条叶龙胆根培养物中龙胆苦苷的产生和含量

条对龙胆愈伤组织中龙胆苦苷含量较低,根的分化可以提高龙胆苦苷的含量。培养的离休根中龙胆苦苷的含量则更高。随着继代次数的增加,愈伤组织中龙胆苦苷含量下降快,而分化根的愈伤组织和离体培养根中龙胆苦苷含量下降较慢。在愈伤组织的液体培养中,1/2MS培养基附加低浓度的植物激素,龙胆苦苷含量有所提高。植物激素配比促进愈伤组织中分化根的形成,也促进龙胆苦苷的产生;但促进愈伤组织的生长时,不利于龙胆苦苷产生。在离体根培养中,添加 1mg/L的金雀花碱,促进龙胆苦苷的产生,含量可达1.48％,明显高于愈伤组织(0.52％)和分化根的愈伤组织(0.65％),也高于试管苗根的龙胆苦苷含量(1.01％)。     

药用植物组织培养的研究——Ⅲ、三分三愈伤组织的分化对莨菪碱、东莨菪碱含量的影响

从三分三种子萌发的根、茎、叶和花药、种皮诱导的愈伤组织,均含有莨菪碱、东莨菪碱。其含量和生长速度均以茎、叶愈伤组织为最高。根、茎、叶愈伤组织,在培养基中分别加入各种植物激素,培养时表明:BA(6-苄基嘌呤)促进芽的分化,NAA促进根的分化,2,4-D则抑制根的分化,GA_3(赤霉酸)影响很小。获得了三种愈伤组织只分化根不分化芽(加NAA 1毫克/升)和只分化芽不分化根(每升中加BA0.2毫克和2,4-D 0.2毫克)的良好结果。分化的这些芽或根的诱导频率,以茎、叶愈伤组织为高。分化的芽或根中均含有莨菪碱及东莨菪碱,但其含量相应地比它们的未分化的愈伤组织约低1～4倍。薄层层析结果表明,愈伤组织中有6种生物碱,茎、叶愈伤组织中,还有一种在紫外光下显蓝色荧光的物质,而分化的根或芽及花药愈伤组织中只有4种生物碱。看来,在离体培养下的三分三愈伤组织是有莨菪碱和东莨菪碱合成的全能性。这两种生物碱似乎并非最终的代谢产物,它们可能参与了器官建成中的代谢过程。文中还讨论了莨菪碱和东莨菪碱的合成部位问题。     

八角枫属植物割舌罗生物碱的分离鉴定

从割舌罗[Alangium Salviifolium(L.f.)Wanger.]的粗枝中分离到四个生物碱,根据熔点、元素分析、光谱数据,鉴定为温洛托品(venoterpine)、恩可灵(ankorine)、吐根酚碱(cephaeline)和吐根亚碱(psychotrine)。单萜生物碱温洛托品在八角枫科植物中是第一次发现。     

通过细胞的选择作用促进L-酪氨酸向L-3,4-二羟苯丙氨酸的生物转化

荷兰Groningen大学的N.Pras和Th.M.Malingre选择出能快速生长而且过氧化物酶活性高的绿色油麻藤愈伤组织。该酶催化L-酪氨酸转化成二羟-L-苯丙氨酸(L-DOPA,一种治疗帕金森病的药物)。他们报道,从这些愈伤组织获得的细胞悬浮培养物的生物转化活性比未经选择的愈伤组织培养物的活性高20倍。选择的细胞悬浮培养物含6％L-DOPA(干重)。将逆境因子如盐和硫酸铜加人培养基,pH为1～2时能使L-DOPA向培养基的完全     

三分三愈伤组织细胞的悬浮培养

为使药用植物组织培养应用于工业生产,通常的研究步骤之一是:诱导愈伤组织→愈伤组织培养→细胞悬浮培养→细胞深层培养。经由中间试验过渡到工业生产。我们已报道了三分三(Anisodus acutangulus)愈伤组织的诱导和培养〔1,2,4〕。现在报道三分三根愈伤组织细胞的悬浮培养。     

油菜幼苗下胚轴、根和子叶愈伤组织器官分化的初步研究

器官分化是植物生理学上的一个重要问题。油菜幼苗子叶、下胚轴和根外植体,培养在附加适当浓度的一种生长素的培养基上,能诱导产生愈伤组织。愈伤组织转至除去生长素的基本培养基上,能从子叶和下胚轴愈伤组织分化出不定芽(苗),进而从不定芽(苗)形成的茎的基部长根而形成完整小植株,但频率不高。如果在附加一种生长素的诱导愈伤组织培养基中,再加入适当浓度的一种细胞分裂素,不仅能加速下胚轴和根愈伤组织的产生,而     

三叶橡胶(Hevea brasiliensis)愈伤组织和液体悬浮培养细胞的生长、组织解剖以及形态发育潜力

利用三叶橡胶(Hevea brasiliensis)幼苗的茎作外植体业已分化出愈伤组织培养物,并通过在30℃下用每升含有2毫克2,4-D与0.5毫克激动素的MS培养基进行连续再培养能使它得到长期保存。新分化出的愈伤组织培养物能自然地分化了根。但是,在连续再培养过程则丧失了这种特性,且培养物变得具有异质性(即包含着具有繁殖能力颜色很淡的部位和无繁殖能力颜色较深而紧密的部位)。连续繁殖多次的培养物继续分化了同根部乳管相类似的含有颗粒物质的少数而零散的乳管。这种愈伤组织(O愈伤组织)移植到振荡液体培养基并不能产生具有生长能力的悬浮细胞。但是,经在液体培养基两次移植培养而得到恢复的大细胞团,再移到固体培养基培养即产生非常疏松、色淡、生长迅速的同质性愈伤组织(R愈伤组织),这种愈伤组织在再培养过程中仍然保持它特有的特征。将R愈伤组织再移植培养到振荡液体培养基便产生生长很迅速的细胞悬浮培养液,它可以用同样培养基在3℃下连续地繁殖,像一般愈伤组织培养的作法那样。O与R培养物都需要2,4-D,但两者对浓度的反应有差异。它们在连续繁殖过程中都保持二倍特性;而连续繁殖的细胞悬浮液则含有一定比例的多倍细胞。当细胞悬浮培养液不经再培养而保存几个月之后形成的大细胞团便可成胚状结构。促使这些胚状结构进一步发育成小苗的许多尝试尚未获得成功。     

油菜子叶、下胚轴和根愈伤组织的诱导和植株再生

我们从1978年开始,用油菜幼苗的子叶、下胚轴和根进行组织培养,探索在油菜无性系快速繁殖中的应用。油菜组织培养方面的资料,目前仅见有茎段培养、花药培养,花器培养和叶肉原生质体培养。由花器各部分诱导形成的植株有早花现象,由茎段再生的植株,从茎段外植体至再生植株成熟只要90天。用油菜子叶、下胚轴和根诱导产生愈伤组织并从子叶和下胚轴愈伤     

紫锥菊愈伤组织诱导及生物活性成分分析

以紫锥菊(Echinacea purpurea)无菌苗为材料,研究了不同激素配比条件下不同外值体愈伤组织的诱导及所诱导的愈伤组织中的主要成分多糖和总酚,并应用高效液相色谱法对根愈伤组织提取物与紫锥菊根提取物中的酚酸类物质进行了比较分析.结果表明,紫锥菊不同部位愈伤组织诱导的最适宜激素配比不同,其中根愈伤组织诱导的最佳激素配比为0.5 mg/L 2,4-D 0.5 mg/L 6-BA.叶、茎、根诱导愈伤组织的多糖含量分别为10.15、11.84、14.49 mg/g干重;总酚含量分别为52.16、28.144、7.99 mg/g干重.根愈伤组织总酚和多糖含量均较高,其提取物的酚酸类物质的高效液相色谱与紫锥菊根提取物图谱主峰一致,且生长速度快、质地疏松,是细胞培养获取紫锥菊主要生物活性成分的适宜材料.     

药用植物组织培养的研究 Ⅰ.三分三(Scopolia acutangula)愈伤组织的培养及莨菪碱、东莨菪碱的产生

本文研究了从三分三茎诱导愈伤组织的适宜培养基和该组织培养的适宜温度、pH 值和培养基、光、各种生长调节物质对其生长及莨菪碱、东莨菪碱含量的影响。应用纸层析、薄层层析和紫外光谱鉴定证明所获得的愈伤组织具有合成这两种生物碱的能力,并发现其在生物碱的组成和含量上与原茎不同,愈伤组织比原茎多3种化合物及一种显荧光的化合物。文中讨论了组织培养法用于工业生产的有关问题。     

组织培养和HPLC法研究红豆杉生物合成紫杉醇的组织化学定位

为了探索用组织培养法和高效液相色谱(HPLC)法研究红豆杉植物生物合成紫杉醇的组织化学定位,对南方红豆杉[Taxuschinensis(Pilger)Rehd.var.mairei(LemeeetL啨vl.)ChengetL.K.Fu]和曼地亚红豆杉(Taxusmediacv.Hicksii)各种组织进行了愈伤组织诱导培养,用HPLC法(检测条件:色谱柱为DiamonsilTMC18,5μm,4.60×250mm柱,检测波长为227nm,流动相为甲醇∶水∶乙腈=1∶2∶2,流速为1.2mlmin,柱温为35℃,灵敏度为0.16AuFs,进样量10μL)对组织培养物中紫杉醇含量进行检测,结果显示:红豆杉幼茎、幼茎皮、茎形成层、幼叶和顶端分生组织的组织培养物中紫杉醇含多以由分生组织细胞诱导培养所形成的愈伤组织为高。南方红豆杉以幼茎皮和茎形成层愈伤组织培养物中为高,分别为0.0409%(干重)和0.0407%(干重),曼地亚红豆杉则以茎形成层和顶端分生组织的愈伤组织培养物中为高,分别为0.025%(干重)和0.016%(干重),均是它们天然材料中含量的2.3～8倍。     

水稻组织培养中影响植株再生因素的研究

水稻组织培养开始于幼胚培养,一般认为禾谷类的组织和细胞培养要比双子叶植物困难,但有关水稻组织培养成功的例子却不少,不少人用去壳的种子、胚、根、和花粉诱导发生愈伤组织,获得了再生植株。日本古桥等人报导从根、胚乳、茎节诱导发生愈伤组织,并分化出植株,印度Bajaj等从水稻未成熟和成熟胚乳培养物获得三倍体植株。在我国,对水稻幼茎、幼穗、叶鞘、枝梗和茎尖的组织培养开展了研究,并获得成功。本试验对水稻的幼穗、幼茎、幼根和幼叶进行了离体培养,并研究了影响愈伤组织发生和分化的若干因素。     

光质对黄瓜及番茄愈伤组织培养中分化和有关酶的影响

黄瓜及番茄愈伤组织培养过程中的分化和生理生化过程明显地受到光质处理的影响,它们的过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性变化与组织及器官的分化都有一定的相关性。黄瓜愈伤组织培养中POD及PAL的第3个活性峰的出现与芽的分化一致,红光与绿光抑制黄瓜愈伤组织培养中芽的分化,不出现第3个活性峰。两种材料培养后培养物的生物重量在不同光质下也有明显差异,但含水率之间无差异。     

药用植物巴西吐根的引种繁殖及栽培初探

吐根作为治疗痢疾的特效药而著名,主要具有祛痰、催吐和抗阿米巴痢疾的作用。我国目前对吐根药材的需求全部依赖于进口,国内未有大规模种植,为此,该文对原产巴西的吐根进行了引种繁殖及栽培研究。结果表明:(1)云南省西双版纳傣族自治州景洪市的气候条件能满足吐根的正常生长发育的需求,可作为吐根的引种地。(2)吐根的分根和茎下段可用于扦插繁殖,其发根率和存活率分别100.0%和100.0%、68.0%和75.0%,前者优于后者。(3)用20 mg·L^-1的IAA或IBA浸泡1 h,吐根茎下段的扦插成活率为90.0%或88.0%,均显著高于对照,可用于提高吐根茎下段的扦插成活率。(4)采用分根繁殖的吐根植株在植株生长和药材外观性状较好,单株总根体积较高,吐根一年生植株平均株高为10.66 cm,两年生平均株高为16.54 cm,一年生植株根总体积为2.71 mL,两年生根总体积为3.54 mL。(5)吐根栽培基质可用腐殖土:椰糠体积比为4:1。(6)在吐根的年周期生长中,地径1—3月和9—11月增长明显,株高7—11月增长明显,叶片长和宽3—9月增长明显,根据这些特点,可科学制定相应的水肥管理措施。该研究结果可为吐根的引种繁殖和栽培提供一定的科学参考。     

发根农杆菌转化大豆的研究

本文利用发根农杆菌感染大豆不同外植体,在成熟胚靠近子叶节部位诱导产生毛状根。经冠瘿碱检测表明,毛状根及由此产生的愈伤组织均有甘露碱存在,说明Ri质粒的T-DNA已整合到大豆的转化根及愈伤组织中。转化根再生实验表明,在含NAA和IAA8mg/L的MS培养基上得到不定根的分化,MS和B_3培养基及6％蔗糖对转化丛生芽的诱导有利。转化的丛生芽在MS基本培养基上进一步长成小植株。     

正交设计在植物组织培养基研究中的应用

植物愈伤组织或悬浮细胞培养物的生长和有效成分的积累之间是有矛盾的,这是植物组织培养技术应用于药物生产的一个障碍。为了探索解决这一困难的线索,本文以延胡索(Corydalis yanhusuo)地下茎愈伤组织的继代培养物为材料,利用正交试验的方法,对合成培养基中主要成分进行了比较。试     

根癌土壤杆菌介导的咖啡转化

用五种不同的根癌土壤杆菌转化咖啡栽培品种小粒种的成熟胚培养物,筛选出对咖啡侵染力较强的菌株Gv3111(pTiB6s3)和A281(pTiB0542)。在无激素的Ms培养基(MsD)上得到淡黄色、松脆、生长迅速的瘤性愈伤组织,继代培养4—6周后,产生大量的畸胎芽。转化体经Opine检测,分别含有特异的章鱼碱或农杆碱。GV3111转化体的DNA分子杂交结果表明,在咖啡的基因组内有T-DNA的插入。用带有GUS基因和NPT I基因的双元载体系统pBI121／Gv3111和pBl121／A281转化咖啡子叶,转化后第三天可以检测到Gus基因的瞬时表达。在含卡那霉素(Kanamycin,Km)的Ms选择培养基上,得到抗性愈伤组织,这些愈伤组织仍能检测到GUS基因的表达·     

培养条件对三七愈伤组织生长和皂苷积累的影响

以MS为基础培养基,改变激素配比、氮源和光照等因素,以分光光度法和HPLC法分析三七愈伤组织培养过程中皂苷含量的变化。结果表明:培养条件对三七愈伤组织中皂苷积累有一定影响,激素配比对愈伤组织中皂苷含量的影响最大,在0.5 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA组合下,培养物中总皂苷含量最多,达到4.72%±0.29%;在总氮量为60 mmol·L-1条件下,45 mmol·L-1KNO3+7.5 mmol·L-1NH4NO3(NO3-/NH4+=7∶1)时,愈伤组织皂苷含量最多,达到4.71%±0.17%;分别在1 000 lx和500 lx光强下每天光照12 h的愈伤组织,皂苷含量均低于黑暗培养的愈伤组织,三者皂苷含量分别为1.94%±0.31%、2.38%±0.12%和3.57%±0.27%,光照引起愈伤组织表面变绿及细胞分化,可能是抑制愈伤组织中皂苷合成与积累的主要原因;HPLC检测发现,三七愈伤组织和根中均含有Rg1、Re、Rb1及Rd四种皂苷,但栽培三七根含有R1皂苷,而三七愈伤组织中未检测到R1,其原因需要进一步研究。该研究结果为未来愈伤组织培养成为部分代替人工栽培生产三七天然产物的潜在途径提供了研究基础。     

药用植物组织培养的研究——Ⅴ.生长速率和东莨菪碱含量皆高而稳定的变异体

从4000R的~(60)Co,γ-射线照射过的第13代三分三根愈伤组织系获得一愈伤组织变异体。它的生长速率比亲本高3倍,东莨菪碱含量高30％,过氧化物酶同工酶谱也呈现差异。且愈伤组织变异体的这些特征在照射后到第14代(15个月)仍然是稳定的。愈伤组织变异体中的蔗糖酶和硝酸还原酶活性分别比亲本增加了近60％和145％。     

碱蓬茎段培养再生植株的研究

将碱蓬(Suaeda Forsk)种子经消毒后分别接种在4种不同pH值的培养基上,两天后观察发现以pH 7培养基上的种子出苗最快,出苗率最高。6d时观察,在pH9的培养基上也有较高的出苗率。用上述无菌苗茎段为外植体,分别接种在4种不同生长素的培养基上均能产生愈伤组织,除含有2,4-D的培养基外,其它3组愈伤组织的诱导频率均达到100％。把愈伤组织移到添加BAP与IAA的分化培养基上,三个星期后由愈伤组织分化出不定芽,分化频率为12.5％。当不定芽长至1.5cm~2cm时转入生根培养基,两个星期后长出白色的根,获得完整植株。