包封率为91.4%;紫杉醇包封率为56.1%,药物总载药量为21%。其冻干粉复溶12 h后各项数据未发生较大变化,说明其具有良好的稳定性。体外释放结果表明叶酸—卡铂—紫杉醇白蛋白纳米粒与卡铂和紫杉醇原粉比较具有明显的缓释效果,体外释药时间可达120 h。     

多西紫杉醇白蛋白微球的制备及优化实验研究

多西紫杉醇(DT)是唯一应用于临床治疗肿瘤的紫杉醇的衍生物,其水溶性差,制剂中需要加入有机溶剂和助溶剂,而有机溶剂和助溶剂具有刺激性。为减少多西紫杉醇制剂的刺激性,本实验通过去溶剂化—化学交联法制备水溶性多西紫杉醇白蛋白微球。对制备过程中的重要影响因素进行考察,并通过Design-expert软件进行数据优化,最终得优化条件:白蛋白浓度为35 mg.mL-1,DT浓度为1.03 mg.mL-1,乙醇和水的比例为3∶1,乙醇的滴加速度为0.73 mL.min-1,搅拌时间为12 h,0.2%戊二醛与白蛋白的交联比为2∶1。得到的多西紫杉醇白蛋白微球粒径为185 nm,载药量为14.4%,成功的解决了其水溶性,为接下来的动物实验、临床应用提供了良好的基础。     

单克隆抗体靶向制剂的研究进展

本文综述了制备单克隆抗体免疫偶合物的三种方法,即抗体与药物直接交联的方法,药物通过小分子与抗体连接的戊二醛法、顺乌头酸酐法、活性酯法、Ｎ－琥珀酰胺基－３－（２－吡啶基二硫）丙酸法（ＳＰＤＰ法）、腙衍生物法和肽键连接等方法,以及用大分子做载体的交联方法,并介绍了葡聚糖、聚谷氨酸、聚赖氨酸和聚合多肽作载体的性质和应用情况。     

包载紫杉醇PLGA纳米粒的制备工艺优化及表征

以生物可降解材料乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]为载体材料,采用乳化-溶剂挥发法制备包载紫杉醇(PTX)的PLGA微球(PTX-PLGANPs)。采用正交实验设计,考察乳化剂质量浓度、PLGA与紫杉醇质量比、油相用量、剪切速度4个因素对粒径和载药率的影响,优化纳米粒最佳制备工艺。研究结果表明:当PLGA与PTX的质量比为4∶1,聚乙烯醇PVA用量0.1%,二氯甲烷用量为4mL,剪切速度为16000r·min^-1是纳米粒的最佳制备工艺。最佳工艺条件下的PTX-PLGANPs多批次重复实验得到PLGA-NPs粒径分布为(207.1±20.5)nm,Zeta电位为(-23.8±2.5)mV,载药量为(14.45±0.04)%。制得的PTX-PLGANPs均匀圆整、理化性质稳定。冻干粉复溶溶液12h粒径变化不大,具有良好的药物稳定性,为新型抗肿瘤缓释制剂的研发提供实验基础。     

单克隆抗体靶向制剂的研究进展

本文综述了制备单克隆抗体免疫偶合物的三种方法,即抗体与药物直接交联的方法,药物通过小分子与抗体连接的戊二醛法、顺乌头酸酐法、活性酯法、Ｎ－琥珀酰胺基－３－（２－吡啶基二硫）丙酸法（ＳＰＤＰ法）、腙衍生物法和肽键连接等方法,以及用大分子做载体的交联方法,并介绍了葡聚糖、聚谷氨酸、聚赖氨酸和聚合多肽作载体的性质和应用情况。     

载紫杉醇共聚物胶束的合成与表征

目的：制备一种包封率、载药量高的紫杉醇载体材料。方法：开环聚合法一步合成了两种两亲性共聚物PTL1和PTL2,以核磁和凝胶渗透色谱进行了产物的表征,以固体分散一超声法制备紫杉醇胶束,考察了胶束的载药量、包封率。结果：核磁和凝胶渗透色谱的结果显示得到了目标产物,所制备得到的载紫杉醇胶束包封率可以达到90％以上,载药量为9．5％以上。结论：实验结果表明我们所合成的PTL1和PTL2是好的紫杉醇栽体材料。     

载紫杉醇共聚物胶束的合成与表征

目的:制备一种包封率、载药量高的紫杉醇载体材料。方法:开环聚合法一步合成了两种两亲性共聚物PTL1和PTL2,以核磁和凝胶渗透色谱进行了产物的表征,以固体分散-超声法制备紫杉醇胶束,考察了胶束的载药量、包封率。结果:核磁和凝胶渗透色谱的结果显示得到了目标产物,所制备得到的载紫杉醇胶束包封率可以达到90%以上,载药量为9.5%以上。结论:实验结果表明我们所合成的PTL1和PTL2是好的紫杉醇载体材料。     

乙酰褐藻酸的制备与表征

本文将丙铜湿润的褐藻酸与乙酐反应,制备了乙酰褐藻酸,可以溶于多种有机溶剂。在相同的催化剂量下,乙酰褐藻酸的产率随反应时间加长而提高;当反应时间相同时,其产率随催化剂用量加大而提高。不同反应条件下,制备的乙酰褐藻酸的[η]无明显差异。本文用红外光谱对乙酰褐藻酸进行了表征。     

羟丙基壳聚糖的制备与表征

本文用环氧丙烷对壳聚糖进行了化学改性。结果表明:在壳聚糖、氢氧化钠和异丙醇重量比为1:1:16,反应温度30℃,反应时间4 h时,其产物有良好的水溶性,并用IR对产物进行了结构表征,其反应主要发生在-NH_2基团上。     

水溶性红曲红色素的制备与表征

以碱解法制备水溶性红曲红色素,碱解过程可使红斑素和红曲红素分子中的内酯键找开,生成闳酸盐,提高其亲水性。当反应体系ＮａＯＨ与红曲色素用量比例为１：１３时,碱解过程可在１５ｍｉｎ内完成。在ＰＨ５～６范围同,生成的水溶性红色素扣及光值随ＰＨ增大面临略有提高。加热和光照都将影响其稳定性,绝氧则对提高其稳定性无明显影响。在中性条件下,Ｃａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋导致色素溶液沉淀,Ｓｎ＾２＋、Ａｌ＾２＋、Ｆ３＾３     

肝靶向配体半乳糖基白蛋白和多聚谷氨酸

化学合成两类去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的人工配体——半乳糖基白蛋白(Gal_nHSA)和半乳糖基多聚-L-谷氨酸(Gal_nPLGA), 并以 ¹²⁵I标记的去唾液酸胎球蛋白(ASF)为标准配体,测定了合成配体抑制 ¹²⁵I-ASF与大鼠肝细胞膜ASGPR结合的IC₅₀值. 结果表明,Gal₁₂HSA、Gal₁₅HSA、Gal₂₆HSA、Gal₃₀HSA和Gal₃₄PLGA均能够有效地抑制 ¹²⁵I-ASF与ASGPR的结合,且前者与ASGPR的亲和力随半乳糖基化程度的增加而增加. 这些合成配体来源丰富、制备简单,适合于作为药物或基因肝靶向运送的导向配体.     

靶向膜蛋白的抗体制备策略

包括G蛋白偶联受体（GPCRs）和离子通道在内的膜蛋白是目前最为重要的一类治疗靶点。基于治疗,诊断或者研究上的目的,人们一直在寻找针对这些靶点的特异性抗体。尽管如此,用传统的方法制备高质量的靶向膜蛋白的抗体仍旧是一个挑战。     

紫杉醇脂质体制备方法优化比较

为了优化紫杉醇脂质体制备工艺,探究逆向蒸发法、高剪切法、薄膜分散法、注入法及复乳法等脂质体制备方法,对逆向蒸发法制备工艺及制剂处方进行单因素考察,由试验结果得出最优处方为药脂比为1∶25,磷脂含量为2.5%,胆固醇与磷脂比为1∶9,并对包封率以及粒径等指标进行初步评价,最终按照优化后的工艺制得的紫杉醇脂质体的包封率较高,粒径大小符合要求,质量稳定。     

靶向PSMA多价纳米抗体的制备及其生物学活性表征*

目的:构建原核表达系统,制备靶向前列腺特异性膜抗原(prostate-specific membrane antigen,PSMA)多价纳米抗体并初步评价其生物学活性。方法:Bglbrick法构建多价纳米抗体表达载体,转化至大肠杆菌表达并利用亲和层析法纯化。联合蛋白质电泳和Western blot验证纯化产物,BCA法检测表达量。通过免疫荧光和流式细胞术定性评估PSMA特异性亲和能力,细胞ELISA法定量检测PSMA亲和水平,流式细胞术检测内吞效率。结果:成功构建靶向PSMA单价、二价、三价和四价纳米抗体大肠杆菌表达菌株。发酵结果表明四种纳米抗体均能在摇瓶水平实现高效可溶表达,其中二价纳米抗体表达量最高[(259.14±23.56) mg/L],单价纳米抗体表达量最低[(100.58±6.27) mg/L]。亲和实验结果证实四种纳米抗体均能特异性识别并结合PSMA阳性肿瘤细胞,与单价纳米抗体相比,二价、三价和四价纳米抗体对PSMA亲和能力分别提高了3.32倍、2.29倍和2.03倍。最后的内吞实验显示四种纳米抗体均能被PSMA阳性肿瘤细胞高效摄取,30 min内的摄取率均在80%以上。结论:靶向PSMA的多价纳米抗体,尤其是二价纳米抗体,具有比单价纳米抗体更高的产量和亲和水平,且具备不亚于单价纳米抗体的内吞效率,是未来基于PSMA肿瘤诊疗试剂开发的重要候选。     

干姜挥发油纳米乳的制备与表征

为提高干姜挥发油的水溶性及在制剂过程中的稳定性,尝试将干姜挥发油制备成纳米乳载药形式,并对其进行表征。本文将提取的干姜挥发油进行成分分析并测定HLB值,通过处方筛选确定乳剂配比,并对所得干姜挥发油纳米乳的类型、粒径分布、表面电位及稳定性进行表征。经实验测得干姜中含挥发油2.1%,为淡黄色或黄色液体,HLB值为8,以吐温-80和司盘-80为表面活性剂,乳剂的最佳体积配比为油∶乳化剂∶水=6∶1∶13,激光粒度仪测得平均粒径为41.4 nm,表面电位为-10.31±1.51 mv,离心稳定常数为21.83%。此方法所得干姜挥发油纳米乳稳定性好,在水中分散性能好、稳定,可有效减少挥发油的损失。     

水溶性三七总皂苷制备与表征

为提高三七总皂苷的水溶性及其制剂在体内的稳定性和生物利用度,运用喷雾干燥法对三七总皂苷进行超细化,利用正交试验分析得到喷雾干燥制备三七总皂苷超细粉的最佳条件并对其各项指标进行检测。经分析所得最佳制备条件为：进口温度为140℃、三七总皂苷的浓度为65 g·L^-1、进料流速为30 L·h^-1和空气脉冲为4。对三七总皂苷原粉和喷雾干燥所得超细粉进行了理化性质检测,SEM扫描结果显示超细粉形貌规则,激光粒度仪测得粒径为70.5 nm;红外光谱检测所得结果证实超细粉化学性质较原粉无明显改变,不影响其药性;通过DSC、X-Ray检测所得结果显示超细粉与原粉相比晶体结晶度有所改变说明其水溶性增加。     

抗蛋白粘附表面的制备与表征

蛋白类药物是现代生物工程迅速发展的产物,有药效高、见效快、用量少等特点,也有来源稀少、价格昂贵等限制。蛋白类药物在存储和使用过程中的吸附损失不仅造成了医疗资源的浪费,还给蛋白类药物的用药安全性带来挑战。本文将细胞膜仿生技术用于表面修饰,通过基材表面磷酸胆碱单分子层的包覆,赋予表面非特异性阻抗蛋白质吸附的能力,从而为解决蛋白类药物在容器壁上吸附而损失的问题提供新方法,减少由此带来的药物浓度波动,大大减少医疗开支,增加用药安全性。     

胡椒碱分子键合人血清白蛋白位点的表征

利用荧光光谱法、紫外光谱法并结合计算机模拟技术在分子水平上研究了胡椒碱与人血清白蛋白(human serum albumin HSA)的键合作用.同步荧光及紫外光谱图表明,胡椒碱对HSA微环境有影响.位点竞争试验证明,胡椒碱分子键合在HSA的位点Ⅱ区.通过荧光光谱滴定数据求得不同温度下(300K 310K和318 K)药物与蛋白相互作用的结合常数及结合位点数.分子模拟的结果显示了胡椒碱与HSA的键合区域和键合模式,表明药物与蛋白有较强的键合作用;维持药物与蛋白质的相互作用力主要是疏水用,兼有氢键(位于氨基酸残基Arg 257,Arg 222及Arg218位).通过实验数据计算得到的热力学参数(ΔH0与ΔS0的值分别为原33.11 kJ·mol-1和原18.90 J·mol原1·K-1)确定了胡椒碱与HSA分子的相互作用力类型主要为氢键兼范德华力.     

杜仲醇的制备及其表征

采用大孔吸附树脂-制备液相色谱联用技术分离制备杜仲醇。以杜仲叶为原料,采用超声波辅助提取,提取液经过正丁醇萃取、D101大孔吸附树脂柱分离纯化后,再通过反相半制备液相色谱分离,以V(甲醇):V(水)=15∶85为流动相进行洗脱,制备得到杜仲醇单体。采用紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、核磁共振波谱(NMR)及液相色谱-质谱联用(LC-MS)等方法对所得单体进行了结构验证。液相色谱法分析检测表明制备所得杜仲醇纯度达95.12%。     

甘薯β—淀粉酶制剂制备与应用的研究

本研究以甘薯为材料,在不影响甘薯淀粉得率与质量的情况下,采用“等电点”法制制备出酶活高、稳定性好,安全无毒的甘薯β-淀粉酶制剂。应用此酶制剂可生产出组成、风味及色泽俱佳的饴糖。