2010年上海市食源性沙门菌菌型分布和药敏分析以及快速检测方法的建立

目的：通过对2010年上海市市售食品中食源性沙门菌污染状况、菌型分布及药敏试验进行分析,初步确定该地区食源性沙门菌的菌型分布及耐药性,为防治因沙门菌感染引起的食源性疾病提供科学依据,并摸索建立了针对沙门菌的快速检测方法。方法：对农贸市场和超市的5类840份市售食品进行沙门菌分离鉴定及耐药性分析,并根据沙门菌的侵袭蛋白A（invA）基因序列设计保守引物,特异性快速检测沙门菌。结果：本次市售食品沙门菌阳性率检出率为4．29％,共36株沙门菌,生禽畜肉所占比例高达91％。主要血型为鼠伤寒沙门菌,德尔卑沙门菌和都柏林沙门菌。36株沙门菌药敏分析显示：所有菌株对头孢类等抗生紊敏感较高,但对氨苄西林、麦迪霉素、环丙沙辛、呋喃妥因等存在普遍较多耐药菌株,并在此基础上通过PCR法成功地特异性检测出沙门菌。结论：上海市市售食品沙门菌污染以生禽畜肉为主,对抗菌药物的耐药性较高。目前治疗市售食品中食源性沙门菌引起的食源性疾病应首选头孢内等抗生素。另外PCR快速检测方法也操作简单,特异性强,灵敏度高,对食品中沙门菌污染能起到快速检测和监控     

PCR法快速检测肉食品污染沙门菌的实验研究

沙门菌属是引起食源性疾病的重要致病菌之一。传统的检测方法费时、费力,研究建立了检测肉食品中沙门菌的PCR检测方法。根据沙门菌侵袭基因invA设计一对引物,对肉食品中沙门菌基因组DNA进行PCR扩增,建立了沙门菌特异、敏感和快速的PCR检测方法,为食源性致病菌的检测提供参照,在食品检测领域中有良好的应用前景。     

辽宁食源性沙门菌血清型、耐药谱及PFGE分型特征

目的 分析辽宁食源性沙门菌血清型、耐药谱及脉冲场凝胶电泳（PFGE）型别,探讨辽宁沙门菌污染的同源性,为食源性疾病溯源和预警提供基础。方法 对辽宁省2015年食品中、食源性疾病中分离的41株沙门菌进行血清学分型、耐药试验、PFGE分子分型,采用BioNumerics version 6.6软件分析,比较同源性。结果 41株菌分为15个血清型,居前三位的是15株肠炎沙门菌、5株德尔卑沙门菌、5株姆班达卡沙门菌（辽宁省内少见血清型）;对41株菌进行15种抗生素的耐药试验,对单一一种抗生素的耐药率为100.0%,其中红霉素97.6%,萘啶酸61.0%,氨苄西林53.7%;41株菌共分为18种PFGE带型,带型分布分散,只有两种优势,一种带型包含20株菌,有14株肠炎沙门菌,6株其他沙门菌,相似度为92.7％~100％;另一种包含5株菌,4株姆班达卡沙门菌,1株鼠伤寒沙门菌,相似度为96.6％~100.0％。结论 辽宁省食源性沙门菌的血清型以肠炎沙门菌为主,生肉制品是其主要污染来源;血清型与PFGE图谱带型分布广泛,相同血清型沙门菌的PFGE带型聚集成簇、菌株具有高度同源性;相同PFGE型别的菌株耐药谱一致或相似;沙门菌的耐药情况较严重。     

辽宁省耐药沙门菌PFGE分子分型研究

目的对辽宁省2011-2012年间鸡肉中检测出的沙门菌进行耐药谱分析和PFGE分子分型分析,为沙门菌的监测、暴发预警提供依据。方法 Phoenix-100全自动微生物鉴定/药敏系统做耐药性分析;PFGE分型依据国际实验室分子分型监测网络PulseNet中沙门菌PFGE分型标准化方案进行。结果鸡肉中38株沙门菌均多重耐药,PFGE指纹图谱与血清具有一定的相关性,相同血清型的菌株聚类后,都能分到同一群。结论同一地区的沙门菌具有很高的相似带型,为以实验室为基础的食源性疾病暴发的发现及疫情控制提供依据。     

基于PCR-免疫试纸条法的空肠弯曲菌快速检测

空肠弯曲菌引起的食源性腹泻疾病已经成为突出的公共卫生问题之一，快速检测食品中空肠弯曲菌污染对于保障人类健康具有重要意义。本研究以空肠弯曲菌lpxA基因序列为检测靶基因，通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增产物上标记的地高辛和异硫氰酸盐(isothiocyanate,ITC)分子与试纸条上抗体特异性结合，建立了一种PCR-试纸条检测方法。所有空肠弯曲菌标准菌株均为阳性结果，其他弯曲菌以及食源性病原菌均为阴性结果，检测特异性为100%；最低检出限为3.1×10³CFU/mL；在对食品的实际检测中，该方法与现有国标检测方法结果一致。将本方法用于空肠弯曲菌的检测降低了成本，简化了操作步骤，为食源性空肠弯曲菌检测提供了一种实用、简便的手段。     

禽大肠杆菌、肠炎、鼠伤寒、鸡白痢及鸡伤寒沙门菌多重PCR方法的建立及应用

【背景】大肠杆菌病和沙门菌病是最常见的家禽细菌性疾病,给养禽业造成严重经济损失。另外,禽大肠杆菌和沙门菌也是重要的人畜共患病原菌,可通过禽类及其产品传播给人类,对人类健康造成严重威胁。加强禽大肠杆菌和沙门菌的快速鉴别检测,对养禽业和公共卫生都具有重要意义。【目的】建立禽大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的多重PCR检测方法。【方法】通过比较分析确定禽致病性大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的特异靶标基因,设计5对特异性引物,通过条件优化建立多重PCR方法,分析该多重PCR方法的特异性、敏感性及可靠性。【结果】该方法能特异性地鉴定禽致病性大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌,每个PCR反应的最低检出限分别为103 CFU细菌和100 pg基因组DNA。临床分离菌株检测显示,多重PCR与传统血清学方法结果一致。【结论】建立的多重PCR方法能够快速鉴别禽致病性大肠杆菌和不同血清型沙门菌,对禽大肠杆菌病和沙门菌病的流行病学调查及临床检测具有重要意义。     

沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌多重PCR检测方法的研究

建立快速检测沙门菌、志贺菌和副溶血性弧菌的多重PCR方法[1-4].根据沙门菌hilA基因、志贺菌ipaH基因及副溶血性弧菌TDH基因设计特异性PCR引物[5-6],被检样品经4 h振荡培养后金属浴裂解制备DNA模板,使用全自动毛细管电泳核酸检测系统分析PCR扩增产物.在580、423和245 bp处分别出现预期的特异性DNA条带,且无非特异扩增条带出现.敏感性试验显示沙门菌在模拟标本中的检测灵敏度为101-2cfu/mL、志贺菌为101cfu/mL、副溶血性弧菌为102cfu/mL.该方法操作方便、分析时间短、特异性和灵敏度高,可用于公共卫生突发事件食源性病原菌的快速检测.     

通化市食源性患者粪便中致病菌检测及耐药性

目的通过对食源性疾病病例监测为食源性疾病诊断提供病原学确证,进一步探讨食源性疾病的治疗、预防和控制措施。方法按照国标方法进行几种致病菌的分离鉴定,按照CLSI 2010进行药敏试验操作及结果判定。结果 200份样品中共检出48株致病菌,检出率为24.00%。其中致泻性大肠埃希菌37株,沙门菌6株,副溶血性弧菌3株,志贺菌2株。分离出的志贺菌和副溶血性弧菌对13种抗生素全部敏感,分离出的沙门菌仅对四环素存在耐药性;分离出的大肠埃希菌中,有19株对13种抗生素均敏感,18株对8种抗生素具有一定的耐药性,产生10种耐药谱。结论通化市人民医院的食源性疾病患者粪便标本中致泻性大肠埃希菌检出率最高,其次为沙门菌,且两者均存在耐药株,应引起相关部门重视。     

鸡胴体中沙门菌的定量检测及风险评估

目的通过鸡胴体中沙门菌的定量检测,了解长春市市售鸡胴体中沙门菌的污染状况,为沙门菌的定量检测评估提供依据。方法前增菌:鸡胴体缓冲蛋白胨水淋洗后培养;增菌:TT肉汤和RV肉汤;分离:接种XLT4培养基;鉴定:API20E和沙门多价血清。结果沙门菌全年都有检出,阳性率15%~100%不等。7月份阳性率最高为100%;其次8月份为90%;6月份为80%。冷藏储存条件下鸡胴体样品中沙门菌的检出率及其含菌量均高于冷冻条件下。农贸市场鸡胴体样品中沙门菌的检出率及其含菌量均高于大型超市。要加强市售鸡胴体中各环节中沙门菌污染的监管。结论长春市市售鸡胴体中沙门菌的污染率为64.6%(155/240)。冷藏储存条件下鸡胴体样品中沙门菌的检出率及其含菌量均高于冷冻条件下。农贸市场鸡胴体样品中沙门菌的检出率及其含菌量均高于大型超市。要加强市售鸡胴体中各环节中沙门菌污染的监管。     

致病性大肠埃希菌和沙门菌毒力岛基因的双重PCR检测方法的建立

目的实现对致病性大肠埃希菌（E．coli）、沙门菌（Salmonella）的同时检测,建立快速灵敏的双重PCR检测方法。方法以致病性大肠埃希菌和沙门菌毒力岛基因为研究对象,根据GenBank发表的大肠埃希菌和沙门菌毒力岛基因序列,分别设计合成了大肠埃希菌毒力岛irpl、irl）2和fyuA,沙门菌毒力岛mgtC、sseL和sopB等6对引物,以禽致病性大肠埃希菌（CVCC1565）菌株和沙门菌（ATCC9150）菌株的核酸混合物为模板,经引物特异性试验,引物组合,成功建立了快速鉴别检测致病性大肠埃希菌和沙门菌的双重PCR方法。结果特异性试验结果显示,引物irpl、irp2和fyuA仅能扩增出大肠埃希菌（CVCC1565）的特异性片段,大小分别是799、414和948bp;引物mgtC、sseL和sopB仅能扩增出沙门菌（ATCC9150）的特异性片段,大小分别是500、269和1000bp。敏感性试验结果表明大肠埃希菌和沙门菌的最低检测限分别为2．2×101CFU／mL和2．0×101CFU／mL。结论本研究建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于致病性大肠埃希菌和沙门菌的联合检测与鉴别诊断。     

2018-2022年佛山地区小儿沙门氏菌感染的临床特征和耐药性分析

摘要 目的：分析2018-2022年佛山地区小儿沙门氏菌感染的临床特征和耐药性,为小儿沙门氏菌感染的临床防治提供依据。方法：对2018年1月1日至2022年12月31日期间佛山市妇幼保健院收集的小儿沙门氏菌感染病例186例进行回顾性分析,分析患儿一般资料、小儿沙门氏菌感染的时间分布特征、临床特征、血清型分布及耐药性。结果：186例小儿沙门氏菌感染患儿年龄分布,1~3岁构成比最高,占37.63%,>6岁构成比最低,占1.61%。2018年发病33例,2019年发病19例,2020年发病39例,2021年发病44例,2022年发病51例,沙门氏菌感染病例数总体呈现上升趋势;一年四季均有沙门氏菌感染病例,夏秋两季发病率最高,分别占43.55%、30.11%。发热、腹泻、解粘液便为主要症状,分别占90.32%、74.73%和63.98%。血清型B群最高,为118例,占63.44%。通过对分离出的191株沙门氏菌药物敏感性试验分析,只有3株（1.57%）对所检测抗菌药物均不耐药,耐3类或3类以上的多重耐药沙门氏菌有157株（82.20%）,庆大霉素、头孢唑啉、头孢替坦耐药率均为100%。不同年份沙门氏菌对左氧氟沙星、环丙沙星、四环素的耐药率差异有统计学意义（P<0.05）。结论：近年来佛山地区小儿沙门氏菌感染呈上升趋势,1~3岁儿童是主要群体,夏季和秋季是发病的高峰季节,主要血清型是B群,儿童感染后以发热、腹泻、解粘液便为主要症状,沙门氏菌的耐药性较为严重,应引起相关部门重视。     

食源性相关腹泻肠炎沙门菌感染抗菌药物敏感性

目的 了解食源性相关腹泻非伤寒沙门菌感染的菌种分布及其对抗菌药物敏感性,为控制该类细菌的感染及传播提供技术支持。方法 对2015‒2017年本系统2家社区卫生服务中心就诊的食源性相关腹泻患者粪便（或肛拭子）标本采用直接分离与增菌分离相结合的方法常规培养分离获得42株沙门菌;采用血清凝集法进行快速血清分型,并自动化生化鉴定及抗菌药物敏感性试验;通过现况调查进行流行病学危险因素分析。结果 自动化生化鉴定结果能够覆盖常规血清学快速鉴定结果,同属沙门菌群;42株沙门菌以肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌和斯坦利沙门菌为主,其中肠炎沙门菌占全部菌株的23.81%,鼠伤寒沙门菌占19.06%,斯坦利沙门菌占14.29%;其中肠炎沙门菌可对氟喹诺酮类、三四代头孢菌素类与碳青霉烯类等敏感（敏感率可达97.00%以上）,而对氨基糖苷类可产生双向耐药。通过现况调查,发现患者有腹痛、腹泻等胃肠道症状,可伴有发热,所有患者48 h内有可疑食物暴露史,无水源性案例,均为散发。结论 菌种鉴定应以常规快速血清学凝集结果为准,自动化生化鉴定仅供参考,并将鉴定菌种与药敏报告相关联,可根据药敏结果合理选用敏感抗菌药物;应对社区居民开展针对性的健康宣教。     

Microarray analysis of antimicrobial resistance genes in Salmonella enterica from preharvest poultry environment

Aims:  To detect antimicrobial resistance genes in Salmonella isolates from turkey flocks using the microarray technology.
Methods and Results:  A 775 gene probe oligonucleotide microarray was used to detect antimicrobial resistance genes in 34 isolates. All tetracycline-resistant Salmonella harboured tet(A) , tet(C) or tet(R) , with the exception of one Salmonella serotype Heidelberg isolate. The sul1 gene was detected in 11 of 16 sulfisoxazole-resistant isolates. The aadA , aadA1 , aadA2 , strA or strB genes were found in aminoglycoside-resistant isolates of Salm. Heidelberg, Salmonella serotype Senftenberg and untypeable Salmonella . The prevalence of mobile genetic elements, such as class I integron and transposon genes, in drug-resistant Salmonella isolates suggested that these elements may contribute to the dissemination of antimicrobial resistance genes in the preharvest poultry environment. Hierarchical clustering analysis demonstrated a close relationship between drug-resistant phenotypes and the corresponding antimicrobial resistance gene profiles.
Conclusions:  Salmonella serotypes isolated from the poultry environment carry multiple genes that can render them resistant to several antimicrobials used in poultry and humans.
Significance and Impact of the Study:  Multiple antimicrobial resistance genes in environmental Salmonella isolates could be identified efficiently by microarray analysis. Hierarchical clustering analysis of the data was also found to be a useful tool for analysing emerging patterns of drug resistance.     

Epidemiological analysis of Salmonella enterica ssp. enterica serovars Hadar, Brancaster and Enteritidis from humans and broiler chickens in Senegal using pulsed-field gel electrophoresis and antibiotic susceptibility

AIMS: Salmonella Hadar, Salmonella Brancaster and Salmonella Enteritidis are the main Salmonella enterica ssp. enterica serovars isolated from poultry in Senegal. Our objective was to analyse the pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and antibioresistance patterns of strains belonging to these serovars and to assess the significance of broiler-chicken meat as a source of human infection. METHODS AND RESULTS: A total of 142 Salmonella isolates were analysed: 79 were isolated from Senegalese patients with sporadic diarrhoea (11 S. Hadar, nine S. Brancaster and 59 S. Enteritidis) and 63 from poultry (30 S. Hadar, 17 S. Brancaster and 16 S. Enteritidis). The PFGE of XbaI- and SpeI-digested chromosomal DNA gave 20 distinct profiles for S. Hadar, nine for S. Brancaster and 22 for S. Enteritidis. Each serovar was characterized by a major pulsotype which was X3S1 in 42% of S. Hadar, X8S1 in 53.8% of S. Brancaster and X1S2 in 43% of S. Enteritidis isolates. Human and poultry isolates of Salmonella had common PFGE patterns. Antibiosensitivity tests showed multiresistance (more than two drugs) was encountered in 14.5% of S. Hadar and in 5% of S. Enteritidis isolates. Resistance to quinolones was considered to be of particular importance and 14.5% of S. Hadar isolates were found to be resistant to nalidixic acid. CONLCUSIONS: The sharing of similar PFGE profiles among isolates from humans and poultry provided indirect evidence of Salmonella transmission from contaminated broiler meat. But most of the Salmonella isolates remained drug sensitive. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: Efforts are needed to eliminate Salmonella from poultry meat intended for human consumption. This study has also highlighted the importance of continuous surveillance to monitor antimicrobial resistance in bacteria associated with animals and humans.     

2018年辽宁省沙门菌血清型、 分子分型及耐药性

目的 分析辽宁省2018年沙门菌血清型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)及耐药特征。 方法 对2018年辽宁省分离到的35株沙门菌菌株进行鉴定后,采用脉冲场凝胶电泳及药物敏感试验对沙门菌进行分子分型及耐药性分析。 结果 经鉴定35株沙门菌分布于13种血清型,数量居前3位的血清型为肠炎沙门菌(37.14%)、鼠伤寒沙门菌(14.28%)和婴儿沙门菌(11.42%)。所有沙门菌菌株对萘啶酸和四环素耐药率较高,达到42.86%和34.28%,对头孢西丁和亚胺培南表现为不敏感。某些菌存在多重耐药性。 结论 2018年辽宁省沙门菌的耐药情况较为严重,血清型分布广泛,以肠炎沙门菌为主,绝大多数相同血清型的菌株与其PFGE条带聚集存在相关性。     

2016-2019年辽宁省肠炎沙门菌分离株分子分型及其耐药性

目的 分析辽宁省肠炎沙门菌分离株的分子分型特征及耐药情况,为辽宁省肠炎沙门菌的分子流行病学及防控措施提供参考依据。 方法 采用PFGE分子分型方法对辽宁省2016-2019年肠炎沙门菌分离株进行分子分型,应用BioNumerics 7.6软件对酶切片段进行聚类分析,明确菌株的特征及同源性;采用最低抑菌浓度(MIC)法测定菌株对14种药物敏感性。 结果 共获得49株肠炎沙门菌,分子分型结果证明其呈17种PFGE带型,相似度区间为77.4%～100.0%,有2种优势带型;对萘啶酸的耐药率最高,达89.80%,其次氨苄西林的耐药率为69.39%,对3种以上抗生素的耐药率为55.10%。 结论 辽宁省肠炎沙门菌PFGE分子分型具有独特的优势带型,存在带型较多的特点;肠炎沙门菌分离株多重耐药状况比较严重,对萘啶酸的耐药率最高。