用固定化黑曲霉完整细胞连续生产柠檬酸

本研究比较了两种固定化黑曲霉完整细胞的方法:黑曲霉KCU520在30℃培养5天,用无菌水制成分生孢子悬液(10~7—10~8孢子/ml)。①在400ml80％海藻酸钠溶液中加入孢子悬液600ml,然后逐滴加到1％CaCl_2溶液中,形成的颗粒在10℃固定1小时备用。②聚丙烯酰胺凝胶(PAG)固定化,在64ml孢子悬液(4℃)中加丙烯酰胺12克,双丙烯酰胺     

布鲁氏菌变态反应原的研究Ⅴ.犬种菌的变态反应原性

我们按照规程要求制备了犬种菌素。它在致敏豚鼠和人体中证明了:它虽为粗糙型菌种,但仍具有变态反应原性;用死菌液10亿/0.1ml给致敏动物作皮试,亦出现良好的变态反应。24小时反应强度为15.8—18.4mm;48小时为6.8—10.8mm。犬种菌液热处理后,其上清液经硫酸铵透析,取其粗提蛋白作为变态反应原,用50μg/0.1ml给致敏动物作皮试,经犬种菌免疫的动物出现弱变态反应(24小时均在10mm以下),经活菌苗致敏的动物出现较强的变态反应(24小时为13—14mm,48小时为10.5—11mm)。犬种     

茶毛虫核型多角体病毒制剂的防效

添加萤光素钠、656L乳化剂等的EpNPV制剂．其四号和五号配方对茶毛虫的LC70分别为4．42×10^5PIB／ml和1．75×10^6PIB／ml．与同浓度病毒悬液比．毒力系数(1)分别为4．39和1．11;用五号配方5～6×10^7PIB／ml可比同浓度NPV悬液提高防效11．2％．在700ha茶园应用平均防效达80%以上．经济效益1305元／ha;安全性检测表明．对人畜均安全无害。     

固相二抗放射免疫法测定表皮生长因子

本实验制备的兔抗鼠表皮生长因子(EGF)抗血清放免效价为1:10~6,抗体的特异性强,亲和常数K为8.29×10~(-10)mol/L,最大结合容量B_(max)为2.61×10~(-10)mol/L。在固相二抗放射免疫法测定中,0.1～100ng的EGF可以竞争性抑制~(125)I-EGF的结合,Logit分析相关系数为-0.993,低限检出量为0.5ng/ml。本方法的回收率及变异系数分别为92％～102％和5.7％～7.0％。应用此方法测定小鼠颌下腺中EGF的含量约为0.66mg/g腺体。     

柑桔衰退病毒的提纯

从甜橙病株的嫩梢皮组织提纯柑桔衰退病毒(Citrus Tristeza Virus,CTV),冰冻组织按每克鲜组织加入5ml0.1mol/L Tris缓冲液pH8.4(内含0.15％Triton x—100)进行匀浆。经几次差速离心和两次PEG(分子量6,000)沉淀后,将获得的病毒粗提液铺在不连续蔗糖密度梯度液上,HITACHI RPS_(40)T转头30,000r/m离心3小时,收集位于300mg/ml和400mg/ml梯度层之间的分离带,洗脱、浓缩后获得CTV提纯物。提纯的CTV粒子大小为1.000—1,500x12urn,与美国的CTV抗血清起阳性反应。     

兔下颌骨慢性化脓性骨髓炎动物模型的建立

目的 探讨下颌骨慢性化脓性骨髓炎的造模方法.方法 成年新西兰兔22只,于下颌骨体外侧近正中联合处开骨窗注入0.1 mL5％鱼肝油酸钠和0.1 mL5.0×108 CFU/mL金黄色葡萄球菌悬液,术后常规回笼饲养.于6周开始采用以下方法检测:①肉眼大体观察;②双能X线骨密度检测;③CBCT(锥束CT)放射学形态观察;④局部细菌培养;⑤组织病理学评价.结果 所有新西兰兔早期精神状况较差,手术区域肉眼观有瘘管并有脓性分泌物.双能X线骨密度检测发现手术区骨密度(BMD)值变化不具有统计学意义(P＞0.05).CBCT显示骨缺损区边缘模糊,有骨破坏迹象.局部取材细菌培养有金黄色葡萄球菌生长.病理切片显示有不同程度的淋巴细胞、中性粒细胞、桨细胞浸润,死骨形成.结论 采用兔下颌骨体外侧近正中联合处造骨缺损并注射一定量细菌悬液的方法能够获得理想的慢性化脓性骨髓炎模型.     

长毛对虾血细胞与血淋巴液的生化特性初步研究

长毛对虾(Fenneropenaeus penicillatus)是我国东南沿海一带一种主要的水产经济动物.为了解其血淋巴液的基本特性,借助显微观察、生化实验等方法对长毛对虾的血细胞和血浆的细胞化学特征进行了初步研究.结果表明,长毛对虾血细胞密度为(0.43±0.11)×107个/ml;可明显分无颗粒细胞:长径(9.7±1.4)μm、短径(5.8±0.8)μm,占细胞总数的16.2%±1.8%;大颗粒细胞:长径(11.3±1.3)μm、短径(6.7±1.7)μm,占细胞总数的46.6%±3.2%;小颗粒细胞:长径(7.1±0.4)μm、短径(5.4±0.4)μm,占细胞总数的35.7%±4.5%.在16～18℃下,60 min的反应时间内,血细胞对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)菌体细胞悬液(106～107个/ml)的吞噬率为67%±5%.长毛对虾血浆蛋白浓度为11.78 mg/ml,对3%的鸡血红细胞悬液的溶血相对活性为2.6,对5%的鸡血红细胞悬液的凝集效价为15～18.血浆平板抑菌实验表明,长毛对虾血浆对金黄色葡萄球菌有明显的抗菌效果,抑菌圈大小为(10±1)mm,对大肠杆菌(Escherichia coli)的抑菌圈大小为(6±2)mm.本工作为长毛对虾血浆中诸多活性多肽的后续研究奠定了基础.     

微酸性电解水对人员手部和即食蔬菜消毒效果的研究

本实验研究了微酸性电解水对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌悬液的杀灭作用,以及微酸性电解水对人员手部冲洗及黄瓜和生菜浸泡法的消毒效果.结果表明,采用有效氯浓度为80 mg/L的微酸性电解水对含有0.3％有机干扰物的大肠杆菌菌悬液,作用1 min,杀灭对数值大于6;对含有0.3％有机干扰物BSA的金黄色葡萄球菌菌悬液,作用2 ...     

细胞培养狂犬病毒悬液的制备

<正> 狂犬病毒属于弹状病毒科,狂犬固定毒是一个实验室毒株,其特点是致病性低,能在幼地鼠肾细胞(BHK-21C13)中迅速繁殖,该细胞主要用于狂犬病毒复制研究和生产兽用疫苗。 对于严重暴露的病人,在疫苗自动免疫力产生之前,在伤口周围注射抗血清作局部被动抗体使用,可以收到良好的效果。但是,由于过多的被动抗体会抑制自动抗体的产生,因此必须调整好疫苗与抗血清的关系。 抗狂犬病血清传统的生产方法,是用狂犬固定毒注入兔脑内,待发病取脑制备悬液,再用于超免马生产抗血清。这种抗血清     

球孢白僵菌分生孢子乳悬剂对甘蓝上桃蚜的田间控制效果

利用液-酵法生产球孢白僵菌(Beauveria bassiana)SG8702菌株的分生孢子粉,配制成含孢量为10^10个.ml^-1的孢子乳悬剂Ⅰ,在此基础上按1％(W／V)的比例舔加10％砒虫琳可湿性扮剂而得孢子乳悬剂Ⅱ．于2001年7月对两种孢子乳悬剂在云南昆明进行了自然条件下甘蓝上桃蚜(Myzus persicae)的田间小区(5．5m×4．8m)药效试验,各3个浓度(含孢量分别为10^7、10^6及10^5个·ml^-1常规喷雾处理,重复设清水喷雾对照,重复3次,随机区组排列．在喷菌后连续28d的田间蚜虫密度定期抽样调查中,乳悬剂Ⅱ的1000倍稀释液喷雾有效抑制了蚜虫数量增长,喷后策7—28天防效始终在90％以上．乳悬剂Ⅰ的相同稀释液喷雾对桃蚜的控制略逊于乳悬剂Ⅱ,但喷后第7天的相对防效也达到85％,此后维持防效70％以上达两周,策24天和28天才分别降至64．4％和52．6％．用含孢量10^6和10^5个·ml^-1的菌液喷雾,乳悬剂Ⅰ仍表现出明显的控蚜效果,而舔加微量砒虫琳的乳悬剂Ⅱ的控蚜效果总是优于同一浓度下的乳悬剂Ⅰ,昆明地区夏季温和而多小雨的气候有利于孢子乳悬剂发挥作用．     

甘油果子冻的制作方法

取10克明胶加热溶解在35ml水、60ml甘油里,纱布过滤。再加3ml石炭酸、数滴(约1ml)龙胆紫染色液.(即将50mg龙胆紫溶于50ml45％的酒精中)最后将     

人轮病毒的细胞培养分离及其血清型的鉴定

<正>本轮报导从73份轮状病毒阳性粪便中,用MA-104细胞或非洲绿猴(AGMK)原代细胞培养方法分离到39株人轮状球毒。用噬斑抑制试验和中和试验法鉴定结果可分为4个血清型,其中3个型别以前已报导过。 病毒分离方法,取10％粪便悬液,先经10μg/ml胰酶处理37℃1小时,接种细胞后吸附37℃1小时,洗一次,加入含0.5μg/ml胰酶的MEM,其中含DEAE-dext-     

小鼠包虫病动物模型的建立

[目的]人工感染法建立包虫病动物模型。[方法]将藏羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液1ml(每ml悬液含4000个原头蚴,青霉素1000U,链霉素1000U)注射于50只(25♂♂25♀♀)4周龄ICR小鼠腹腔内,每周测体重与腰围1次;设空白对照组10只(5♂♂5♀♀)。[结果]接种第20天后,动物体重和腰围均高于空白对照组的各项指标;第90天剖检动物,包囊生成率为96%(48/50),人工感染成功率为96%。[结论]绵羊源性细粒棘球绦虫原头蚴悬液腹腔注射ICR小鼠建立包虫病动物模型的方法可为包虫病的防制研究工作提供简便、可靠和实用的实验动物模型。     

中国人白细胞抗原系统的研究——Ⅱ.343份细胞毒抗血清集群与抗原特异性指定

将343份上海地区经产妇细胞毒抗血清分别与上海地区汉族人99名正常男女O型献血员淋巴细胞悬液作微量淋巴细胞毒试验。应用电子计算机计算每两份血清反应格局间2×2表的相关系数r值。取r≥0.33(P≤0.001)为显著正相关的界限,r≤-0.20(P≤0.05)为显著负相关的界限,据此将反应格局高度正相关的抗血清集群。除去反应     

成纤维细胞对体外培养的骨胳肌细胞早期发育的影响

用无血清、无胚胎提取液的培养液培养由鸡胚腿肌制成的细胞悬液,在排除神经因素的条件下,研究成纤维细胞对体外培养的骨胳肌细胞早期发育的影响。实验组的培养液由2份培养过成纤维细胞的 Eagle's(MEM)液(条件培养液)和1份 Eagle's 液组成。对照组的培养液为 Eagle's 液。细胞悬液被稀释成7种密度(1×10~6—1×10~4细胞/ml)。所得结果如下;(1)成纤维细胞作为支架,肌母细胞在其上面分裂和融合。成纤维细胞的条件培养液维持肌细胞的存活,并促进其发育;(2)肌母细胞的融合与细胞密度有关。实验组肌母细胞融合所需的最低细胞密度是3×10~4细胞/ml,即30个细胞/mm~2,而对照组为3×10~5细胞/ml,即300个细胞/mm~2。实验结果提示,肌细胞早期发育可不依赖于神经因素,它能被胚眙肌肉中的成纤维细胞所促进。     

六味地黄丸水提液对体外培养人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的:研究六味地黄丸水提液体外培养人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法:以体外培养的人牙周膜成纤维细胞为实验基础,六味地黄丸水提液分组:药物浓度为0.001、0.01、0.1、1、10mg/ml,对照组药物浓度为0mg/ml,分别作用1、2、3、4、5天。用MTT法检测六味地黄丸水提液对体外培养人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。结果:六味地黄丸水提液在浓度0.001-0.1mg/ml范围内对人牙周膜细胞增殖有促进作用,而1、10mg/ml时对细胞增殖表现抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:六味地黄丸水提液在一定药物浓度范围内能够促进体外培养人牙周膜成纤维细胞增殖。     

一种自制的水螅麻醉药

水螅标本或装片的制作,通常要用0.1％氯丁醇(chloretone)麻醉,使其自然放松,再行固定。而克罗雷吞药物,广大农村中学很难买到。根据克罗雷吞制造过程,它是在氢氧化钾作用下,不加温冷态混合三氯甲烷及丙酮制成。克罗雷吞分子式为(CH_3)_2c·OH·CCl_3。三氯甲烷分子量为119,丙酮分子量为58。我们用7.6ml(12克)三氯甲烷与8ml(6克)丙酮混和,再加60毫克氢氧化钾混和制备。应用时在10ml清水中加入三滴上述混合液的澄清液,将水螅及附着水草一小片放在器皿中,加上盖,水螅会自然放松,待麻醉后固定     

洗必泰与新洁尔灭的协同杀菌效果

采用悬液定量杀菌试验,以协同系数T/E值作为评价指标,对洗必泰与新洁尔灭的协同杀菌效果进行了实验室研究。发现0.1%洗必泰与0.1%新洁尔灭协同作用2 min,对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌均起到了显著协同杀菌效果。     

狂犬病毒蚀斑方法的建立

我们用CTN-1狂犬病毒二倍作细胞适应株[1]经蚀斑纯化而获得的CTN-2病毒株在BHK-21单层细胞培养建立了狂犬病毒的简易蚀斑技术。用连续10倍稀释的病毒悬液接种BHK-21细胞而产生的蚀斑数呈10倍规律的减少。该蚀斑技术用于蚀斑减少中和试验测定不同国际单位(IU)效价的抗狂犬病血清与原抗血清(IU)效价均高低成正比。用蚀斑中和试验测定了七批我国生产的人用精制抗狂犬病血清的IU效价与原抗血清IU效价的高低是相符的。     

微波辐射取代氧化剂配制苏木素法

传统配制苏木素染液均以火加热,用有剧毒的氧化汞作为氧化剂。常常使液体外溢,氧化程度难以控制,有效使用时间缩短。我们经过多次实验,采用微波辐射代替氧化汞促进氧化苏木素取得了满意的结果,现介绍如下: 染液的配制:甲液:苏木素0.5g,无水酒精5ml;乙液:铵明矾10g,蒸馏水100ml。取乙液经医用微波仪(浙江临安电子器材产品,TWY781型)2档辐射2min,甲液微波5档辐射2min,然后将甲液、乙液混合,4档辐射10～15min,迅速放入冷水中冷却,最后加入2％冰醋酸即可使用。