细叶黄芪叶肉原生质体植株再生

从细叶黄芪(Astragalus tenuis)外植体愈伤组织分化出的再生苗叶片分离原生质体。原生质体培养在改良 K8p 培养基中形成了愈伤组织。增殖后的愈伤组织转入分化培养基中分化出苗。幼苗在生根培养基中长出不定根,再生成为完整植株。再生苗叶肉原生质体在 AY培养基中,种子无菌苗叶肉原生质体在改良 K8p 或 AY 培养基中均不能形成愈伤组织。较低的2,4-D 浓度有利于原生质体愈伤组织的形成和分化,过高的2,4-D 浓度对愈伤组织的形成和分化有不利的影响。     

马铃薯实生苗子叶及下胚轴原生质体培养研究

用马铃薯普通栽培种（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ Ｌ．）３ 个品系的实生苗刚展开的子叶及下胚轴游离和培养原生质体。实验结果表明,子叶及下胚轴原生质体的分裂频率显著地高于经多次继代繁殖的试管苗顶部幼嫩叶片和茎尖的原生质体;在强连续光照下培养的实生苗,其原生质体的产量和质量都显著地高于弱光下培养的;在完全黑暗下培养的黄化实生苗不能游离出完整的原生质体;酶解前对子叶及下胚轴切段在酶液中进行真空渗透处理能显著地提高原生质体的产量,但此种处理对试管苗叶片无明显效果;下胚轴原生质体的产量显著地高于子叶,但在原生质体的质量方面,这两种组织间无明显的差异     

通过不对称体细胞杂交向小麦转移青苗碱谷DNA(英文)

普通小麦“济南177”(Triticum aestzvum L.cv.Jinan 177)经继代培养和选择,形成了两种性质不同的愈伤组织,一种生长迅速,易于形成悬浮系,游离的原生质体具有旺盛的分裂能力,但不能分化,称为Cha 9;另一种具有一定分化能力,但游离的原生质体分裂能力低,称为176。二者之一来源的原生质体与紫外线照射的青苗碱谷原生质体融合均不能获得再生植株。而将来源于Cha 9和176的两种原生质体混合,与经紫外线照射的青苗碱谷原生质体在PEG诱导下融合,融合产物再生了大量植株。再生的愈伤组织及植株经表型、细胞学、同工酶、RAPD分析,证明了其杂种性质,用小麦叶绿体特异的简单重复序列(SSR)引物分析了再生杂种的叶绿体遗传组成情况。在不同的杂种克隆中,同时带有Cha 9和176的遗传物质并含有供体核及胞质基因组的克隆4具有较高的分化能力,再生了大量生长旺盛的完整植株。     

通过不对称体细胞杂交向小麦转移青苗碱谷DNA

普通小麦"济南177"(Triticum aestivum L.cv.Jinan177)经继代培养和选择,形成了性质不同的愈伤组织,一种生长迅速,易于形成悬浮系,游离的原生质具有旺盛的分裂能力,但不能分化,称为Cha9;另一种具有一定能力,但游离原生质体分裂能力低,称为176.二者之一来源的原生质体与紫外线照射的青苗碱谷原生质体融合均不能获得再生植株.而将源于Cha9和176的两种原生质体混合,与经紫外线照射的青苗碱谷原生质体在PEG诱导下融合,融合产物再生了大量植株.再生的愈伤组织及植株经表现型、细胞学、有工酶、RAPD分析,证明了其杂种性质,用不麦叶绿体特异的简单得复序列(SSR)引物分析了再生杂种的叶绿体遗传组成情况.在不同的杂种克隆中,同时带有Cha9和176的遗传物质并含有供体核及胞质基因组的克隆4具有较高的分化能力,再生了大量生长旺盛的完整植株.     

埃塞俄比亚芥的原生质体培养及植株再生

以埃塞俄比亚芥“84A165”为材料,从3—5日龄无菌苗的子叶、下胚轴或温室生长的三叶期苗的第一真叶游离原生质体,悬浮于 P-B 液体培养基中,用0.15—0.3%低融点琼脂糖固化,薄层漂浮,暗培养。原生质体密度为5×10~3—1×10~4/ml。下胚轴原生质体在培养后48小时出现一次分裂,3天后分裂频率达21%,6天后达34%。子叶和真叶原生质体起始分裂稍晚(第5天),分裂频率也较低。培养1周后,加入稀释培养基 DPDK_3,并转至光下,以后每隔一周加液一次。一个月后获得肉眼可见的小愈伤组织。植板率为2—3%。小愈伤组织在固体增殖培养基上继代长大。子叶和真叶原生质体来源的愈伤组织在转至补加 NAA0.1、BA3mg/1的分化培养基上后获得芽分化,把这些芽切离,转至 IAA0.2mg/l 的生根培养基上,再生出完整植株。     

金边瑞香在离体培养条件下花芽分化的探讨（简报）

金边瑞香在离体培养时能从愈伤组织上直接分化花芽,并在试管内开花。花芽分化与外植体类别,取材时供体植株的发育阶段以及培养基内植物生长调节物质的水平有密切关系。     

水稻原生质体再生小植株

水稻的原生质体培养一直是引人注意的问题,多年来进展不大。近年来Fujimura等Coulibaly等Yamada等分别由水稻盾片和未成熟胚愈伤组织原生质体;胚芽鞘幼嫩愈伤组织的原生质体和水稻雄性不育系细胞游离原生质体得到再生植株。我们用水稻(Oryzasativa)农虎6号种子胚诱导愈伤组织制备原生质体,也培养得到再生小植株,结果简报如下:     

可乐茄叶肉原生质体培养再生植株

本文报道茄属果树可乐茄（ＳｏｌａｎｕｍｑｕｉｔｏｅｎｓｅＬａｍ．）叶肉原生质体的分离、培养及植株再生。幼嫩叶片原生质体经酶游离、纯化后,以１×１０４个／ｍｌ密度培养于稍加改良Ｋ８ｐ（附加２,４－Ｄ０．５ｍｇＬ（－１）、ＮＡＡ１．０ｍｇＬ（－１）和ＢＡ０．５ｍｇＬ（－１））的培养基中,三天后开始分裂,一周分裂３—４次。一个月形成小细胞团,植板率为０．１—０．２％,小细胞团转培养于ＭＳ＋２,４－Ｄ０．５ｍｇＬ（－１）上增殖后进行分化。原生质体来源愈伤组织在ＩＡＡ（０．１—１．０ｍｇＬ（－１））与ＢＡ或ＺＴ组合的培养基中能诱导器官发生,芽分化率最高可达４２．９％;但ＩＡＡ、ＢＡ、ＺＴ三者一起使用未见任何器官分化。小芽在ＭＳ＋ＩＡＡ０．２ｍｇＬ（－１）中生根成植株。可乐茄叶肉原生质体的植株再生,可应用于育种和茄属植物遗传工程研究。     

甘薯外植体组织培养和植株再生

近年来国内外开展了甘薯组织培养和花药培养的研究工作,报道了从甘薯块根愈伤组织获得再生苗和应用茎尖分生组织培养获得无病毒植株。吴耀武,Biding 和Shepard 分别报道了甘薯茎段、叶片原生质体和叶肉细胞培养形成了愈伤组织和细胞团。蔡新声等培养甘薯茎段获得愈伤组织并分化出胚状体。我们自1982年开始进行甘薯外植体——茎段、叶柄和叶片诱导成植株的探索,1983年由外植体的三个部分愈     

二倍体马铃薯叶肉细胞原生质体培养的研究

以马铃薯抗青枯病二倍体材料ED13和CE171、炸片颜色好的二倍体材料HS66以及优良性状双单体材料DH401和DH405为供体材料,对马铃薯叶肉原生质体培养进行研究。叶片悬浮黑暗预处理和试管苗黑暗预处理两种预处理方式对原生质体活力无显著影响。以0.5 mol/L甘露醇为渗透调节剂,25℃酶解12 h条件下,适宜CE171和DH401纤维酶浓度略高于ED13、HS66和DH405,分别为0.3%和0.4%。ED13和DH401原生质体在VKM液体培养基中培养3～4周,经愈伤组织生长培养基培养2周,转至芽诱导培养基培养,2～3个月后形成具根茎叶的完整植株。HS66和CE171原生质体培养6～8周也能形3～4 mm愈伤组织,但没有分化出芽;DH405的原生质体不分裂。     

草木樨状黄芪叶肉原生质体的植株再生

分别从草木樨状黄芪胚轴再生苗的上部和下部叶片分离原生质体。来自上部叶片的原生质体培养在P_2培养基(含2,4-D 1.0mg/L)中获得了较高的分裂频率(48.9%)和愈伤组织再生频率(321块/m1),过高和过低的2,4-D对于愈伤组织的再生都是不利的。来自下部叶片的原生质体分裂频率很低,不能形成愈伤组织。小愈伤组织转入固体或液体增殖培养基中均能快速生长。愈伤组织转入分化培养基或继续在液体培养基中振荡培养均能分化出芽,频率达100%。目前已获得了大量的再生植株,部分已移栽成活。     

大豆子叶原生质体游离和培养因子的研究

大豆悬浮培养细胞原生质体的游离和培 养。3,13,203及遗传操作应用的研究“,7,8,11,15,21,25,已 有报道。近年来,一些学者直接从大豆植株的 不同器官或部位如豆荚组织〔271、幼苗根[261、叶 肉[22,24,和子叶『2,19,游离和培养原生质体获得好 的结果。本试验叙述大豆实生苗和未成熟种子 两类子叶原生质体游离和培养因子的异同,以 利于子叶原生质体遗传操作应用和植株分化的 进一步研究。     

鹰嘴紫云英甲硫氨酸抗性系原生质体培养及植株再生

本研究建立了鹰嘴紫云英(AstragaluscicerL.)甲硫氨酸抗性系原生质体再生植株的实验体系。以茎切段诱导的松软愈伤组织为材料,通过酶法游离出大量有活力的原生质体。原生质体经培养持续细胞分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗。比较了不同培养基、培养密度对原生质体形成细胞分裂和再生的影响。结果表明,原生质体以2×105个/ml的植板密度,在附加2.0mg/L2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、0.2mg/L6-苄氨基嘌呤(6-BA)、200mg/L水解酪蛋白、2%蔗糖和0.3mol/L甘露醇DPD培养基中培养后,其分裂频率达38.3%。原生质体培养形成的愈伤组织仍具有对甲硫氨酸的抗性。转移到附加10mg/LKT、0.5mg/LNAA的MS分化培养基上,获得大量的再生苗。     

苹果原生质体培养及芽分化的诱导

苹果原生质体培养难度较大。目前再生植株的仅有苹果砧木 M9、MM106及斯巴坦。许多研究均停留在愈伤组织阶段,可见诱导愈伤组织的分化,是苹果原生质体再生植株的关键。本文报道了从新红星苹果花蕾胚性愈伤组织建立的悬浮细胞系分离原生质体,经培养获得无根绿苗的结果。4月末,5月初采集大蕾期苹果花蕾,0.1%升汞消毒,接种于含激素的 MS 培养基上,诱导愈伤组织,再建立胚性悬浮细胞系。继代5天左右的悬浮细胞培养物可作为游离原生质体     

多变小冠花(豆科牧草)原生质体和外植体胚状体的形成和植株的再生

EM-5游离大量的多变小冠花实生苗子叶原生质体。Kao的原生质体培养基使子叶原生质体分裂形成细胞团。MSD_4诱导多变小冠花原生质体愈伤组织产生胚状体、苗和植株的分化。MS-1诱导多变小冠花实生苗根、下胚轴和子叶愈伤组织的形成,胚状体、苗和值株的分化。根愈伤组织胚状体形成的频率(60%)高于子叶和下胚轴的(<23%)。组织切片的观察表明多变小冠花原生质体植株的再生通过胚状体形成的途径。     

巴戟天离体苗不定根发育的观察

以巴戟天幼嫩种子中的胚为外植体进行组织培养诱导出愈伤组织,继而诱导分化出芽,长成小苗。将小苗转入生根培养基中,从茎基部诱导出不定根,再生植株。对离体苗的不定根发育进行结构观察,发现巴戟天组培苗的不定根是由形成层细胞先分裂分化形成根原基后发育而成的。     

水稻原生质体培养及植株再生的研究

由粳稻77-170品系及籼稻品种IR-50的细胞悬浮培养物游离的原生质体,用琼脂糖包埋于RY-2培养基中,发生了持续分裂。前者植板率达2.5％以上,二者最后都再生出植株。对游离和培养方法做了如下改进:1)采用两步法,即先用果胶酶,再用果胶酶和纤维素酶的混合酶进行游离,可避免原生质体发生融合并获得高质量的原生质体;2)悬浮细胞培养基中加入ABA有利于原生质体的存活和分裂;3)琼脂糖包埋培养可大大提高植板率;4)用较高渗透压的培养基培养原生质体再生的细胞团及愈伤组织,可提高植株再生频率。由于这两个品种(系)的培养物都已继代一年半之久,再生植株均为白化苗。这是迄今第一个由籼稻原生质体再生植株的报道。     

PEG法介导转化诸葛菜下胚轴原生质体获得转基因植株

采用诸葛菜无菌苗的下胚轴组织为材料,分离原生质体,在原生质体培养基中作液体浅层暗培养,植板率为５％,植株再生频率为１００％。作者进而开展了遗传转化研究。为研究ＰＥＧ介导转化诸葛菜原生质体的影响因素,通过瞬间表达,实验了ＰＥＧ法转化子叶原生质体的过程,在此基础上将分离纯化后的原生质体与带ＨＰＴ基因的质粒ＤＮＡ（ｐＢＩ２２２）混合,ＨＰＴ基因作选择标记,ＰＥＧ介导转化;重新收集转化后的原生质体,以５×１０４／ｍｌ的密度在原生质体培养基中作浅层培养;培养１０—１５天后用２５ｍｇ／Ｌ的潮霉素（ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ）进行筛选,一月后出现少量细胞团,转入含潮霉素５０ｍｇ／Ｌ的扩增培养基扩增愈伤组织,进而转入含５０—１００ｍｇ／Ｌ潮霉素的分化培养基诱导分化成苗,分化率为１００％,转入生根培养基中生根成完整植株。抗性植株再生率为４×１０（－５）。在获得再生转基因植株后,以再生植株叶片为材料,进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分子杂交,证实外源基因已稳定整合到植物基因组中并表达,再生转基因植株频率为１０（－５）。国内外首次转化诸葛菜属植物原生质体获得成功。     

盐生植物海马齿离体再生

建立盐生植物海马齿（Sesuvium portulacastrum）的离体再生体系,为其生物技术改良奠定基础。以海马齿叶片、茎和腋芽为外植体, 在不同激素配比的培养基上进行愈伤组织诱导、继代培养以及不定芽的分化和生根培养。结果表明： 最适愈伤组织诱导的外植体为叶片, 其次为幼嫩的茎段和腋芽。以叶片为外植体, 愈伤组织诱导率最高的培养基为MS＋2.0mg·L^–12, 4-D ＋ 0.5 mg·L^–16-BA ＋ 3%sucrose; 芽分化最适培养基为MS ＋ 1.0 mg·L^–1 2, 4-D ＋ 0.2 mg·L^–1 6-BA ＋ 3% sucrose;生根最适培养基为MS ＋ 3%sucrose ＋ 0.1%AC。炼苗移栽后, 成活率可达80%。     

紫云英叶片及叶肉原生质体的培养

本工作研究了豆科植物紫云英的叶片及叶肉原生质体的培养。叶片培养实验表明,诱导愈伤组织的最适培养基为MS加1.0-2.0毫克/升2,4-D和0.25毫克/升KT;诱导根分化需加1.0—5.0毫克/升NAA和0.5毫克/升BA;而苗分化则以0—0.5毫克/升IAA和0.5毫克/升BA为好。高浓度的NAA有利于根分化而抑制茎芽形成;高浓度的IAA对根和芽分化都有抑制作用。叶肉原生质体分离和培养试验表明,紫云英叶肉原生质体的释放及其培养活力受叶龄、植株生理状态和酶浓度的影响。叶肉原生质体在改良的KM8P培养基中能分裂。用改良KM8细胞培养基定期稀释,可使分裂持续进行而得到细胞团。BA和2,4-D为诱导紫云英叶肉原生质体分裂所必需。其最佳组合激素为BA 0.21毫克/升和2,4-D 1.13毫克/升。葡萄糖作为渗透压稳定剂时,其浓度明显影响原生质体的存活率。弱光条件下培养比黑暗培养有利于叶肉原生质体分裂。由叶肉原生质体形成的愈伤组织能形成瘤状结构和根。