大鼠α-酰胺酶在变铅青链霉菌中的克隆及表达研究

α－酰胺酶（α－ａｍｉｄａｓｅ,α－ＡＥ）催化神经和内分泌系统中活性多肽的Ｃ－端酰胺化,多多肽的生物活性至关重要。以大鼠心房组织的总ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增获得编码α－酰胺酶的ｃＤＮＡ,并进行了克隆和测序。为了使α－酰胺酶能在链霉菌中分泌表达,将其ｃＤＮＡ与链霉菌酷氮酶酶（ｍｅｌＣ１）信号的编码序列融合得到融合ｍｅｌ／ＡＥ,将ｍｅｌ／ＡＥ插入链霉菌质粒ｐＩＪ６８０,获得重组质粒ｐＩＪ     

南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００柱层析,从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍,比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白,提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２ １４０,Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸,最适ｐＨ为１０．１０,７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定,最     

植物谷氨酰胺合成酶基因以及基因表达

植物谷氨酰胺合成酶基因以及基因表达印莉萍,刘祥林,林忠平（首都师范大学生物系北京１０００３７）（中科院植物所北京１０００４４）一引言谷氨酰胶合成酶（ＧＳ）是植物同化氨途经中的关键酶,其在氮代谢中所处地位可与碳代谢中的Ｒｕｂｉｓｃｏ相媲美。氨的同化初始发生在ＧＳ／ＧＯＧＡＴ循环中。在此循环里ＧＳ（ＥＣ６．３．１．２）与谷氨酸合成酶（ＧＯＧＡＴ;ＥＣ１．４．１．１４）联合将ＮＨ转给α－酮戊二酸生成谷氨酸.     

β—环糊精对苯丙氨酸解氨酶反应影响的研究

在含有较高浓度底物反式肉桂酸（ｔｒａｎｓ－ｃｉｎｎａｍｉｃ ａｃｉｄ,ＣＡ）和氨反应介质中,研究了β－环糊精（β－ＣＤ）对红醇母苯丙氨酸解氨酶（Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ ａｍｍｏｎｉａ－ｌｙａｓｅ,ＰＡＬ,ＥＣ４．３．１．５）催化反应的影响。加入适量β－ＣＤ可以克服高浓度ＣＡ对ＰＡＬ活性的抑制作用,显著增加产物Ｌ－苯丙氨酸（Ｌ－ｐｈｅ）的产量,β－ＣＤ最适用量随ＣＡ浓度升高而增加,其摩尔数量约为     

人癌胚抗原-重组痘苗病毒的构建和制备

痘苗病毒的基因组庞大,结构复杂而特殊,不可能将外源基因直接插入它的基因组,必须利用一种特殊的痘苗病毒质粒,才能构建成功重组痘苗病毒．在分析了痘苗病毒质粒ｐＪ１２０〔含有我国天花疫苗－痘苗病毒天坛株７６１的启动子和胸苷激酶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ,简称ＴＫ基因）,及含有人癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ,简称ＣＥＡ）ｃＤＮＡ全序列的质粒ｐ９１０２３Ｂ－ｃｅａ－１７结构的基础上,设计出三步法构建了重组疫苗病毒质粒ｐＪ－ＣＥＡ．经酶切及ＰＣＲ鉴定ｐＪ－ＣＥＡ中ＣＥＡｃＤ－ＮＡ的存在,进一步用同源重组方法构建了表达人ＣＥＡ的重组痘苗病毒,并以人体成纤维细胞作为宿主细胞,对ＣＥＡ－重组痘苗病毒进行了大量培养．再次证实痘苗病毒是良好的真核表达载体,可以高效而准确地表达细胞膜糖蛋白ＣＥＡ．     

青霉胞外菊粉酶的纯化和性质研究

青霉菌（ＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍＳＰ．９１－４）产生的胞外菊粉酶（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｎｕｌｉｎａｓｅ）粗酶液,经硫酸铵沉淀,超滤浓缩,Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－１００凝胶过滤,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换柱层析等步骤,得到提纯３０倍的酶Ｅ。酶Ｅ反应时最适ｐＨ４．５,最适温度为５０℃,在ｐＨ４．７～７．６范围内,温度５０℃以下酶Ｅ活性稳定;其活性受Ａｇ＾＋,Ｃｕ＾２＋ＰＣＭＢ强烈抑制。采用     

大鼠甘氨肽酰化单氧酶在CHO细胞中的活怀表达及在体外酰胺化？…

将大鼠脑ＣＤＮＡ库来源的ＰＡＭ基因片段,经克隆重组,成真核表达质粒ＰＳＶ－ＰＡＭ〈并转染ＣＨＯ细胞,获得在ＣＨＯ中稳定表达活性型α－酰胺化酶的细胞株ＤＧＡＥ。 物为双功能酶,分泌至培养基中的酶活力远高于胞内。体外酰胺化加工研究表明。以α－Ｎ＿ａｃｅｔｙｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ为底物,该酶催化反应的Ｋｍ为１２．５μｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为１８０μｍｏｌ／ｍｇ／ｈ,而且催化反应中表现中有最适铜离子浓度     

系统感染TMV的番茄叶胞外β-1,3-葡聚糖酶

系统感染ＴＭＶ （ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）的番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｉｌｌ．）叶胞外蛋白提取液经冰冻干燥浓缩、－ ２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５凝胶层析纯化,获得ＰＡＧＥ均一的β－１,３－葡聚糖酶．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明,它包含分子量为３６ ｋＤ 和２７ ｋＤ的两个同工酶．以昆布多糖为底物,酶的最适ｐＨ 在４．８—５．２之间,在ｐＨ ４—８稳定;酶的最适温度在３０—４０℃之间,在４０℃保温１ｈ 后酶活性不变;Ｋｍ 值为９．２ ｍ ｇ／ｍ Ｌ．在系统感染ＴＭＶ 的番茄叶胞外蛋白提取液中,有分子量为２２ ｋＤ、２７ ｋＤ和３６ ｋＤ的３个β－１,３－葡聚糖酶同工酶     

用蛋白质工程方法改变葡萄糖异构酶最适pH和最适温度

用寡核苷酸诱导的定点突变方法构建了葡萄糖异构酶基因的突变体（Ｎ１８４Ｄ和Ａ１９８Ｃ）。含突变体的重组质粒ｐＴＫＤ－ＧＩ１（Ｎ１８４Ｄ）和ｐＴＫＤ－ＧＩ２（Ａ１９８ｃ）在Ｅ．ｃｏｌｉＫ３８菌株中表达,用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００ＨＲ柱层析分离纯化突变酶。与野生型葡萄糖异构酶比较实验表明：（１）突变酶Ｎ１８４Ｄ的最适ｐＨ值下降了１个单位;等电点下降了０．６个单位     

点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶基因克隆与序列测定

点状产气单胞菌点状亚种（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｐｕｎｃａｔａ ｓｕｂｓｐ．ｐｕｎｃｔａｔａ）具有脯氨酰内肽酶（ｐｒｏｌｙｌ ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＰＥＰ）活性。将其染色体ＤＮＡ有Ｅｃｏ ＲⅠ部分酶切后回收８－１６ｋｂ的ＤＮＡ片段,与ＥｃｏＲⅠ消化载体ｐＵＣ１８连接后转化Ｅ．ｃｏｉｌ ＤＨ５α,用该酶的专一性底物Ｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ－Ｇｌｙ－β－ｎａｐｈｔｈｙｌａｍｉｄｅ从质粒库中     

青霉素酰化酶活性中心的定点突变

对Ｅ．ｃｏｌｅ ＡＴＣＣ １１１０５的青霉素酰化酶（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇ ａｃｙｌａｓｅ,ＰＧＡ）活性中心的Ｓｅｒ２９０分别进行了定点突变和和化学修饰,将活性中心的Ｓｅｒ２９０改变成Ｃｙｓ或Ｓｅｃｙｓ,ＰＧＡ水解活力均大为下降,但仍保留部分活性。其对底物６－硝基（３－苯乙酰氨基）苯甲酸（６－ｎｉｔｒｏ－３－ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｍｉｄｏ ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ,ＮＩＰＡＢ）的ｋｃａｔ分别从１     

枯草芽孢杆菌中性内切β-甘露聚糖酶的纯化及性质

三草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＭ９６０２产生的中性内切β－甘露聚糖酶（ｅｎｄｏ－β－１,４－Ｄ－ｍａｎｎａｎ ｍａｎｎａｎｏｈｙｄｒｏｌａｅｓ,ＥＣ,３．２．１．７８）经硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ２２）离子交换柱层析,得到电泳纯的样品,提纯了４５．５倍,收率为５．９％。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得该酶的分子量为３５ｋＤ。用ＰＡＧＥＩＥＦ测得其等电点ｐⅠ为４．５。酶反应的     

TWO NEW SPECIES FROM TRICHOSANTHES（CUCURBITACEAE）

ＴＷＯＮＥＷＳＰＥＣＩＥＳＦＲＯＭＴＲＩＣＨＯＳＡＮＴＨＥＳ（ＣＵＣＵＲＢＩＴＡＣＥＡＥ）ＹｕｅｈＣｈｕｎ－ｈｓｉＨｕａｎｇＬｕ－ｑｉＣｈｅｎｇＣｈｉｎｇ－ｙｕｎｇ〔ＡＢＴＲＡＣＴ〕ＴｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓｒｅｆｅｒａｃｔａＹｕｅｈｅｔＬ．Ｑ．Ｈ...     

生态农业与乡村经济持续发展

生态农业与乡村经济持续发展张壬午,计文瑛,孙鸿良（天津农业部环境保护研究所,３００１９１）（中国农科院,北京１０００８１）ＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＳｕｓｔａｉｎａｂｌｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＲｕｒａｌＥｃｏｎｏｍｙ￥．ＺｈａｎｇＲｅｎｗｕ;ＪｉＷｅｎｙｉｎｇ（Ａｇｒｏ－ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＰｒｏｔｅｃｌｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅ,Ｔｉａｎｊｉｎ３００１９１）,ＳｕｎＨｏｎｇｌｉａｎｇ（ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｃｓ,Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｌｏｇｙ,１９９３,１２（２）：１９—２０．ＴｈｉｓｐａｐｅｒｂｒｉｅｆｌｙｐｒｅｓｅｎｔｓｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｅｃｏｌｏｇｉｃａｌａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅｉｎＣｈｉｎａａｎｄｃｏｍｐａｒｅｓｗｉｔｈｔｈｅ＇＇ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｒｕｒａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ＇＇（ＳＡＲＤ）ｐｕｔｆｏｒｗａｒｄｂｙＦＡＯ,Ｃｈｉｎａ’ｓｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅａ－ｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅｉｓｎｏｔｏｎｌｙａｎｉｎｇｅｎｉｏｕｓ     

Effect of Plant AntifreezeProteins on Porcine Embryo to Cryopreservaton

ＥｆｆｅｃｔｏｆＰｌａｎｔＡｎｔｉｆｒｅｅｚｅＰｒｏｔｅｉｎｓｏｎＰｏｒｃｉｎｅＥｍｂｒｙｏｔｏＣｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｏｎ￥ＦＥＩＹｕｎ－ｂｉａｏ（费云标）;ＷＥＩＬｉｎｇ－ｂｏ（魏令波）;ＧＡＯｓｕ－ｑｉｎ（高素琴）;ＺＨＡＯＳｈｕ－ｈｕｉ（赵...     

鸡减蛋综合征病毒(EDSV)基因组右末端结构的分析

从中国发病鸡中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍＶｉｒｕｓ,ＥＤＳＶ）弱毒株（ＡＡ－２）,其基因组全长约为３３ｋｂ。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解ＥＤＳＶ全基因组,构建了以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡ（ＫＳ＋）为载体的右末端片段的克隆（约４．２ｋｂ）,对其进行了序列测定和结构分析。该片段全长４１８３个碱基对（ｂｐ）,位于基因组右末端８７．３ｍ．ｕ．－１００ｍ．ｕ．。结果显示,该片段与哺乳动物腺病毒右末端Ｅ４区结构不同,与禽Ⅰ型腺病毒代表株ＣＥＬＯ右末端片段亦无同源性。本文为深入了解ＥＤＳＶ基因组结构特点,ＥＤＳＶ与其他腺病毒基因结构与功能的进化关系和ＥＤＳＶ载体的构建奠定了分子生物学基础     

持续农业是生态农业的继续与发展

持续农业是生态农业的继续与发展袁从,赵强基（江苏省农业科学院,南京２１００１４）ＳｕｓｔａｉｎａｂｌｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ—ＴｈｅＣｏｎｔｉｎｕａｔｉｏｎａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ．￥ＹｕａｎＣｏｎｇｙｉ;ＺｈａｏＱｉａｎｇｊｉ（ＪｉａｎｇｓｕＡｃａｄｅｎｚｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ,Ｎａｎｊｉｎｇ２１００１４）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｍａｌｏｆＥｃｏｌｏｇｙ,１９９３,１２（２）：１３－１５．Ｉｎｌｉｇｈｔｏｆｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｏｕｒｃｏｕｎｔｒｙ,ｔｈｉｓｐａｐｅｒｉｎｔｒｏｄｕｃｅｓｔｈｅｃｏｎｃｅｐｔｓａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅａ－ｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｔｓｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎｉｎｄｉｃｅｓ──ｓｕｓｔａｉｎａｂｉｌｉｔｙ,ｓｔａｂｉｌｉｔｙ,ｅｑｕａｌｉｔｙａｎｄｈａｒｍｏｎｉｔｙ（ｄｉ－ｖｅｒｓｉｔｙ）．Ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄｓｙｓｔｅｍｉｎｐｕｔ—ｏｕｔｐｕｔｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍｉｓｕｓｅｄｔｏｅｓｔｉｍａｔｅｔｈｅｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｓｏｉｌｆｅｒｔｉｌｉｔｙ．Ｐ     

鲁西北平原高产夏玉米生育模式

鲁西北平原高产夏玉米生育模式董振国,鲁全国（中国科学院地理研究所,北京１００１０１）ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＭＯｄｅｌｏｆＨｉｇｈＹｉｅｌｄｉｎｇＳｕｍｍｅｒＣｏｒｎｏｎＮｏｒｔｂｗｅｓｔＳｋａｎｄｏｎｇＰｌａｉｎ￥ＤｏｎｇＺｈｅｎｇｕｏ;ＬｕＱｕａｎｇｕｏ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＧｅｏｇｒａｐｈｙ,ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ,Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０１）,ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥ－ｃｏｌｅｇｙ,１９９３,１２（２）：６９－７２．Ｅｒｅｃｔａｎｄｐｌａｎｅｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆｃｏｒｎｈａｖｅａｌｅａｆｉｎｃｌｉｎａｔｉｏｎｏｆ６５°ａｎｄ５０°ａｎｄｔｈｅｉｒｏｐｔｉｍｕｍｐｌａｎｔｉｎｇｄｅｎｓｉｔｉｅｓａｒｅ７５０００－８２０００ａｎｄ５２５００－６００００ｓｔｅｍｓ·ｈａ￣（－１）．Ｔｈｅｌｅａｆａｒｅａｉｎｄｅｘａｔｅａｒｓｐｒｏｕｔｉｎｇｓｔａｇｅａｎｄｌｅａｆａｒｅａｄａｙ（ＬＡＤ）ｆｏｒｔｈｅｆｏｒｍｅｒａｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ５．５－６．０ａｎｄ３６０－４００,ｗｈｉｌｅｔｈｏｓｅｆｏｒｔｈｅｌａｔｔｅｒａｒｅ３．５－４．０ａｎｄ２６０－３００．ＴｈｅＬ     

菠萝叶片的稳定碳同位素比与PEP羧化酶及PEP羧激酶活性

专性景天酸代谢（ＣＡＭ）植物菠萝（Ａｎａｎａｓｃｏｍ ｏｓｕｓ （Ｌ．） Ｍｅｒｒ．）的下数第５ 到第３５ 位叶为材料,研究稳定性碳素同位素（δ１３Ｃ）值,磷酸稀醇式丙酮酸（ＰＥＰ）羧化酶和ＰＥＰ羧激酶活性的变化。１１ 个不同叶位叶片的δ１３Ｃ值平均为－ １２．９４‰,最大变幅相差－ ２．０６‰。两个酶的活性呈单峰形变化,第８—１１ 位叶的活性最高,低位叶的酶活下降。本试验条件下,ＰＥＰ羧激酶平均活性比ＰＥＰ羧化酶高３．４ 倍。结果表明,ＣＡＭ 植物的暗下羧化与光下脱羧之间具有一定的协调性。老叶虽然酶活较低,但总的看来,ＣＡＭ 水平变化不大     

振兴草畜产业—生态大农业发展的必然决择

振兴草畜产业──生态大农业发展的必然决择王辉珠,刘存琦,艾克拜尔·阿玛依拉（甘肃农业大学草原系,兰州７３００７０）ＶｉｔａｌｉｚｉｎｇＨｅｒｂｉｖｏｒｏｕｓＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ──ＡｎＩｎｅｖｉｔａｂｌｅＣｈｏｉｃｅｆｏｒｔｈｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ￥．ＷａｎｇＨｕｉｚｈｕ;ＬｉｕＣｕｎｑｉ;Ａｉｋｅｂａｉｌ．Ａ;Ｍａｙｉｌａ（ＧｒａｓｓｌａｎｄＤｅｐｔ．,ＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉ－ｖｅｒｓｉｔｙ,ｈｅｎｚｈｏｕ７３００７０）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｌｏｇｒ,１９９３,１２（２）：７９－８０．Ｉｎｔｈｅｌｉｇｈｔｏｆｓｅｖｅｒｅｓｉｔｕａｔｉｏｎｏｆｏｕｒｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄｈｅｒｂｉｖｏｒｏｕｓａｎｉｍａｌｈｕｓｂａｎｄｒｙ,ｉｔ’ｓｐｒｏ－ｐｏｓｅｄｔｈａｔｕｎｄｅｒｔｈｅｏｖｅｒａｌｌｐｌａｎｎｉｎｇａｎｄｓｕｐｐｏｒｔｂｙｔｈｅｃｏｕｎｔｒｙ,ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍａｊｏｒｂａｓｅｏｆｈｅｒｂｉｖｏ－ｒｏｕｓａｎｉｍａｌｈｕｓｂａｎｄｒｙｉｎＬｏｅｓｓＰｌａｔｅａｕａｓａｓｔｒａｔ