"DNA的粗提与鉴定"实验改进

经过多年的反复摸索、实践,笔者对中学生物学教材中“DNA的粗提与鉴定”实验作了一些改进,有利于提高实验效果。 1 实验原理遗传物质DNA为白色丝状物,在细胞中与蛋白质结合在一起,绝大部分存在于细胞核中。DNA不溶于酒精,在低浓度盐溶液中也几乎不溶解,在0．14 mol/L的盐溶液中,溶解度最低,仅为在纯水中溶解度的1％,随着盐浓度的增加,溶解度也增加,至2 mol/L时,溶解度较大,比纯水高2倍。DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。     

难溶于二甲亚砜多糖的甲基化方法研究

本文对难溶于二甲亚砜(DMSO)但易溶于水的多糖——羊栖菜褐藻糖胶的甲基化方法进行了研究。10mg多糖用0．1mL水溶解后,加和3mL DMSO,使多糖转溶于DMSO,然后加人2mL 3A分子筛脱除水分。将DNSO溶液过滤后,滤液中加入50mg NaOH粉末,室温下反应10min。加入0．5mL碘甲烷,室温下反应60min。加1mL水终止反应,加1mol／L HAc中和、透析、冻干。该法简便易行,所得产物的甲基化程度比较高。     

损毁大鼠杏仁中央核对不同味觉溶液摄入的影响

目的:研究大鼠杏仁中央核在味觉欣快感受中的作用,以探讨其在味觉指导下进行摄食行为调节的可能机制.方法:采用双瓶选择实验(味觉溶液vs水),观察电解损毁大鼠双侧CeA后对四种基本味觉溶液摄入的影响.结果:与对照组相比,CeA损毁明显降低了大鼠对0.03、0.1和0.3 mol/L氯化钠溶液,0.01、0.1和1.0 mmol/L柠檬酸溶液及10、20和50 μmol/L盐酸奎宁溶液的摄入,且其对相邻浓度的氯化钠、柠檬酸和盐酸奎宁的分辨能力也明显降低.但两组动物总的摄入量(味觉溶液和水)在各组实验中均无显著性差异.结论:CeA损毁可降低大鼠对味觉溶液的摄入,但对不同浓度溶液的影响不同.结果提示CeA可能通过影响中枢味觉评估机制,改变大鼠对不同味觉刺激的欣快阈值,从而参与摄食行为的调控.     

DNA的荧光染料DAPI的特性及其应用

在检测DNA的各种染料中,DAPI具有专一性强、灵敏度高、使用简便等特点。本文简要地就有关DAPI的文献作一综述,并介绍我们在使用DAPI时的一些经验。一、DAPI的物理化学性质DAPI是一种二价阳离子的荧光染料,由Dann等于1971年合成。化学名为4′6-二脒基-2-苯基吲哚(4′6-Diamidino-2-phenylindo-le·2HCl)。结构式为分子量350.3。黄色晶体,易溶于水,最大溶解度为2.5％。可被高浓度的两价或高价阴离子     

溶液中d(AT)_6的构象转化

 本文报道了溶液中d(AT)_6构象研究的结果。探讨了d(AT)_6的物化特征。d(AT)_6在0.05mol/L NaCl和4.5 mol/L NaCl中的UV和CD谱是典型的Z-和B-型DNA谱,UV熔化曲线形状依赖于盐的浓度。当盐浓度低于0.05 mol/L NaCl时,曲线有负斜率;而盐浓度大于0.05mol/L NaCl时,曲线的斜率变为正,即随盐浓度增加,T_m值增加。在链浓度的依赖性基础上,计算了两种构象的△H和△S。     

微生物法制造L—色氨酸工艺研究

<正> L—色氨酸Trypto phan(1-Amino-2-[3-indoyiyl]-propionioacid,2-[3-indolyl]-α-alanine) C_6H_4 NH C H C CH_2CHNH_2COOH本品属于中性芳香族氨基酸,白色或略带黄色叶片状结晶或粉末m.p.275—290℃(分解),比旋度[(?)]_D~(20)=-31.5。(C=1,水),溶于水、稀酸和稀碱溶液里,但在酸性溶液里加热则破坏、溶于热乙醇,不溶于氯仿,避光保存。L—色氨酸是人体必需氨基酸,是一种最复杂的代谢物质,起着重要的生理作用,在医药上它主要作为复方输液的一种成分,还可作食品强化剂和饲料添加剂。     

一种用于盐度测量的光纤传感器

制作了智能水凝胶PDA—C12。根据凝胶的溶胀性质设计制作了一种盐度光纤传感器探头,并实测了在不同盐度溶液中的输出光强,可测范围达到了1．0mol／L以上,为在一般要求下的盐度测量提供了一种新的方法。     

水/乙醇溶剂中阿奇霉素的热力学及多晶型研究

在278.2~308.2 K温度范围内,测定阿奇霉素在水/乙醇混合溶剂中的溶解度,根据固液平衡理论建立了该体系的溶解度修正模型。采用X线粉末衍射法和差示扫描量热法,对阿奇霉素在不同温度、不同体积比的水/乙醇混合溶剂中得到的晶体进行鉴别。同时利用溶解度数据估算了阿奇霉素在水/乙醇体系中的溶解热(-25.26~-16.11 k J/mol)、混合热(-9.94~-3.25 k J/mol)。通过溶液化学理论推导了阿奇霉素溶剂化平衡常数K与活度系数γ2的方程:γ2=1/(1+K),建立了溶剂化焓与温度、水/乙醇两者体积比(φ)之间的关系式,为ΔH=RTln(17.86exp(3.4φ)-1)。采用溶析结晶方法得到的6种阿奇霉素晶体,均属单斜晶系,但具有不同的晶胞参数且其密度和熔点也不同。同时发现温度越高,水/乙醇体积比越大,得到的晶体稳定性越差(晶体的熔点和密度降低)。在水/乙醇混合溶剂的溶析结晶体系中,产生阿齐霉素多晶型的现象与溶剂化作用的强弱有关。     

双股寡聚d(G-C)6 DNA Z-构象的形成及其构象转换的动态研究

研究揭示,生物信息的形成,传递与DNA构象的多样性,特别是其中的左手螺旋Z-构象DNA（Z-DNA）相关.在机体DNA链中,普遍存在的特异序列结构d（C-G）n和d（G-C）n片段易形成Z-构象.但对d（G-C）n序列结构的寡聚体Oligo-d（G-C）n,（n小于8）能转换形成Z-DNA片段少见报道.为促进对Z-DNA尤其是其中的短片段Z-DNA与生物功能的相关性研究,我们对合成并纯化后的寡聚体Oligo-d（G-C）n,n分别为4,6,8,10, 及Oligo-d（C-G）6和多聚体poly-d（G-C）500-900进行Z-构象的形成和其构象转换的比较研究.研究结果发现：①d（GpCpGpCpGpCpGpCpGpCpGpC）是d（G-C）n序列结构中能转换形成Z-构象的最短片段（n＝6）.其转换成Z-构象能力有链长依赖性（poly d（G-C）500-900易于Oligo-d（G-C）6）;②Oligo-d（G-C）6的Z-构象形成能力因溶液中的介质性质不同而异.Co（NH3）3＋〉Mg2＋〉Na＋;C1O-4〉Cl-,因此要求盐溶液的浓度差异很大.③PH7.2,室温条件下,在MgCl2, NaClO4, NaCl溶液浓度分别由0 mol/L增至6.0 mol/L,Oligo-d（G-C）6的B、Z构象转换都出现：B-构象相对稳定期,B-、Z-构象转换跃迁期和Z-构象相对稳定期.每个阶段要求跨越的盐浓度变迁范围也因所用介质而异.当溶液中Oligo-d（G-C）6 B-构象、Z-构象各占50%（θ1/2）时,其盐浓度分别为1.72 mol/L（MgCl2）,2.88 mol/L（NaClO4）,3.85 mol/L（NaCl）.④Oligo-d（G-C）6的B-,Z-构象转换程度受盐浓度影响：当Oligo-d（G-C）6处于最适条件和不同盐溶液其浓度为θ（12）浓度时,温度由8 ℃→22 ℃,在MgCl2,NaClO4溶液中的Oligo-d（G-C）6形成Z-构象能力增加,当由22 ℃→60 ℃,MgCl2溶液中的Z-构象Oligo-d（G-C）6加速增加,而在NaClO4溶液中则是急速向B-型Oligo-d（G-C）6方向转换;温度变化对处于NaCl溶液中的Oligo-d（G-C）6B-、Z-构象相对平衡影响较小.⑤甲基化胞嘧啶即Oligo-d（G-mC）6或d（mC-G）6均增大Z-构象形成能力.⑥在4 mol/L MgCl2溶液中的Oligo-d（G-C）6或Oligo-d（C-G）6或poly d（G-C）500-900的UVab谱、UVcd谱均显示出非B-型或Z-型DNA的新谱型.并且有链长依赖性和因溶液浓度改变出现构象可逆性转变.提示在Oligo-d（G-C）6的构象转换过程中可能存在新构象＂X＂型,即BZX构象转换模式.     

生物组织中脂肪鉴定方法的探索与比较

生物组织中含有糖类、脂类和蛋白质等有机化合物,脂类是其中比较重要的一大类,其物理性质是不溶于水但能溶于非极性有机溶剂,生物体含有的脂类主要包括脂肪(三酰甘油)、磷脂、糖脂和固醇等.脂类在生物体中发挥重要功能,如脂肪酸是生物体的重要代谢燃料,脂肪是储存能量的主要形式,有的脂类发挥防止机器损伤和热量散发的作用.生物组织中常用的脂肪鉴定原理如下:苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ在脂肪中的溶解度比在酒精中的溶解度大,当用苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ的酒精溶液处理含有脂肪的生物组织时,酒精中的苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ进入脂肪中使其着色.     

醋酸铜液浸法制作绿色植物标本中几个问题

(1)醋酸铜溶液的配制问题:醋酸铜加入50%醋酸中达到饱和,然后再加4份水即成.但实际上醋酸铜在50%醋酸中溶解度甚小,约为1%,配成的溶液浓度太稀,处理标本所需时间长,标本易泡坏.后来采用100毫升50%醋酸中加入6克的醋酸铜,加4份水配成溶液,一般标本在其中泡制10—20分钟即成.因此我们认为以此比例来配置醋酸铜的溶液比较适宜.(2)泡制时的温度问题:我们认为控制在70—85℃之间较为适宜.如温度过低,则处理标本所需时间长,过高则标本易泡坏.(3)配制福尔马林溶液问题:市售的福尔马林都含有甲醛多聚     

丹参ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化

利用正交试验设计的方法,从引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度4种因素3个水平,对丹参ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对模板DNA浓度、PCR反应过程中的退火温度进行梯度检测。结果表明:20μL ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度为1×PCR buffer、200μmol/L dNTP、1.0μmol/L引物、1.5mmol/L Mg2+和1 U Taq DNA聚合酶,最佳模板DNA浓度为20～60ng,引物UBC 835的最佳退火温度为51.7℃。     

介绍一种提取DNA的简易方法

本文介绍一个中学可做的简易实验,用课堂演示或学生实验来提取动物肝脏中的ＤＮＡ。动物组织细胞中的ＤＮＡ和ＲＮＡ大部分与蛋白质结合成核蛋白。在１～２ｍｏｌ／Ｌ的浓氯化钠溶液中,ＤＮＡ核蛋白的溶解度很大,ＲＮＡ核蛋白的溶解度很小;而在０．１４ｍｏｌ／Ｌ的稀...     

两性物质对DNA电荷逆转及凝聚的影响

聚赖氨酸(poly lysine,PL)能使DNA发生电荷逆转及凝聚,而在溶液中加入两性物质增加溶液的介电常数后,DNA发生电荷逆转的临界浓度及DNA的凝聚状态都会发生改变。作者通过动态光散射与原子力显微镜技术,研究了不同介电常数及不同培育时间下,PL对DNA电荷逆转及DNA的粒径与形态的影响。结果表明,PL浓度在10 mg/L时,DNA的电泳迁移率为0.2×10-4cm2/V·S左右,然而,当在溶液里加入1 mol/L的两性物质6-羧基己酸后,DNA的电泳迁移率变为-0.4×10-4cm2/V·S左右,说明两性物质阻碍DNA发生电荷逆转。随着两性物质浓度的增加,DNA的粒径变大,且培育时间越长,变大的越多。最后,通过原子力显微镜观察两性物质对DNA凝聚形态的影响,发现PL本身会使DNA凝聚物的尺寸变小,加入两性物质后,DNA凝聚物的尺寸反而变大。说明两性物质对DNA的凝聚形态也有影响。     

日本的L-色氨酸(L-tryptophan)概况

<正> 别名:β—吲哚基丙氨酸为白色～黄白色结晶或结晶性粉末,熔点290℃(分解),味稍苦。难溶于冷水、乙醇或氯仿,易溶于热水,每100ml的溶解度如下: 组成蛋白质的氨基酸,其分布甚广而含量较低。组成蛋白质的天然色氨酸均为L—     

一种从琼脂糖凝胶中同步回收DNA和琼脂糖的方法

介绍一种从琼脂糖凝胶同步回收DNA和琼脂糖的方法。利用0.25 mol/L异硫氰酸胍溶液(p H 8.0)溶解含有目的 DNA片段的的凝胶条,胶条溶解后,静置冰上10 min再加入预冷的异丙醇,琼脂糖呈颗粒状析出,通过离心即可初步分离DNA和琼脂糖。上清液用异丙醇沉淀回收DNA片段,利用50%PEG溶液沉淀琼脂糖。分别对0.2 kb、1 kb和10 kb长度的DNA片段进行回收,回收率分别为19.44%、36.40%、13.49%,回收的DNA纯度高,电泳条带清晰。琼脂糖均回收率为62.52%,回收琼脂糖脱水后的状态为白色颗粒。该方法切实可行,回收成本低廉,回收的DNA和琼脂糖可用于后续实验。     

PEG化重组尿酸氧化酶蛋白含量测定方法研究

目的:以未修饰的原型蛋白为对照品,建立准确测定2种聚乙二醇化重组尿酸氧化酶(PEG-rUOX)含量的方法。方法:以原型蛋白rUOX为对照品,利用凝胶色谱法测定PEG-rUOX中的蛋白含量,通过详细的专属性、精密度、准确性等方法学考察,建立该方法。色谱条件:采用TSK Gel 5000PWxl(300 mm×7.8 mm)凝胶色谱柱,以含0.15mol/L氯化钠的0.05 mol/L的Tris-HCl溶液(pH9.0)为流动相,流速0.5 mL/min,柱温为室温,检测波长280 nm。结果:在280 nm下,2种rUOX在200~1000μg/mL浓度范围内线性关系良好(r2分别为1和0.9999),其高、中、低平均回收率均较高,为98.33%~99.96%。结论:本方法专属性、精密度和准确性良好,可作为PEG-rUOX的含量测定方法。     

用EDTA转型RuBP-Ba_2的简便方法

RuBP-Ba_2转型常用Na_2SO_4转型法。我们摸索出一种用EDTA直接转型RuBP-Ba_2的简便方法,实验证明是可行的。转型时在RuBP-Ba_2试剂中加入与Ba~(2 )相同浓度(mol)的EDTA-Na_2,再加水就配成一定浓度的RuBP-Na_2澄清溶液。     

耐铝的和对铝敏感的玉米自交系根系的有机酸分泌

对玉米不同耐铝自交系在含A1^3 (0.1mmol/L)的完全营养液和A1C13 14．3μmol/L CaCl2 227．5μmol/L溶液等两种溶液中根系有机酸的分泌特征进行了研究。铝胁迫下,耐铝自交系Z1的生长与正常偏离不大,表现出较强的耐铝性,而铝敏感自交系Z2的生长则受到明显抑制。2种自交系根系分泌的有机酸种类包括苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、马米酸、乙酸和草酸等,以苹果酸为主;其分泌量随铝处理时间而异。在两种溶液中,铝胁迫均可显著增加Z1苹果酸分泌量,且根系内苹果酸含量也显著增加。铝胁迫下,Z1根系NADP—苹果酸脱氢酶活性显著增加。从对试验结果分析得出：根系分泌苹果酸可能是玉米耐铝自交系适应酸性土壤逆境的生理特性之一,而分泌的苹果酸可能是在根系中通过PEP→4OAA→苹果酸途径合成的。     

化学发光Southern blot法检测HBV体外复制及其应用于药物对HBV的抑制分析

目的：建立化学发光Southern blot检测细胞内HBV DNA的方法,同时检测3种不同靶点抗乙肝药物的体外作用。方法：用地高辛标记HBV探针,优化杂交条件,检测来自HepG2及HepG2.2.15 HBV DNA复制中间体;利用建立的化学发光Southern blot检测HBV DNA的方法检测经拉米夫定、Bay41-4109、α-Galcer以不同药物浓度处理的HepG2.2.15HBV DNA复制中间体的水平。结果：（1）标记的HBV探针的检测灵敏度为0.1pg,杂交系统的检测灵敏度为1pg,可检测到HepG2.2.15细胞内的HBV DNA特异性信号;（2）以该法检测胞内HBV DNA可见3种药物都有明显的抑制作用,其半数有效量（IC50）分别为1.53μmol/L、0.41μmol/L、0.01μmol/L。结论：胞质HBV DNA的水平能准确地反映不同靶点抗HBV药物的抗病毒效果,建议在观察药物特别是中药抗病毒研究中采用。