乙型脑炎病毒寡核苷酸探针的化学合成及初步检测

根据已发表的乙型脑炎病毒核苷酸序列，设计合成了１９寡核苷酸，作为检测该病毒的基因探针。以大肠杆菌ＤＮＡ聚合酶ＩＤｌｅｎｏｗ片段标记合成的寡核苷酸后，经过分子杂交证明该探针能检测出１ｐｇ靶ＤＮＡ七ＪＥＶ感染Ｃ６／３６细胞６小时后的病毒。     

肽缀合反义寡核苷酸的合成和性能

反义寡核苷酸可作为基因表达的抑制剂和潜在的治疗药物,但多种类型的寡核苷酸为聚阴离子化合物,难以跨过细胞膜.已知包括融合肽、信号肽在内的多种生物活性多肽具有跨膜与核定位能力.讨论了反义寡核苷酸-肽缀合物的合成和生物活性.     

含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒设计、合成及高效表达载体的构建

目的:建立一种简便、快捷的基因从头设计、优化与合成策略,进行含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒全合成并构建高效表达载体。方法:以免费软件GeneDesign 3.0为主要平台,同时结合Tandem Repeats Finder、UNAFold等不同生物信息学软件,对含有DnaE基因、合适酶切位点的表达盒进行设计与分段合成;合成寡核苷酸片段通过重叠PCR进行组装与克隆。结果:利用建立的设计流程,合成了大小为44～64 nt的14段寡核苷酸片段,通过重叠PCR,实现了14段寡核苷酸片段的一次性组装,经过克隆、酶切鉴定、序列分析得到了序列完全正确的表达载体。结论:建立了一套有效的、基于免费软件的基因从头设计与合成的策略,构建了可以用于环肽小分子文库表达与筛选的表达载体。     

DNA合成技术及应用

DNA从头合成技术是指以寡核苷酸链为起始的合成DNA片段的技术,其不断进步是合成生物学快速发展的基石之一。常规使用的连接介导的DNA合成技术和PCR介导的DNA合成技术日益成熟,精确合成长度已经达到0．5—1kb。微阵列介导的DNA合成技术不断发展,其低成本、高通量的特点吸引了人们的注意;而酵母体内DNA合成技术的成功探索也为体外DNA合成提供了一种补偿方法。DNA合成在优化密码子用于异源表达、构建异源代谢途径、合成人工基因组以及合成减毒病毒用于疫苗研制等方面有广泛应用。综述了DNA从头合成技术的研究进展,并介绍了DNA合成的前沿应用。     

合成寡核苷酸的简易纯化方法

由手工或机器合成寡核苷酸到使用它们的过程中,纯化步骤经常成为速度限制因素,因为目前采用的常规纯化方法比较繁复,特别当样品数和每份样品量多时,往往难以满足工作的需求。有鉴于此,1986年Lloyd等报道了一个简易的纯化方法,似可克服上述不足。笔者从1986年以来曾多次参照Lloyd等法(仅在某些细节上略作改变)纯化由合成机合成的脱氧寡核苷酸片段(其长度为30-mer—50-mer),效果不错,在此作一介绍,以供参考。     

人生长素基因的合成及克隆

根据人生长素基因的氨基酸序列,选择大肠杆菌所偏好的密码子,人工设计并合成了20个寡核苷酸片断。通过重叠区扩增法,利用PCR成功地合成了人生长激素基因的全序列。经克隆测序,证明已成功地实现了人生长素基因的合成及克隆。     

从碱基到人造生命——基因组的从头合成

人工方法合成基因可通过DNA化学合成,这也是基因获取的手段之一,是密码子优化、蛋白质工程、代谢工程及基因组工程等方面不可缺少的技术。本文从寡核苷酸的合成开始,对短片段DNA的合成、基因长度的DNA合成、基因组长度的DNA合成、长片段及基因组水平的DNA组装、基因组DNA的移植等方面的技术和问题进行了阐述。     

新一代DNA合成器

寡核苷酸化学、计算机技术和仪器设备的迅速发展已繁育出新一代DNA合成器。它们把使精确化学自动化的现代技术结合起来,操作简单,使用方便。五年前一个博士后研究人员要花一周时间才能把一个核苷加到正在生长的寡核苷酸链上去。     

肽核酸及其应用

我们大家都熟知“合成寡核苷酸”是指人工制造的一小段DNA,它严格复制了天然DNA,每段寡核苷酸由5′-OH起始,以3′-OH终止。这种“合成寡核苷酸”已作为探针、引物、连接子和基因片段等广泛用于分子生物学研究。而谈及肽核酸(Peptide Nucleic Acids,PNA)就不如“合成寡核苷酸”那么熟悉了,PNA是由     

α—银环蛇毒素基因的合成与表达

结合国内外的研究现状,以α－银环蛇毒素为例来探讨蛇神经毒素基因在大肠杆菌表达体系中的表达情况及其规模生产的可行性。首先根据文献报道α－银环蛇毒素的氨基酸序列,推导出其ＤＮＡ序列并设计成部分互补的４条寡核苷酸片段,利用ＤＮＡ合成仪人工合成,纯化这４条寡核苷酸片段,通过片段退火,切口补平,连接,克隆,测序鉴定获得了α－银环蛇毒素基因,然后将ａ－银环蛇毒素基因克隆至ｐＧＥＸ－２Ｔ质粒中分别转化ＤＨ５α和