乙型肝炎病毒核心抗原作为免疫载体的研究进展

乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)基因序列的C端、N端以及MIR区在插入外源基因后,能够正确折叠和组装成病毒样颗粒(VLPs),并且将外源序列暴露到衣壳的刺突,诱发强烈的外源序列特异的体液和细胞免疫反应.因此,HBc可作为基因工程疫苗的载体,在病毒性传染病的预防和肿瘤疫苗的开发和研制中都有广阔的前景.本文将从HBc作为免疫载体所具备的优势及其在病毒性传染病和肿瘤疫苗的应用进行综述.     

基因工程表达的乙型肝炎病毒核心抗原转变为e抗原的研究

乙型肝炎病毒核心抗原及e抗原均为乙型肝炎病毒核衣壳的重要组成部分。自从发现病毒核心颗粒中存在着e抗原之后,它们之间的关系一直是人们研究的课题。有些报道认为,e抗原是核心抗原的组成成份。有人通过实验发现核心抗原和e抗原的氨基酸序列极其     

乙型肝炎病毒重组腺病毒载体疫苗的免疫研究进展

以人类腺病毒（Ａｄ）为表达载体发展多价展组口服活疫苗,尤其在乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）疫苗研制上成效显著,表达ＨＢｃＡｇ,ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ的重组人类Ａｄ７型（ｄ７）活载体疫苗在实验动物免疫上取得良好效果。在重组Ａｄ活载体疫苗研制方面是一项重大进展,表达ＨＢｓＡｇ的重组Ａｄ７活载体口服疫苗已有人体初次免疫试验的报道。     

乙型肝炎病毒重组腺病毒载体疫苗的构建及发展前景

人类腺病毒基因组Ｅ１区,Ｅ３区及介于Ｅ４区和右侧端插入性末端重复之间的区段存在插入位点,可供插入乙型肝炎病毒保护生免疫原基因,构建重组载体疫苗,本文就Ａｄ基因组分区段阐述了各类ＨＢＶ重组Ａｄ表达戴本构建的一般原则,并指出了辅助细胞依赖性缺陷型Ａｄ载体用作非复制性Ａｄ载体活疫苗的潜力及非缺陷型Ａｄ双表达载体用作复制性Ａｄ载体活疫苗的前景。     

基因工程疫苗的病毒载体

病毒基因工程疫苗是以活病毒为载体将一段外源基因导入机体细胞内,并使外源基因维持较高水平的表达。通过使用复制型或复制缺陷型载体能使表达的抗原诱生机体产生相应的体液抗体,并能引起机体产生细胞介导的免疫反应及粘膜免疫反应。本文主要介绍有可能用于基因工程疫苗的DNA及RNA病毒载体构建及其应用。     

乙型肝炎病毒核心蛋白作为表位疫苗载体的应用

乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B viruscore protein,HBc)可以形成二十面体对称的颗粒样结构,由于其N端、C端和主要免疫显性区域(Major immunodominant region,MIR)允许一定程度的缺失和外源插入,并且能够将外源序列重复且高密度地暴露在颗粒的表面,诱发强烈的外源序列特异的体液和细胞免疫反应,从上世纪80年代中期就开始被运用于表位疫苗的研究。以下主要从影响HBc作为表位疫苗载体的因素,包括HBc长度、外源插入位点和表位序列的性质等来介绍HBc作为表位疫苗载体的应用。     

鱼用基因工程疫苗载体的研究进展

疫苗载体是基因工程疫苗研制过程中的一种应用极为广泛的工具。它在病原基因的表达方面显示了独特的优越性及广阔的开发和应用前景。应用疫苗载体已成功构建了多种鱼用基因工程疫苗。现就鱼用基因工程疫苗载体的研究进展进行综述,以期为新型疫苗的研制提供参考。     

不同佐剂对含S+PreS1融合抗原的乙型肝炎病毒颗粒疫苗免疫原性的影响

本研究在前期工作基础上,用CHO细胞表达的含PreS1+S融合抗原的新型基因工程HBV颗粒疫苗(HBSS1)与Al(OH)3、CpG及CpG+Al(OH)3等佐剂配伍,在Balb/C小鼠模型上研究不同佐剂对HBV颗粒疫苗肌肉注射后免疫应答的影响,主要包括抗体滴度、抗体亚型分类及特异性细胞免疫(γ-IFNELISpot检测)。结果表明:CpG佐剂结合HBSS1颗粒疫苗可快速诱导(单针免疫)高水平的抗PreS1及S抗体,IgG2a/IgG1比率1,同时可诱导较高抗原特异的细胞免疫应答;Al(OH)3+CpG双佐剂组一次免疫后可诱导产生最高的抗S抗体滴度(1:105),其产生的抗体亚类包括IgG1、IgG2a与IgG2b;在S抗原N端(13~49aa)存在优势CTL表位。结论:CpG佐剂结合HBSS1颗粒疫苗应是发展新型治疗性乙肝疫苗的较佳选项。     

小RNA病毒——新型的基因工程疫苗载体

小RNA病毒(Picornaviruses)是最小的RNA动物病毒,这类病毒的研究具有重要的意义,①小RNA病毒可以引起人和动物的许多严重疾病,如脊髓灰质炎、甲型肝炎、口蹄疫、水泡病等;②口蹄疫病毒(FMDV)是最早发现的动物病毒,脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)是最早被纯化并获得结晶的病毒。近来的研究发现,小RNA病毒尤其是PV有可能成为新的疫苗载体,可以插入某些已知或推测的病毒中和抗体决定簇的基因区域。本文仅就这方     

小鼠肝炎病毒抗体ELISA试剂盒的研制——多价抗原检测抗体

<正>自从1949年首次分离到MHV以来,在不同国家和地区已分离出许多MHV毒株,检测小鼠群MHV感染所用抗原也因实验室而异。我们用MHV-3抗体ELISA试剂盒进行检测。据Robert L.Peter报导,MHV多价抗原检测自然感染小鼠血清较单价抗原更敏感,但在国内尚未见报道。因此,本文用5株MHV研制了多价抗原检测抗体ELISA试剂盒,并与单价抗原进行了比较。实验结果报导如下。     

乙型肝炎病毒前S2抗原决定簇与乙型肝炎病毒核心抗原的基因融合与表达

乙肝前Ｓ２（ＨＢＶ ＰｒｅＳ２）肽段由５５个氨基酸组成,其Ｎ端肽段含Ｔｈ和Ｂ细胞抗原决定簇。我们将化学合成的ＰｒｅＳ２ ｅｐｉｔｏｐｅ（１２０－１４５）基因不同位点进行融合,融合基因在大肠杆菌中获得表达,并对融合蛋白进行了纯化。经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ实验表明,融合蛋白具有ＰｒｅＳ２和ＨＢｃＡｇ两者的抗原性。此外,研究还表明,强启动子能使表达水平有一定的提高。     

腺病毒—基因工程疫苗的重要载体

腺病毒(Adenovirus,简称Ad)是一种DNA病毒,基因组长32～36kb,不同血清型的基因组大小有所不同。目前对Ad2和Ad5等主要血清型的基因背景研究得较为深入,病毒的转录分为早期(Early)和晚期(Late),早期包括E1a,E1b,E2a,E2b,E3和E4,早期表达蛋白的主要功能是调节基因表达和DNA复制;晚期转录包括L1～5,晚期蛋白主要是毒粒成分和病毒包装蛋白。病毒启动子转录频率和RNA的加工受病毒编码蛋白的调节。     

外分泌型的乙型肝炎病毒核心抗原核酸疫苗的构建与体外表达

目的:构建含有组织型纤溶酶原激活剂(tPA)信号肽的乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)核酸疫苗。方法将HBcAg基因用PCR方法扩增并分别引入相应的限制性内切酶酶切位点,然后克隆入pJW4303载体中获得相应的核酸疫苗,经筛选鉴定后,用上述核酸疫苗与野生型HBcAg核酸疫苗及空载体质粒pJW4303分别用脂质体瞬时转染293T细胞,应用蛋白印迹法检测核心抗原的表达。结果成功构建以pJW4303为载体的含tPA信号肽的HBcAg核酸疫苗,体外表达证实含tPA信号肽的HBcAg在293T细胞胞内和胞外均能表达,含tPA信号肽的HBcAg核酸疫苗的核心抗原表达水平较高。结论以pJW4303为载体的含tPA信号肽的HBcAg核酸疫苗能够将细胞内的HBcAg分泌到细胞外,为进一步研究其免疫原性打下了基础。     

鸭乙型肝炎病毒核心抗原DNA疫苗的构建及其诱导的体液免疫应答

为研究鸭乙型肝炎病毒核心抗原( DHBcAg) 真核表达质粒的免疫原性, 分析DHBcAg DNA 疫苗诱导的体液免疫应答, 首先借助生物信息学方法对鸭乙型肝炎病毒( DHBV) Core 基因编码的氨基酸序列进行亲疏水性分析, 分别构建DHBcAg 全基因( E-DHBc263) 及去除疏水性序列的DHBcAg 片段( E-DHBc180) 的真核表达质粒, 间接免疫荧光检测结果显示可在COS7 细胞内表达。进一步构建原核表达质粒p-DHBc263 和p-DHBc180, 仅p-DHBc180 可表达蛋白, 纯化后作为酶联免疫吸附试验( ELISA) 包被抗原, 用于DHBcAb 的检测。分别用E-DHBc263 和E-DHBc180 免疫小鼠, 采用间接ELISA 检测DHBcAb。结果显示, E-DHBc180 可诱导免疫小鼠产生DHBcAb 免疫应答, 加强免疫后效价可达1∶100 ～1∶400。结果提示, E-DHBc180 可作为DHBcAg DNA 疫苗, 在DHBV 感染鸭模型中评价其效果。     

乙型肝炎病毒核心抗原基因序列的启动子活性

将核心抗原基因起始码下游的序列,构建两个ＣＡＴ报告基因表达质粒,即ｐＣＡＴＮ Ｉ和ｐＣＡＴＮⅡ,转染ＨｅｐＧ２与ＣＶ－１细胞后,均可使ＣＡＴ报告基因表达,表现出启动子活性。     

戊型肝炎病毒载体疫苗的研发

<正>戊型肝炎病毒是一种单链核糖核酸构成的无包膜病毒,通过粪口途径传播,会导致人类的急性肝炎。当前市面上无戊型肝炎疫苗(HEV)可用。HEV繁殖缺乏合适的细胞培养系统,HEV假衣壳(ORF2蛋白)既可以在大肠杆菌、也可以在昆虫细胞中产生,在猴子抗病毒和避免人感染HEV方面这种伪衣壳都是有效的。我们计划开发一种新的抗HEV感染的疫苗,其使用腺相关病毒(AAV)作为HEV衣