一种白僵菌代谢产物中生物活性物质的研究 Ⅰ.具有清除自由基的活性物质的分离和制备

通过对白僵菌 Beauveria sp. 的液体培养及生物活性测定,发现该菌代谢产物具有较强的清除自由基的活性,我们用甲醇成功地提取出该活性成分,同时用色谱等方法对该活性成分进行了分离和制备,并用高压液相色谱法和DPPH薄层试验对其纯度及活性进行了检验,得到了具消除自由基活性的纯化合物：P-24-3。     

一种白僵菌代谢产物中生物活性物质的研究——Ⅰ.具有清除自由基？…

通过对白僵菌Ｂｅａｒｖｅｒｉａ ｓｐ．的液体培养及生物活性测定,发现该菌代谢产物个有较强的清除自由基的活性,我们用甲醇成功地提取出该活性成分,同时用色谱等方法对该活性成分进行了分离和制备,并用高压液相色谱法和ＤＰＰＨ薄层试验对其纯讴及活性进行了检验,得到了具消除自由基活性的纯化合物：Ｐ－２４－３。     

一种被毛孢(Hirsutella sp.)培养液中自由基清除剂的分析、分离和制备

[目的]在一次对虫生真菌代谢物进行大规模的清除自由基活性物质筛选中,发现一种被毛孢(Hirsutella sp.)菌株RCEF0881发酵液中存在有较强的清除自由基活性物质.本研究目的是初步搞清这些活性成分的具体组成,并制备出一定量的纯品用于进一步的结构鉴定.[方法]用有机溶剂法提取活性成分;用二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)酶标仪法和薄层色谱法进行活性测定;用高分辨液质联用方法进行活性成分初步分析和鉴定;用反相制备色谱法制备活性组分.[结果]提取实验结果表明具清除自由基活性的物质能较好地被乙酸乙酯提取出来;液相色谱-质谱-活性测定分析表明提取物中活性组分的可能分子式分别为C7H6O4、C8H8O3和C12H14N2O.结合色谱特性、紫外光谱特征、质谱碎片和数据库查询可初步推断它们分别为二羟基苯甲酸、羟基甲基苯甲酸和生物碱类物质,但具体结构还有待于进一步确认.从高效液相色谱和质谱离子流的峰面积可知上述3种活性物质中C12H14N2O的含量最高.本研究成功地用反相制备色谱制备出该天然活性组分的纯品.该3种清除自由基活性物质都是首次发现存在于虫生真菌的代谢物中.     

怀山药醇提取物抗DPPH自由基活性研究

将怀山药乙醇提取物采用溶剂萃取的方法,分成极性不同的五个部分,并首次用DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)方法测定各部分的抗自由基活性,发现乙酸乙酯萃取部分活性最强,氯仿萃取部分次之,再其次是正丁醇和水溶性部分。乙酸乙酯和氯仿萃取部分较强的抗自由基活性主要归因于其中所含的多酚类成分。同时利用薄层层析(TLC)、紫外光谱(UV)、^13C核磁共振(NMR)技术及显色反应对酚性成分进行了定性检验,并用Folin-Denis法测定了各萃取部位中酚性成分含量,发现抗自由基活性与萃取物中多酚性成分含量有一定的相关性。因而在评价怀山药质量时,其中所含的酚性成分不应忽视。     

尼日利亚螫毛果(Cnestis ferruginca)中一种具有清除自由基的活性化合物的分离鉴定

用二苯基苦基苯肼自由基薄层实验法（DPPH-TLC-ASSAY）,从尼日利亚螫毛果（Cnestis ferruginca)植物的甲醇提取物中发现了一种具有很强的清除自由基活性的物质;用柱色谱及反相制备柱色谱（RP-LPPLC）,制备出了该活性物质的纯品;用质谱（HR ESI-MS）,核磁共振氢谱（^1H0,碳谱（^13C,DEPT)。紫外光谱及化学方法对该物质进行了结构鉴定,鉴定结果为对苯酚基-6-O-反式咖啡酸基-β-D-吡喃葡萄糖甙。     

尾叶远志抗氧化活性研究

采自贵州兴义的尾叶远志(Polygala caudata Rehd.et Wils.)根,经乙醇提取,再用不同溶剂萃取和柱层析分离,得到了12个不同的组分.用比色法研究了各组分还原三价铁离子及清除脂性自由基DPPH能力,采用化学发光法观察各组分清除羟自由基和超氧阴离子的活性.研究发现,尾叶远志各组分均有一定的清除自由基作用,并且其活性成分可能主要集中在PC-BuOH组分.     

桦褐孔菌活性物质的提取工艺及体外抗糖尿病活性

对桦褐孔菌活性物质的提取工艺及其体外抗糖尿病活性进行研究。桦褐孔菌子实体用乙醇浸提后,乙醇粗提物用不同有机溶剂萃取,醇提残渣再以热水浸提,用标准曲线法测定活性组分中活性成分的含量,并检测活性物质对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)的清除效果以及对关键糖代谢酶α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果表明:4种活性组分(乙酸乙酯相、正丁醇相、水相和粗多糖)对羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2-·)都有较强的清除作用,其中乙酸乙酯组分的活性最高,乙醇粗提物萃取组分对α-淀粉酶有抑制活性,而粗多糖对α-葡萄糖苷酶有抑制作用;桦褐孔菌具有抗氧化和抗糖尿病活性,其活性与活性物质种类及其含量具有相关性。     

火绒草抗氧化活性成分及其结构分析

通过测定火绒草(Leontopodium leontopodioides)醇提物不同部位的总还原力,羟自由基(.OH)和亚硝酸盐清除活性,表明乙酸乙酯部位能有效浓缩抗氧化的活性物质,具有较强的还原力,以及清除羟基自由基和亚硝酸盐的活性。进一步以火绒草抗氧化活性成分为导向,对醇提物的乙酸乙酯部位进行了硅胶柱层析和制备薄层层析,得到了丰度较高的一个单体化合物,经紫外、红外、氢谱和碳谱分析,推测该化合物的结构为对羟基苯乙酮。     

桦褐孔菌发酵及其提取物清除自由基活性的研究

用1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)酶标仪法,对桦褐孔菌发酵液的甲醇提取物的自由基清除率进行了测定,发现该提取物具有较强的清除自由基的活性;进一步用DPPH薄层试验,结果发现该菌的CHCL3提取物中主要含有两个具清除自由基活性的组分.在此基础上,以清除自由基活性为指标,对桦褐孔菌液体发酵条件进行优化,发现当培养条件为:葡萄糖20g/L、甘油6mL/L、蛋白胨15g/L、CuSO4 0.005g/L、酪氨酸0.05g/L;种龄为7d、装液量为50mL/250mL、转速为180r/min、接种量为10%时,桦褐孔菌发酵液提取物的清除自由基活性最强.     

尼日利亚螫毛果(Cnestis ferruginca)中一种具有清除自由基的活性化合物的分离鉴定

用二苯基苦基苯肼自由基薄层实验法(DPPH-TLC-ASSAY),从尼日利亚螫毛果(Cnestisferruginca)植物的甲醇提取物中发现了一种具有很强的清除自由基活性的物质;用柱色谱及反相制备柱色谱(RP-LPPLC),制备出了该活性物质的纯品;用质谱(HRESI-MS)、核磁共振氢谱(¹H)、碳谱(¹³C、DEPT)、紫外光谱及化学方法对该物质进行了结构鉴定,鉴定结果为对苯酚基-6-O-反式咖啡酸基-β-D-吡喃葡萄糖甙.     

中药美白成分的复配及复方中药发酵液的功效

【目的】通过中药美白成分的复配,进而研究复方中药发酵液活性成分及功效性。【方法】以酪氨酸酶抑制率为指标研究最佳复配含量,采用分光光度法测定复方中药发酵液中总酚、多糖、黄酮、蛋白质含量,通过HPLC技术进行氨基酸分析,抗氧化能力通过总还原力和自由基清除试验进行评价,通过酪氨酸酶活性抑制实验进行美白功效分析。【结果】正交实验得出4种中药美白成分中覆盆子对酪氨酸酶抑制效果最好;复方中药发酵液中多酚、多糖、黄酮和蛋白质含量分别为147.80、4.36、1.17、2.22 g/kg;复方中药发酵液具有较高的总还原力、羟自由基清除能力和DPPH自由基清除能力;5%(W/V)复方中药发酵液的酪氨酸酶活性抑制率为82.41%。【结论】复方中药发酵液中含有多种活性成分,具有一定的抗氧化和美白功效。     

苦碟子注射液抗氧化成分的分离与活性评价研究

苦碟子注射液经盐酸酸化,HPD大孔树脂柱分离,得到总酚酸部分,以抗坏血酸(Vc)做为阳性对照,利用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基法和铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)法对其进行抗氧化活性评价,研究结果表明,总酚酸部分具有较好的抗氧化能力。为此,我们利用大孔树脂柱色谱、MDS-5反相制备色谱对总酚酸进一步分离,共获得6个酚酸类成分。采用上述活性评价的方法对所获得的6个成分进行了抗氧化活性评价,发现除芹菜素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷外,其它5个酚酸类成分均具有很强的抗氧化活性,其清除DPPH自由基能力及总抗氧化能力好于或与阳性对照Vc相当。     

响应面法优化芦荟中抗氧化活性成分的提取工艺

对芦荟中抗氧化活性物质提取工艺及其成分进行研究,通过单因素实验和响应面优化,以提取物对DPPH自由基的清除率为抗氧化的考察指标,得到芦荟中抗氧化活性成分的提取工艺条件:提取温度29 ℃、料液比(g/mL)1:33、提取时间107 s、微波功率500 W,微波辅助水提,此条件下得到的提取物对DPPH自由基的清除率达91.414%.提取物活性成分分析表明:提取物中芦荟甙含量为1.5 mg/g、黄酮为1.13 mg/g、多酚为4.33 mg/g、多糖为126.36 mg/g.     

乌奴龙胆乙醇提取物不同极性部位体外抗氧化性研究

本文以BHT和VC为对照,采用分光光度法,通过四种不同体系对乌奴龙胆乙醇提取物的各个极性部位体外抗氧化活性进行比较研究。结果表明,各极性部位对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除作用,也具有一定的还原能力。其中氯仿部位、乙酸乙酯部位效果最佳,其总还原力和对DPPH自由基的清除作用均优于BHT,本实验结果为扩展乌奴龙胆的应用范围和进一步研究其抗氧化活性成分及新型天然抗氧化剂的开发提供了理论依据。     

本斯石斛花的香气成分及抗氧化活性研究

为探究本斯石斛鲜花的香气组成及抗氧化活性,本文采用溶剂辅助风味蒸馏法对本斯石斛鲜花的挥发性成分进行提取,采用3种体外自由基清除模型结合人永生化皮质细胞内SOD酶活力修复模型对本斯石斛花的提取物进行抗氧化活性评价。通过GC-MS对挥发物的化学组成进行分析,峰面积归一化法确定各化合物的相对百分含量,结合嗅觉阈值所计算得到的气味活度值,确定了本斯石斛鲜花中的关键香气化合物。结果显示:从本斯石斛花挥发物中共鉴定出51种化合物,约占总含量的90.0%,其中关键香气成分16个,包括苯甲醇(45.5%)、香草醛(17.0%)、己醛(3.4%)、苯乙醇(2.7%)等,修饰性香气化合物6个以及潜在香气化合物3个,这些成分共同构成了本斯石斛鲜花具有的青草香、甜香、花香等的香气特征。本斯石斛鲜花高浓度乙醇提取物在羟基自由基清除、DPPH自由基清除、ABTS自由基清除模型、人永生化皮质细胞内SOD酶修复模型评价中均表现出较强的抗氧化活性。本研究为本斯石斛花相关香型日化产品和抗氧化活性物质的研发提供了科学依据。     

2种方法提取绒毛香茶菜精油成分及体外抗氧化能力的比较研究

分别采用微波辅助水蒸气蒸馏法和超声波辅助水蒸气蒸馏法,从新鲜的绒毛香茶菜叶片中提取精油,用GC-MS对精油化学成分进行测定,且对比了2种不同方法提取的精油对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基的清除能力。结果表明:微波辅助水蒸气蒸馏法优于超声波辅助水蒸气蒸馏法,提取率达到0.56%。绒毛香茶菜精油主要成分为烯烃类及酮类,2种方法提取的绒毛香茶菜精油成分中,4-羟基-4-甲基-2-戊酮最多(相对含量在23.23%～42.53%之间),其次是α-萜品烯、萜品油烯、双戊烯和D-柠檬烯。在不同的抗氧化能力评价体系中证实,2种方法提取的绒毛香茶菜精油在(200～1 000)μg/mL浓度梯度范围内均有较强的抗氧化活性,且与精油浓度梯度成正相关。综上所述,2种提取法所得绒毛香茶菜精油的提取率、成分、含量及抗氧化活性等方面均存在一定差异,为绒毛香茶菜精油的深入研究提供了理论基础。     

黄芪有效成分对氧自由基清除作用的ESR研究

用电子自旋共振技术研究了黄芪总黄酮(TFA)、黄芪总皂甙(TSA)和黄芪总多糖(TPA)对次黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶体系产生的超氧阴离子自由基和H₂O₂－Fe²⁺体系产生的羟自由基的清除作用．结果表明,这3种成分均有清除氧自由基的作用;对超氧阴离子自由基的清除效能大于对羟自由基的清除作用;其作用强度依次为TFA＞TSA＞TPA．结果提示清除氧自由基可能是黄芪抗衰老的主要机理之一,TFA和TSA是黄芪抗氧化作用的主要药理活性成分．     

蕈树叶芳香精油成分分析及其抗氧化活性研究

为了解蕈树叶芳香精油化学组分及抗氧化活性,采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)结合Kovats保留指数(K I)比较的方法对其进行了成分分析,并运用二种体外方法对其抗氧化活性进行了测定。结果表明蕈树叶精油以倍半萜烯类为主(占62.39%),主要特征成分为双环大根香叶烯(10.71%)、(E)-丁香烯(9.96%)和α-依兰油烯(8.92%)。该精油具有中等程度的自由基清除活性和抗脂质过氧化活性。其抗氧化活性可能与精油中的酚类物质5-羟基白菖莆烯(2.97%)以及醇类物质1-表橙椒醇(3.12%)和(Z)-白檀油烯醇(2.12%)等化合物有关。     

红托竹荪多糖抗氧化活性的研究

本文采用DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子自由基体系对红托竹荪多糖的抗氧化活性进行了研究,并同Vc和BHT进行了比较.结果表明,在0.2～1.2 mg/mL质量浓度范围内,红托竹荪多糖对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基的半数清除率(EC50)值分别为1.468、2.580和2.330,抗氧化活性稍强于BHT,但弱于VC.     

一株耐热珊瑚共附生真菌的鉴定及抗氧化活性的研究

珊瑚共附生真菌及其代谢产物研究活跃，产物种类多样，活性丰富，但珊瑚中的耐热真菌未见报道。对耐热珊瑚共附生真菌C21-5B进行鉴定，研究其生理学特性及代谢产物的抗氧化活性，为该菌的深入研究及利用提供依据。通过形态学观察、18S rRNA序列分析鉴定菌株；通过测量不同海精盐浓度、pH、温度条件下的菌落直径研究该菌生理特性；根据DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率测定该菌抗氧化活性；通过薄层层析和高效液相色谱分析代谢产物活性成分。珊瑚真菌C21-5B经鉴定为土曲霉（Aspergillus terreus）。生理特性研究表明，菌株C21-5B能够生长的条件：海精盐浓度0.0%~20.0%、pH值 2.0~12.0、温度15~45 ℃；最适生长条件：海精盐浓度0.5%~3.5%、pH值6.0~8.0、温度35 ℃。该菌代谢产物的乙酸乙酯萃取物具有较高的抗氧化活性，DPPH和ABTS自由基的EC50分别为0.113、0.504 mg/mL。经薄层层析和高效液相色谱分析，发现该菌代谢产物的中性极性成分偏多，含有生物碱、类脂化合物、还原性物质、黄酮类物质、芳香胺类。菌株C21-5B为耐热、兼性海洋真菌，具有极强的耐酸碱能力，代谢产物种类丰富，并具有明显的抗氧化活性，具有开发利用潜力。