重组家蚕病毒表达系统转移载体的构建和β─半乳糖苷酶的表达

本文从中国农科院蚕业研究所提供的我国家蚕核多角体病毒镇江株中获得了多角体蛋白的强启动子,用此启动子构建了家蚕病毒表达系统的转移载体。外源基因能在此启动子控制下在家蚕细胞和虫体中进行高效表达。用此载体我们首先成功地在家蚕虫体中高效表达了β－半乳糖苷酶,表达量达到５８０μｇ／条蚕,从而证实我们构建的载体是可靠的、有效的,可用于家蚕重组病毒表达外源基因的研究。     

重组家蚕病毒表达系统转移载体的构建和β—半乳糖苷酶的表达

本文从中国农科院蚕业研究所提供的我国家蚕核多角体病毒镇江株中获得了多角体蛋白的强启动子,用此启动子构建了家蚕病毒表达系统的转移载体。外源基因能在此启动了控制下在家蚕细胞和虫体中进行高效表达。用此载体我们首先成功地在家蚕虫体中高效表达了β－半乳糖苷酶,表达量达到５８０μｇ／条蚕,从而证实我们构建的载体是可靠的,有效的,可用于家蚕重组病毒表达外源基因的研究。     

应用抗体捕捉聚合酶链反应(AC/PCR)检测贝类甲型肝炎病毒污染

污染水体中生长的贝类是传播甲型肝炎的重要途径之一。本文介绍了一种抗体捕捉后进行ＰＣＲ扩增来检测贝肉中甲肝病毒（ｈｕｍａｎｈｅｐａｔｉｔｉｓＡｖｉｒｕｓ,ＨＡＶ）的方法。贝肉中ＨＡＶ的浓集回收采用洗脱一沉淀法井加以改进,用脊髓灰质炎病毒作为指示病毒,经二次沉淀后病毒的回收经率为２６％,３０克贝肉中的病毒浓集回收在１．０～１．５ｍｌ上清液中。此方法计算检测限＜３０－３００ＨＡＶ／３ｇ贝肉。从１４份大连海域标本中,用该法检测出阳性标本７份,阳性率为５０％。此浓集病毒的方法还可应用于检测贝肉中污染的脊髓灰质炎病毒、诺瓦克病毒、轮状病毒等其它病毒。     

《细胞》：病毒在微型马达帮助下自我组装

就像微型机械修理店一样,一些病毒也能在微型马达帮助下实现自我组装。如今,科学家已经弄清楚病毒中自然分子马达的结构和工作原理。此发现将导致产生新的用药办法来对抗疾病,如由病毒引起的疱疹,因为这种致病病毒具有类似的分子马达。此研究详细内容发表在08年12月26日出版的《细胞》杂志上。此发现暗示将有新办法对抗危险的微生物。     

引发“SARS”的病原体

引发“SARS”的病原体是病毒家族中一种新的冠状病毒 (Coronavirus)变种。冠状病毒因在电子显微镜下呈球形 ,上有突起 ,形状像皇冠而得名 ,列为冠状病毒科 (Soronaviridae)。这一科病毒直径 75～ 160nm ,中央是不同密度的无定形物质 ,外有脂质包膜 ,膜上排列间隔较宽的突起 ,其形状随不同病毒而呈现不同形状 ,如圆端花瓣形、圆锥形、T形等。病毒基因组为连续线形单链RNA ,分子量通常为 5 5× 10 6 ～ 6 1× 10 6 。病毒在寄主细胞质中复制 ,通过其内质网膜出芽成熟。通过组织或器官培养可分离、培养此病毒。此科包括人冠状病毒、禽传染…     

杆状病毒包埋型病毒粒子研究进展

杆状病毒是一类专一性感染节肢动物的病原微生物,在其生活周期中产生两种不同形态的病毒粒子,即芽生型病毒粒子和包埋型病毒粒子。自然界中,杆状病毒通过经口感染的方式在其宿主的中肠中建立原发性感染,杆状病毒的包埋型病毒粒子在此过程中发挥关键作用。本文回顾了杆状病毒的基本特性,阐述杆状病毒包埋型病毒粒子的蛋白组成及分类,并着重介绍多粒包埋型病毒粒子的进化及在杆状病毒经口感染过程建立中的意义,对进一步了解杆状病毒的进化历程和侵染机制具有重要的指导意义。     

普利昂蛋白质

目前生物——医学界对感染性微生物分类学是根据其形态、组成成分及生理特性进行认识的;最小的是介于生命与非生命之间的病毒。病毒虽然由核酸组成,但由于缺乏酶,故本身不能代谢;只能在进入活细胞后,引起宿主的代谢途径的改变才能导致病毒核酸和病毒蛋白的生成。细胞被病毒控制而以产生病毒成分来代替产生细胞成分,并在此过程中提供复制病毒的材料和能源,核酸则是关键所在。因此,有人说“核酸是生命俱乐部的创始人”。     

牛泡沫病毒（BSV）3026毒株的分离及分子生物学鉴定

从一头牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）检测阳性３０２６号牛外周血中,分离到一株病毒,即３０２６病毒株。体外细胞增减和反转录分析证明,此病毒是一反转录病毒。可胎牛肺细胞中引起典型的泡沫样病变,形成合胞体,ＰＣＲ扩增和Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交显示,此病毒的ＣＤＮＡ和ＰＣＲ产的均可与牛泡沫病毒（ＢＳＶ）阳性对照的ＨｉｒｔＤＮＡ杂交。３‘ＬＴＲ上游一段３３０ｂｐ的ＰＣＲ产物序理分析表明,３０２６毒株与ＢＳＶ阳性对照相比     

直接转基因技术应用于神经系统基因治疗的研究进展

神经系统疾病的基因治疗是目前神经科学中发展比较迅速的一个领域,近年来研究发现,一此来源于单纯疱疹病毒,腺病毒和腺病毒相关病毒等的重组病毒表达载体能够将外源基因直接导入在体或离体培养的神经细胞。     

甘蔗花叶病毒CP基因的高效表达和抗血清制备

将甘蔗花叶病毒的CP基因克隆到表达载体pET22b( ),并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,表达蛋白约占总蛋白的15％。用此蛋白制备了效价高专化性强的抗体。此方法可以解决制备马铃薯Y病毒属病毒的血清时遇到的病毒提纯产量低和寄主蛋白影响等问题。     

替换HIV-1衣壳蛋白基因SHIV的构建及其活性测定

将猴免疫缺陷病毒(Simianimmunodeficiencyvirus,SIVmm239)中gag基因的衣壳蛋白部分置换成人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirustype1,HIV-1HXBc2)的相应部分,构建出替换了衣壳蛋白基因的人/猿嵌合免疫缺陷病毒(SHIV)原病毒DNA。用此SHIV原病毒DNA转染293T细胞,细胞中能够检测到嵌合病毒基因的转录与翻译;在细胞培养液上清中亦可检测到装配出的病毒颗粒。病毒颗粒形态正常,含有基因组RNA,具有反转录酶活性,嵌合的外源衣壳蛋白能够正确剪切,形成棒状的核心。将此嵌合SHIV病毒感染MT4细胞,病毒能够吸附并进入细胞,能完成反转录过程,但不能增殖。     

逆转录病毒基因组RNA的二聚作用

逆转录病毒科(Retroviridae)是一成员众多、易变异的RNA病毒科.在逆转录病毒复制周期内,所有逆转录病毒均将两拷贝的单股正链RNA带入病毒粒子[1,2].在此过程中,遗传物质--基因组RNA能顺利包装入病毒粒子是病毒复制与繁衍的关键,而基因组RNA通过二聚作用(Dimer-ization)形成二聚体(Dimer)是包装逆转录病毒的前提.     

鹅源新城疫病毒ZJ1株微型基因组的构建及其初步应用

在获得鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组序列的基础上,用增强型绿色荧光蛋白（eGFP）报告基因取代鹅源新城疫病毒ZJ1株整个编码区,只保留与病毒复制、转录和病毒粒子包装相关的调控序列,将其反向克隆入转录载体TVT7R(0.0)中,构建了该毒株的微型基因组。当转染用辅助病毒ZJ1株感染的Hep_2细胞时报告基因得到表达,表明此微型 基因组RNA可被辅助病毒提供的NP、P和L蛋白翻译。同时将该病毒NP、P和L蛋白基因分别克隆入真核表达载体pCI_neo中,构建了表达该病毒NP、P与L蛋白的辅助质粒,用此微型基因组对辅助质粒的表达产物进行了功能鉴定并对该病毒拯救过程中痘苗病毒的最适感染剂量进行了摸索。以上研究为该病毒的成功拯救及开展其它相关研究奠定了基础。     

一种筛选对虾白斑综合症病毒中和抗体的新方法

用对虾淋巴组织的原代培养细胞与对虾白斑综合症病毒进行相互作用,洗去不能结合的病毒,然后用甲醛固定,再用ELISA法检测所吸附的病毒。当病毒与抗血清保温后,抑制病毒与细胞的吸附能力的抗血清中应含有中和抗体。此方法可以在缺少细胞的情况下,简便地筛选到中和抗体。     

应用免疫胶体金技术定位感病大麦细胞中的大麦和性花叶病毒

本文报道免疫胶体金标记技术的建立,并用此技术定位大麦叶和根组织超薄切片中大麦和性花叶病毒(BaMMV)。在感染病毒的大麦叶和根细胞中,病毒束、游离病毒颗粒和病毒外壳蛋白多分布于细胞质丰富的细胞中,且以液泡和叶绿体(仅叶组织)周围较多。在细胞器已解体的病根表皮细胞中,有时也可检测到大量游离病毒粒子。少数风轮体或板状集结体上也存在病毒或病毒外壳蛋白。细胞核、叶绿体、线粒体、细胞膜以及其他细胞器上都未见有特异性金颗粒标记。     

替换HIV-1衣壳蛋白基因SHIV的构建及其活性测定

将猴免疫缺陷病毒(Simian immunodeficiency virus,SIVmm239)中gag基因的衣壳蛋白部分置换成人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus type1,HIV-1 HXBc2)的相应部分,构建出替换了衣壳蛋白基因的人/猿嵌合免疫缺陷病毒(SHIV)原病毒DNA.用此SHIV原病毒DNA转染293T细胞,细胞中能够检测到嵌合病毒基因的转录与翻译;在细胞培养液上清中亦可检测到装配出的病毒颗粒.病毒颗粒形态正常,含有基因组RNA,具有反转录酶活性,嵌合的外源衣壳蛋白能够正确剪切,形成棒状的核心.将此嵌合SHIV病毒感染MT4细胞,病毒能够吸附并进入细胞,能完成反转录过程,但不能增殖.     

Sindbis病毒蚀斑方法的建立及其在血液制品病毒灭活实验？…

实验建立了Ｓｉｎｄｂｉｓ病毒在ＢＨＫ－２１细胞内蚀斑形成的方法,Ｓｉｎｄｂｉｓ病毒接种于ＢＨＫ－２１细胞内,３天半染色,结果显示蚀斑清晰可见,直径为２－４ｍｍ,病毒滴度已达高峰期,同时将此方法用于血液制品病毒灭活实验中,结果表明该方法准确、客观,Ｓｉｎｄｂｉｓ病毒在Ｓ／Ｄ低ｐＨ孵放法等灭活病毒实验中作为有脂质包膜类病毒的指示病毒具有相对稳定性,较为适宜并且能客观的体现出各种灭活方法灭活病毒的作用。     

病毒感染调控JAK/STAT信号通路：逃避与利用

JAK/STAT信号通路是天然免疫过程中一条关键通路，参与了干扰素信号传递入细胞核的过程。研究表明，病毒通过逃避甚至利用JAK/STAT信号通路，对抗干扰素系统的抗病毒效果。在此过程中，调控干扰素受体蛋白、减少JAK和STAT蛋白的数量、阻碍STAT的磷酸化或核易位，又或是上调SOCS家族蛋白都是病毒常用的手段。本文重点介绍了病毒调控JAK/STAT信号通路的过程，为病毒致病机理的研究和抗病毒药物的设计提供了理论基础。     

芝麻花叶病的病毒病原鉴定

从患芝麻花叶病的病叶中提纯了一种线条状病毒颗粒,长700～800nm,宽13nm。经汁液摩擦接种可感染心叶烟、大豆,甜菜等9种植物,不感染西瓜,苋色藜、豇豆等。主要传毒介体是发生在芝麻田的桃蚜。病土、病种均不传病。该病毒与西瓜花叶病毒、芜菁花叶病毒及马铃薯Y病毒的抗血清无反应。超薄切片中可见到风轮形和纸卷形的圆柱状内含体以及结晶状内含体。结晶状内含体分布在细胞质和叶绿体中,其它内含体均见于细胞质中。同时,细胞质中还可见到大量聚集的线状病毒颗粒。初步认为此病毒可能是马铃薯Y病毒群中的一个新成员,暂称为芝麻花叶病毒。国内外均未见报道。     

国内首建诺沃克病毒检测方法

近日北京检验检疫局承担的课题“食品中诺沃克病毒检测方法的研究”通过鉴定。通过此方法检测诺沃克病毒操作简便,灵敏可靠,为国内首创。诺沃克病毒(Norwalk Virus)是目前常见的食物源性病毒,主要存在于贝类等海产品中。为有效保障我国进出口食品的卫生质量,北京检验检疫局2002年开始进行“食品中诺沃克病毒检测研究”。