淋巴母细胞样细胞系SL—795

材料取自55岁男性胃癌患者的小网膜淋巴结,1979年5月用小组织块静置培养方法进行培养。培养液为80％RPMI 1640加20％小牛血清,培液pH6.8—7.0,于培养后第15天传出第一代细胞,但以后经过三个月的相对静止期,才开始迅速而稳定的生长,一般10天     

动脉平滑肌细胞原代培养贴块法的改良

对传统的动脉平滑肌细胞（ASMCs）的体外培养贴块法进行改良。用改良的贴块法进行ASMCs的原代培养,用传统的贴块培养法作对照。运用改良贴块法细胞长满瓶壁所需平均生长时间为6天,产量为60-60万/瓶;而在同等条件下对照组的传统贴块细胞长满瓶壁所需生长时间约需15天,产量仅为30万/瓶。并且,改良方法比传统方法具有较高的成功率,且无需选用胰岛素。新方法简单易行,结果稳定可靠。     

百里香酚的抗肿瘤作用

目的：观察百里香酚对体外培养的肝癌细胞的抑制作用。方法：体外培养人肝癌细胞（Bel-7402）,采用MTT法、AO/EB荧光染色法观察百里香酚对人肝癌细胞Bel-7402的作用。结果：百里香酚可显著抑制Bel-7402细胞的生长;经百里香酚作用后,肝癌细胞在显微镜形态明显改变。结论：百里香酚能抑制肝癌Bel-7402细胞生长。     

ICR胎鼠成纤维细胞培养方法的优化

目的确定胎鼠成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts,MEF）最优制备方法,为MEF的制备节省时间与原材料。方法取胎鼠组织,采用组织块培养法、胰酶消化培养法、胰酶消后组织块培养法进行分离培养MEF,比较观察MEF纯度、生长速度、细胞形态等指标,筛选最节省时间与原料的一种培养方法。结果组织块培养法所得MEF生长速度慢,细胞体积小,杂细胞少,纯化所需传代次数少。胰酶消化培养法的MEF生长速度快,体积较大,杂细胞数量多,纯化所需传代次数较多。胰酶消化后组织块培养法的消化后组织块的成纤维细胞生长速度介于前两种方法之间,细胞体积和形态与组织块法培养结果相似,杂细胞数量较少,纯化所需传代次数少。结论胰酶消化结合组织块培养法能最大限度的利用材料,在短时间内可制备大量MEF,满足核移植试验与作为饲养层细胞的需求。因此,胰酶消化结合组织块培养法是MEF最优培养方法。     

百里香酚的抗肿瘤作用

目的:观察百里香酚对体外培养的肝癌细胞的抑制作用.方法:体外培养人肝癌细胞(Bel-7402),采用MTT法、AO/EB荧光染色法观察百里香酚对人肝癌细胞Bel-7402的作用.结果:百里香酚可显著抑制Bel-7402细胞的生长;经百里香酚作用后,肝癌细胞在显微镜形态明显改变.结论:百里香酚能抑制肝癌Bel-7402细胞生长.     

小鼠主动脉平滑肌细胞的分离培养及鉴定

目的:建立分离培养小鼠原代主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的方法并检测其生长特性。方法:剥离小鼠主动脉中膜层,分别采用组织块培养法及胶原酶消化法分离培养小鼠主动脉来源的原代VSMC,免疫荧光法检测细胞的纯度和分化状态;3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定小鼠主动脉VSMC传代细胞的生长、增殖特性。结果:组织块培养法培养组织块8d后,细胞从组织块边缘爬出,18 d后细胞汇合度达到80%以上后传代;胶原酶消化法分离培养的细胞生长7 d后,汇合度可达80%,此时进行传代;2种方法获得的细胞进行免疫荧光染色,结果显示细胞传至第3代时纯度在95%以上,传至第8代时分化状态并没有改变;MTT法显示细胞生长3~5 d时处于指数生长期。结论:本研究建立了2种可靠稳定的分离和培养小鼠主动脉VSMC的方法,VSMC纯度高,多次传代后细胞特征稳定。     

直接注射法制作ICR小鼠肝癌原位移植瘤模型

目的：培养鼠肝癌H22细胞,直接注射法制作ICR小鼠肝癌原位移植瘤,为后续实验奠定基础。方法：鼠肝癌H22细胞体外培养,将调整好的对数生长期的肝癌细胞直接注射小鼠肝脏,2周后解剖观察,并进行组织HE染色。结果：所有实验小鼠均可见肿瘤生长,HE染色示肝细胞肝癌。结论：直接注射法制作ICR小鼠肝癌原位移植瘤模型简便易行,值得推广应用。     

直接注射法制作ICR 小鼠肝癌原位移植瘤模型

目的:培养鼠肝癌H22细胞,直接注射法制作ICR小鼠肝癌原位移植瘤,为后续实验奠定基础。方法:鼠肝癌H22细胞体外培养,将调整好的对数生长期的肝癌细胞直接注射小鼠肝脏,2周后解剖观察,并进行组织HE染色。结果:所有实验小鼠均可见肿瘤生长,HE染色示肝细胞肝癌。结论:直接注射法制作ICR小鼠肝癌原位移植瘤模型简便易行,值得推广应用。     

SD大鼠胸腹主动脉平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的建立原代大鼠胸腹主动脉平滑肌细胞培养方法,为研究心脑血管动脉粥样硬化疾病提供重要的载体和工具细胞。方法选取6～8周龄SD大鼠2只,剪开胸腹腔,剥离主动脉,刮除血管内、外膜,经0.2%Ⅱ型胶原酶/弹性蛋白酶消化后,剪碎成块,种瓶进行原代培养。通过细胞形态学观察、α平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学染色法鉴定所培养的目的细胞。结果接种于培养瓶中的血管组织块培养48h后开始贴壁;72h后细胞以组织块为中心,向外迁移,"岛屿状"细胞团簇初步形成;96h后原代细胞集落逐渐融合,铺满瓶底,呈现典型的"峰-谷"样生长;第一代传代细胞形态基本保持不变,高倍镜下细胞呈三角形或星形。免疫细胞化学染色显示,细胞α平滑肌肌动蛋白阳性率达99%以上。结论复合酶消化法结合组织块法能够成功高效地分离培养出原代大鼠胸腹主动脉平滑肌细胞。     

眼镜蛇毒组分C对小鼠实验性肝癌细胞生长影响的探讨

ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹水型肝癌细胞与眼镜蛇毒组分Ｃ在无菌条件下混合后接种于昆明种小鼠右前肢腋下,在２５℃条件下饲养１２天。结果表明,组分Ｃ能明显抑制小鼠肝癌细胞的生长（ＩＣ５０为５９．０８μｇ／ｍｌ）,当肝癌细胞膜被人为造成损伤时,组分Ｃ对其生长的抑制作用则显著增强（ＩＣ５０为６．７２μｇ／ｍｌ）。此外,组分Ｃ能显著延长荷瘤小鼠的生存时间。对体外培养的小鼠肝癌细胞,组分Ｃ也具有很强的杀伤作用,且这种杀伤作用受组分Ｃ的浓度、组分Ｃ与肝癌细胞孵育的时间及孵育的温度的影响。病理组织检查发现,给组分Ｃ后,镜下可见肝癌细胞生长受到明显抑制,肝癌细胞未向皮肤及附件浸润。表明组分Ｃ对肝癌细胞生长具有较强的抑制作用     

人正常食管鳞状上皮不同原代培养方法的比较

该研究通过比较人正常食管鳞状上皮不同的原代培养方法,以期为不同的实验目的提供不同的培养方法。实验用到的正常食管粘膜上皮来源于食管癌患者手术切除的标本,采用组织块法和酶消化法,分别用DMEM/F12混合培养基和K-SFM无血清培养基进行培养。通过直接观察、细胞形态学观察和免疫细胞化学方法观察细胞的生长情况、细胞形态学特征及鉴定所得到的细胞,比较不同方法与不同培养基组合中原代培养细胞的生长状况。用组织块法,在DMEM/F12混合培养基中人正常食管上皮细胞生长较好,细胞融合较快,成纤维细胞污染较少,15～17天上皮细胞铺满瓶底的70%～80%,获得的细胞数量大,但细胞传代后成纤维细胞污染严重。用酶消化法,在K-SFM无血清培养基中人正常食管上皮细胞生长好,细胞融合快,成纤维细胞污染基本消除,细胞纯度高,10～12天细胞便可以铺满瓶底的70%～80%,这种方法培养的细胞可以冻存、复苏和传代。其余各种培养方法所得细胞无论在生长状态、培养周期、成纤维细胞污染和传代方面均较前两种方法差。以上各种方法培养的细胞经免疫细胞化学染色鉴定证实细胞呈广谱细胞角蛋白阳性,确定是食管上皮来源的细胞。酶消化法加K-SFM无血清培养基是本实...     

人参细胞大量培养的研究

人参细胞培养液的 pH 值在培养过程中先迅速降低然后缓缓回升,后又趋于平稳。合成皂甙高峰在细胞生长对数期稍后出现。生产皂甙的最佳收获期,细胞悬浮培养为20—25天,细胞发酵培养为15—18天。细胞生长和皂甙累积要求有一个稳定而又适宜的 pH 值环境。发酵培养无论对细胞生长、培养规模、还是皂甙含量均是一种较为理想的培养方式。     

原花色素对HepS细胞增殖抑制诱导凋亡的研究

本文通过体外培养肝癌HepS细胞,以不同浓度原花色素处理12—72h后,MTT法测定细胞生长抑制作用,采用DNA片断分析、DNA琼脂糖凝胶电泳、荧光染色以及流式细胞技术等方法来探讨原花色素体外抑制肝癌HepS细胞及诱导其凋亡的作用。实验结果显示原花色素能抑制HepS细胞的生长,并且呈现出明显的时效和量效关系,DNA电泳出现典型的凋亡DNA梯形带,在荧光显微镜下,凋亡细胞呈亮绿色,H和AnnexinV．FIFC双染后,经流式细胞仪检测、分析显示凋亡细胞明显增多。因此原花色素能抑制肝癌HepS细胞株的生长,可能与诱导其细胞凋亡有关。     

人线粒体DNA缺失肝癌细胞株建立

人线粒体DNA缺失肝癌细胞株(ρ0SK-Hep1)的建立及鉴定。采用溴化乙锭(EB)诱导,PCR、Southern杂交及选择性培养方法进行鉴定。ρ0SK-Hep1细胞在含EB、无尿嘧啶和丙酮酸的选择培养基中从第1天始细胞逐渐悬浮、肿胀,培养第5天以后大量悬浮死亡,且贴壁疏松,10～12天细胞完全悬浮死亡。在选择性培养基中可以正常生长增殖成单层,有少量悬浮。同期非选择培养的SK-Hep1细胞生长正常。PCR结果显示,细胞色素氧化酶I、II(COXI、COXII)及内参G3PDH在SK-Hep1细胞中均可扩增出相应的条带,ρ0SK-Hep1细胞只见内参条带的形成。Southern杂交结果显示,ρ0SK-Hep1细胞未见COXI、COXII杂交条带形成。经EB诱导后成功地获得了ρ0SK-Hep1细胞株。     

体外培养小鼠下颌下腺细胞生长特性的实验研究

目的：研究小鼠下颌下腺细胞的培养方法,探讨下颌下腺细胞培养条件及细胞生长特性,为研究干细胞转分化涎腺腺泡细胞以及涎腺再生研究奠定理论基础和技术支持。方法：取2周龄的小鼠,组织块法和消化法分别进行培养,用活细胞观察法和HE染色法记录细胞形态学特征;免疫荧光染色法鉴定;通过生长曲线和细胞倍增时间来比较两种方法对细胞增殖能力的影响。结果：组织块法和消化法均可以成功的培养下颌下腺细胞,（1）组织块法培养的细胞呈卵圆形或多边形,10天左右成铺路石样;消化法培养细胞亦为上皮样细胞,呈多边形,胞质丰富;（2）HE染色下颌下腺细胞呈多边形,胞核明显;（3）Cytokeratin13和AQP5表达阳性,Wimentin表达阴性;（4）组织块法培养细胞增殖相对较平缓,消化法培养细胞增长较迅速;（5）消化法培养倍增时间（1．3471±0．6071）天比组织块法倍增时间（2．1887±1．1503）明显缩短（P〈0．05）;结论：体外可以成功的培养下颌下腺细胞,但是同时证明下颌下腺细胞长期传代较困难,这为研究干细胞转分化涎腺细胞和涎腺再生体内实验提供了理论和实验基础。     

水牛皮肤成纤维细胞的分离与体外培养

探讨水牛成纤维细胞的分离与传代培养方法。组织块培养法培养的成纤维细胞原代生长较慢,需12天左右方可汇合形成单层,而酶消化法培养的成纤维细胞原代生长相对生长快,仅需8天便可汇合形成单层。两种方法传代细胞的生长速度相似,仅需4-5天就可汇合形成单层。通过体细胞的核型分析发现,成纤维细胞在传代培养过程中的核型变化不大,66．67％～81．67％的细胞具有正常的二倍体核型,各代之间无显著差异。结果表明,水牛成纤维细胞均能稳定地进行传代培养。     

红花单细胞克隆的建立

KT,2,4-D 及 NAA 能提高红花(Cathamus tinctorius)细胞克隆平板培养的植板率。这三种激素对细胞生长的最佳搭配是2,4-D2.0mg/l,KT0.3mg/l,NAA 0.5mg/1。红花细胞悬浮继代培养代数不同,其植板率相差甚远,用悬浮培养第三代的细胞做材料最好,其植板率是第一代悬浮培养细胞做材料的8.5倍。红花细胞克隆的条件培养的植板率是普通平板培养的3.6倍。固-液双层培养的植板率是普通平板培养的4.7倍。对已建立的红花细胞克隆进行生长速率的比较表明,生长最漫的克隆的生长速率为3.08g/g/35天,生长最决的克隆的生长速率高达23.33g/g/35天。     

施氏鲟不同组织来源细胞离体培养的初步研究

采用组织块移植培养技术,对来源于施氏鲟(Amursturgeon,Acipenser schrencki Brandt)肝脏、脾脏、肾脏、鳍条和心脏组织的细胞进行了原代培养,2～3天左右可见组织块周围有成纤维样细胞迁出,10天左右组织块周围形成单层细胞。对原代培养的单层细胞用胰蛋白酶-EDTA消化后传代培养,建立了可连续传代的施氏鲟肝脏、脾脏、肾脏、心脏组织细胞系。初步确立施氏鲟细胞培养的条件,培养基为MEME,培养温度为25℃,血清浓度为20%。对传代培养细胞以二甲基亚砜为保护剂在液氮冷冻保存,细胞复苏后可连续传代培养。施氏鲟细胞离体培养为开展鲟鱼病毒病和遗传资源保存研究提供了重要试验材料。     

BHK_(21)C_(13)细胞的悬浮培养

本文报告BHK_(21)C_(13)细胞的悬浮培养研究。细胞经30天悬浮培养适应后能稳定生长。适应后细胞在所试的199和HL各半量、HTYs、HTYsh和HTYfs培基中都能连续稳定悬浮培养生长。适应后,细胞大小无明显变化;单层培养时生长速度加快;细胞染色体数目发生变化,文內对此作了讨论。     

组织块法和酶消化法体外培养原代鼠阴道上皮细胞的研究

为探讨更佳的阴道上皮细胞体外培养技术,为组织工程化阴道动物模型提供种子细胞,分别应用组织块法和酶消化法原代培养大鼠阴道上皮细胞,观察两种方法细胞生长所需时间、细胞形态和生长特性,免疫组化进行鉴定。结果表明,两种细胞培养方法均能获得不规则圆形或多边形的阴道上皮细胞,其传代后增殖特性和生长曲线基本一致,角蛋白染色阳性,但酶消化法较组织块法细胞贴壁快、生长时间短、产量大、细胞纯度高、能较迅速获得较多细胞用于组织工程阴道的构建。