一株产α-高温淀粉酶的地衣芽孢杆菌的分离和筛选

从西藏当雄温泉附近的土壤中用锥虫蓝平板,55℃培养,筛选到一株分泌高温淀粉酶的菌株,经生理生化初步鉴定后,克隆16s rDNA基因测序,提交GenBank比对后,鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheninformis),命名为B.licheninformis LT.通过对B.licheninformis LT的生长条件和产酶条件的研究表明:该菌高温特性良好,最高可以在65℃生长,产酶最适温度50℃;可以在pH 3.O～pH 11.0的LB培养基中生长,最佳产酶pH 10.0,LB培养基加入淀粉诱导,发酵液酶活可达80 U.对该菌所产α-高温淀粉酶的性质研究表明:酶的最适反应温度为95℃,100℃处理60 min发酵液酶活力没有明显下降,最适酶作用pH 10.0,添加1g/L的钙离子具有激活作用.     

低温淀粉酶菌株C2的分离鉴定及其产低温淀粉酶的酶学性质

获得低温淀粉酶高产菌株,确定该菌株所产淀粉酶的酶学性质.从大黑山(大连)污泥中筛选菌株,通过菌株的形态特征、生理生化和16S rDNA序列鉴定确定其种属,对其酶学性质进行初步研究.获得1株低温淀粉酶高产菌株C2,经鉴定其为微小杆菌属,C2所产低温淀粉酶最适反应温度为25℃,酶的热稳定性比较差,最适pH为7.5,Ca2+和Fe2+对该酶有激活作用,Cu2+、Ni2+、Go2+等抑制酶活性.经薄层层析(TLC)鉴定酶解产物为葡萄糖,说明该菌株具有产生低温淀粉糖化酶的能力.菌株C2所产淀粉酶符合低温淀粉酶性质,值得进一步研究.     

四株冰川雪细菌产酶能力的初步研究

目的:从青藏高原冰川雪中筛选出一菌多酶的菌株.方法:对恢复出的4个细菌,通过平板透明法研究其产淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶的特性.结果:LHG-C-9为惟一可以产淀粉酶的菌株,所产脂肪酶活性最高.4个菌株均不产蛋白酶.结论:LHG-C-9最适生长温度为15℃,属于耐冷菌.对该菌所产淀粉酶和脂肪酶的性质进行了初步研究,其随产淀粉酶的最适作用温度为50℃;最佳产酶pH值为7.0,该pH值所产酶活为83.9U/mL;在60℃的高温下温浴10min后酶活为0%.该菌株所产脂肪酶的最适作用温度为20℃;最佳产酶pH值为7.0,该pH值所产酶活为9.2U/mL;50℃温浴1h后酶活力不足34%.     

一株产高温蛋白酶嗜热菌A-2的筛选鉴定及酶学特性分析

本研究为从云南腾冲热泉中分离纯化得到一株产高温蛋白酶的菌株并对其进行驯化培养,用以探究该菌株的生长条件及酶学特性,通过选择培养基筛选能够分解脱脂奶粉产蛋白酶的菌株,应用常规方法液体培养菌体,探究温度、pH、碳源、氮源对菌株生长情况的影响,并采用福林酚法测蛋白酶活性。并提取蛋白酶液对酶的最适pH、温度以及热稳定性、pH稳定性进行研究。结果发现通过含脱脂奶粉的固体培养基筛选得到一株产蛋白酶菌株A-2,经过生理生化试验和16S rDNA鉴定知该菌种属于Aneurinibacillus属。酵母粉、葡萄糖、55℃、pH值7.5分别为菌株生长的最适氮源、碳源、温度和pH。此外该菌株所产的蛋白酶最适温度为60℃,在pH值7~9具有较好的酶活性。因此,该菌株为嗜热芽孢杆菌,所产的碱性蛋白酶具有较高的耐受温度和pH稳定性,为进一步开发利用提供参考的价值。     

嗜酸青霉酸性木聚糖酶产生特性及部分酶学性质

从煤矿酸性废水中分离到一株产木聚糖酶青霉,通过酸性液体培养研究了菌体生长对pH的响应及木聚糖酶的产生特征,并测定了木聚糖酶的部分应用性质.结果表明:实验菌株嗜酸,菌丝生长最适pH为2.0,孢子萌发生长适宜pH为3.0～4.0;木聚糖诱导菌体在生长稳定期大量产生木聚糖酶,蛋白胨是菌体产酶的适宜氮源;菌株所产木聚糖酶属于酸性木聚糖酶,反应最适pH 3.5、最适温度50 ℃～55 ℃,pH 2.0时酶活达到最高活力的72%,在最适反应条件下保温60 min,残余酶活接近70%,适用于较强酸性的高温加工环境.     

黑曲霉Tx-78耐酸性α-淀粉酶的分离纯化及其性质研究

从酒由中选育得到产耐酸性α-淀粉酶的嗜酸性黑曲霉菌株Tx-78,经酒精沉淀,CM52和DE52纤维素离子交换层析对该酶进行纯化,通过SDS-PAGE检验其纯度并测得其分子量为74 ku.该耐酸性α-淀粉酶具有显著的热稳定性及酸稳定性.其最适反应温度与pH分别为70℃和pH 4.0.当反应温度低于60℃时,该酶在pH 4.0条件下可保持稳定活性达3 h以上.Ca2 、Ba2 对提高酶活力具有明显作用.薄层层析表明该酶制剂水解淀粉最终产物主要为麦芽糖和葡萄糖.     

低温生淀粉糖化酶菌株RS01分离及其酶学性质

自渤海湾海泥中分离得到一株产低温生淀粉糖化酶能力较强的菌株RS01,经形态学、生理生化特性及16S rRNA分析将其鉴定为气单胞菌属。对该菌株产的低温生淀粉糖化酶酶学性质进行初步研究,结果表明其最适酶反应温度为30℃,酶的热稳定性比较差,最适pH为5.4,经TLC鉴定酶解产物中有葡萄糖,表明该分离菌株具有产低温生淀粉糖化酶的能力。     

高活力碱性淀粉酶菌种的选育及培养条件研究

通过对产碱性淀粉酶芽胞杆菌Ｂ－９５４５进行紫外线、原生质体亚硝基胍复合诱变等反复处理,获得一株具有较高碱性淀粉酶活力的变异株ＰＮ－６。产酶活力从５４０ｕ／ｍｌ提高到７８０ｕ／ｍｌ,确定的最佳培养条件是：ｐＨ８－１０,３０℃培养４８ｈ。从变异株和出发菌株的生长及产酶曲线看到,变异株的生长速度低于出发菌株,其产酶高峰与出发菌株相比略拖后一段时间,但是酶活力要远大于出发菌株。     

树状黄杆菌变株U-616葡萄糖异构酶的研究

以树状黄杆菌（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｒａｂｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＮＲＲＬ１１０２２为出发菌株,用紫外线对其进行诱变,经筛选得到一株葡萄糖异构酶的高产菌株Ｕ－６１６,其酶活力提高３１％。经保存三年和多次传代复测,其产酶能力保持稳定。其生长和产酶需较高的溶氧水平,最适产酶温度为３０℃,最适产酶ｐＨ为７．０－７．５,铁离子对其生长和产酶无明显的影响。所产葡萄糖异构酶的最适温度为６０－８０℃,最适ｐＨ为７．５－８．５,Ｃｏ２＋和Ｍｇ２＋对酶有激活作用,对金属离子耐受性较强,对Ｃａ２＋不敏感,热稳定性较好。树状黄杆菌变株Ｕ－６１６是一株产胞内葡萄糖异构酶的优良菌株。     

极区低温海洋细菌及其产酶情况的初步研究

通过对大量极区低温海洋菌株的分离、筛选及进一步的生理生化特性研究,获得1株最适生长温度为15℃、生长温度上限为35℃、产蛋白酶及多种多糖水解酶的耐冷细菌。该菌过氧化氢酶为阳性,具有弱嗜盐性;蔗糖、可溶性淀粉是有利于菌株生长的碳源物质,而酵母膏则是效果最佳的氮源物质。该菌株所产蛋白酶的最适作用温度为55℃,而淀粉酶、琼脂酶及纤维素酶的最适作用温度皆为35℃。     

一株新型产淀粉酶中度嗜热菌的分离鉴定及酶学性质研究

用稀释分离法从广西象州温泉筛选分离到一株可水解淀粉的中度嗜热细菌GXS1,该茵株革兰氏染色为阳性,端生芽孢,细胞呈杆状,最适生长温度为60℃～65℃,最适生长pH为6.0～7.0.结合生理生化特征和16S rDNA序列分析,初步鉴定该茵株为Geobacillus sp.GXS1.对该茵所产高温淀粉酶的性质研究表明:酶的...     

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus A_(236)热稳定葡萄糖淀粉酶的纯化及其特性

嗜热真菌ThermomyceslanuginosusA_236在液体培养基中50℃下静止培养14天,粗提酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl－Toyopearl疏水层析、SephacrylS100凝胶过滤和FPLCMonoQ离子交换层析,得到了凝胶电泳均质的葡萄糖淀粉酶。酶促反应产物经TLC分析为葡萄糖,证明纯化的酶为葡萄糖淀粉酶（EC3．2．1．3）。SDS－PAGE测定其分子量为72,000,不具亚基,PI为4．0,富含Val和Leu。酶反应最适温度和pH分别为70℃和5．0。在pH5．0条件下,酶在60℃保温1h,仍具有原酶活性。酶活性在70℃和80℃的半衰期分别为20min和6min。Ca2+对酶有激活作用,Fe3+、Al3+、Hg2+等金属离子对酶活力有一定的抑制作用。纯酶碳水化合物含量为12．4％。纯酶可水解可溶性淀粉、直链淀粉、支链淀粉、糊精、糖原、麦芽三糖和麦芽糖,其中可溶性淀粉为最适底物。     

Thermal stability of beta-xylanases produced by different Thermomyces lanuginosus strains

The thermostability of beta-xylanases produced by nine thermophilic Thermomyces lanuginosus strains in a coarse corn cob medium was assessed. The xylanase produced by T. lanuginosus strain SSBP retained 100% of its activity after 6 h at temperatures up to 65 degrees C. In comparison seven ATCC strains and the DSM 5826 strain of T. lanuginosus only retained 100% xylanase activity at temperatures up to 60 degrees C. Culture filtrates of T. lanuginosus strain SSBP grown on coarse corn cobs, oatspelts xylan, birchwood xylan, wheatbran, locust beangum, and sugar cane bagasse, retained 100% xylanase activity at temperatures up to 60 degrees C. The xylanase produced on corn cobs was the most thermostable and showed an increase of approximately 6% from 70 degrees C to 80 degrees C. The T(1/2) of all strains at 70 degrees C at pH 6.5 varied greatly from 63 min for strain ATCC 28083 to 340 min for strain SSBP. The xylanase of strain SSBP was much less thermostable at pH 5.0 and pH 12.0 with T(1/2) values of 11.5 min and 15 min, respectively at 70 degrees C. At 50 degrees C, the enzyme of T. lanuginosus strain SSBP produced on coarse corn cobs was stable within the pH range of 5.5-10.0. Furthermore, the enzyme retained total activity at 60 degrees C for over 14 days and at 65 degrees C for over 48 h. The xylanase of T. lanuginosus strain SSBP possesses thermo- and pH stability properties that may be attractive to industrial application.     

海洋菌W11产中温淀粉酶的酶学特性

本研究从威海文登海域筛选获得一株产淀粉酶海洋菌W11,初步鉴定为弧菌,并探讨pH、温度、无机离子对淀粉酶活性和稳定性的影响及该酶底物浓度效应和Km值。结果表明:在pH7.5左右酶活性最高,pH在4.0～7.5范围内体现较强的稳定性。最适酶解温度为55℃,酶液在60℃以下有较好的热稳定性;Ba2+、Mn2+对淀粉酶有激活作用,而Cu2+、Mg2+、Zn2+则抑制淀粉酶活性,表观Km值为0.973mg/mL。海洋菌W11所产的中温淀粉酶保存温度范围较广、适应pH作用的范围广及稳定性较强,将有着广泛的应用潜力。     

Purification and characterization of novel organic-solvent-tolerant β-amylase and serine protease from a newly isolated Salimicrobium halophilum strain LY20

A halophilic isolate Salimicrobium halophilum strain LY20 producing extracellular amylase and protease was isolated from Yuncheng, China. Production of both enzymes was synchronized with bacterial growth and reached a maximum level during the early-stationary phase. The amylase and protease were purified to homogeneity with molecular weights of 81 and 30?kDa, respectively. Optimal amylase activity was observed at 70?°C, pH 10.0% and 10% NaCl. Complete inhibition by EDTA, diethyl pyrocarbonate (DEPC), and phenylarsine oxide (PAO) indicated that the amylase was a metalloenzyme with histidine and cysteine residues essential for its catalysis. Maltose was the main product of starch hydrolysis, indicating an β-amylase activity. The purified protease from LY20 showed highest activity at 80?°C, pH 10.0% and 12.5% NaCl. Complete inhibition was shown by phenylmethylsulfonyl fluoride, DEPC, and PAO, indicating that the enzyme probably belonged to the subclass of the serine proteases with histidine and cysteine residues essential for catalysis. Furthermore, both enzymes were highly stable over broad temperature (30-80?°C), pH (6.0-12.0) and NaCl concentration (2.5-20%) ranges, showing excellent thermostable, alkalistable, and halotolerant nature. The surfactants (SDS, Tween 80, and Triton X-100) did not affect their activities. In addition, both enzymes from LY20 displayed remarkable stability in the presence of water-soluble organic solvents with log P(ow) (?) ≤?-0.24.     

超耐热酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在酵母细胞中的表达

用PCR方法扩增来源于极端嗜热厌氧古菌Pyrococcus furiosus中的超耐热酸性α-淀粉酶的结构基因,将该结构基因引入载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-Amy转化大肠杆菌DH5α细胞,测序结果表明,克隆到的α-淀粉酶结构基因为1305bp,其编码的成熟肽为435个氨基酸。将正确构建的重组质粒转化毕赤酵母GS115细胞,得到酵母工程菌株。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,超耐热酸性α-淀粉酶在甲醇酵母中大量表达并分泌到胞外,该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导,随着诱导培养时间的增加,在培养基上清液中的单位体积酶活力相应上升,在诱导培养7d后酶活力达到最大值。该酶最适反应温度为90~100℃,最适反应pH值为4.5~5.5。该酶具有非常好的温度稳定性,在100℃条件下热处理5h,仍具有60%以上的酶活力。该酶的这些优点使其非常适于在工业生产上应用。     

嗜热子囊菌原变种Thermoascus aurantiacus var.aurantiacus热稳定几丁质酶的克隆表达及活性研究

研究通过RT-PCR和Tail-PCR技术从嗜热子囊菌原变种Thermoascus aurantiacus var.aurantiacus中克隆了一个几丁质酶同源基因。该基因全长1,253bp,包含一个由1,197个碱基构成的开放阅读框,编码398个氨基酸。序列比对分析表明,该基因编码蛋白属于糖苷水解酶18家族的几丁质酶。利用基因重组的方法构建酵母分泌型表达载体,并转化毕赤酵母。在甲醇的诱导下,重组蛋白得到了高效表达,第6天的表达量最高,达到0.433g/L,酶活力为28.96U/mg,同时对表达的几丁质酶进行了纯化,SDS-PAGE检测该蛋白的分子量为43.9kDa。该几丁质酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH值为8.0,70℃处理30min仍有45%的相对酶活,具有较好的热稳定性及工业应用价值。     

一株耐热脂肪酶产生菌的筛选及酶学性质研究

从云南省富油地采取了60份土样中,利用透明圈法筛选出一株耐热脂肪酶产生菌。对其酶学性质和发酵条件进行了研究,酶学性质表明,该酶最适作用温度为50℃,最适pH6.0,在pH3.0-8.0范围内稳定,在60℃保温60 min酶活还保留70%;70℃保温60 min残余50%;具有良好的热稳定性;不同金属离子有不同的作用,Ca+,K+对酶有激活作用,Fe3+、Pb2+、Mn2、Cu2+、Al3+、Zn2+对酶活有抑制作用。EDTA对酶影响不大。产酶最佳条件为:MgSO4.7H2O 0.05 g,K2HPO40.1 g,CaCO30.25 g,可溶性淀粉2.5 g,大豆粉2.5 g,装液量50 mL。这株细菌通过培养基优化酶活达到20.3 U/mL。     

一株产耐高温DNA 酶和蛋白水解酶的沙雷氏菌FS14 (Serratia sp. FS14) 的分离与鉴定

通过组织分离法从白术病害样品的茎秆部位分离到一株产红色色素的细菌FS14,参照《伯杰氏细菌鉴定手册》,根据其形态学特征、生理生化特性,同时结合16S rDNA序列分析结果,发现该菌属于沙雷氏菌属。研究还发现,从白术茎秆中分离到的这株中温型沙雷氏菌FS14能分泌耐高温的DNA酶和蛋白水解酶,甚至在100 oC预处理30 min后仍有活性。沙雷氏菌能分泌耐高温的DNA酶和蛋白水解酶还未见报道。     

1株产淀粉酶嗜盐细菌X50的分类鉴定及其粗酶活特性研究

从运城盐湖分离获得一株可产淀粉酶的嗜盐细菌菌株X50,对其进行分类鉴定及酶学特性分析。采用底物平板法进行菌株X50产胞外淀粉酶活性检测。通过16S rRNA基因序列分析对其进行分类鉴定。研究不同因素对菌株X50所产淀粉酶活性的影响。16S rRNA基因序列分析结果表明,该菌为Thalassobacillus属成员,命名为Thalassobacillus sp.X50。对其所产淀粉酶酶特性进行了初步研究,结果发现该酶最适pH值为6.0,在较宽pH范围内(4.0~12.0)可保持高活力,具有较强的耐酸碱能力。无盐条件下,酶活性最强,且该酶具有良好的耐热性,高温处理后仍可保持较高活性。除Mg2+对酶的抑制作用较为显著外,其他金属离子基本无影响。PMSF可明显抑制该酶活性,而DEPC和EDTA作用不明显,表明该酶活性中心不含金属离子,可能为丝氨酸蛋白酶。本文的研究结果将为促进运城盐湖极端微生物资源的开发利用提供参考。