不同灵芝菌株菌丝体乙醇提取物体外抑瘤活性的比较和机理

以人急性早幼粒白血病细胞HL-60细胞株作为模型,用MTT法测定生长抑制率,流式细胞Annexin Ⅴ实验和DNA含量法研究抑瘤机制,比较了8个灵芝Ganoderma lucidum菌株发酵菌丝体乙醇提取物的体外抗肿瘤活性和抑瘤机制。筛选结果得到了能产生高抑瘤活性乙醇提取物的灵芝菌株L5。其对HL-60细胞的抑制率为91.4±0.9%(72小时,125μg/mL); 作用48小时后,13.3%的细胞发生早期凋亡,G0/G1期细胞比例比对照组增加15.9%,而S期细胞比例则下降了8.4%,G2/M期细胞数减少7.6%。本研究证明了灵芝菌丝体乙醇提取物能有效抑制HL-60肿瘤细胞的体外生长,抑制率与菌株相关,其抑瘤机制与细胞G0/G1期阻滞和诱导凋亡有关。     

藻蓝蛋白抑制人结肠癌SW480细胞增殖的初步研究

目的研究藻蓝蛋白对人结肠癌SW480细胞的体外抑瘤作用,为进一步探讨藻蓝蛋白抑制肿瘤的机制提供依据。方法用不同浓度的藻蓝蛋白处理结肠癌SW480细胞后,应用MTT实验来检测藻蓝蛋白对细胞增殖的抑制作用并计算出半数抑制率,利用HE染色法和电镜技术观察凋亡细胞形态结构,采用流式细胞术分析其对SW480细胞周期的影响。结果 MTT试验证明藻蓝蛋白能够抑制SW480细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性;HE染色以及电镜的观察结果显示藻蓝蛋白能够诱导SW480细胞的凋亡,流式细胞术显示SW480细胞被阻滞在G2/M期,G0/G1期细胞比例降低。结论藻蓝蛋白在体外能够抑制结肠癌SW480细胞的增殖,具有可开发人结肠癌治疗光敏剂应用前景。     

利用稻瘟霉分生孢子筛选抗肿瘤放线菌

利用稻瘟霉分生孢子萌发时菌丝形变为指示,从150余株放线菌中筛选到一株抗肿瘤活性很强的菌株JXJ-0108,并从其发酵液中纯化到一个抗肿瘤活性较强的化合物JXJ-0108-1,该化合物在治疗胃癌和肝癌的药物研制中具有潜在的价值。四氮唑盐酶还原法(MTT)体外研究表明,JXJ-0108-1对人肝癌细胞BEL-7402和人胃癌细胞BGC-823的IC50分别为1.63和0.95 ug/mL;流式细胞仪分析表明,分别从0.50和0.30 ug/mL的化合物作用浓度开始,与空白对照组相比,肝癌细胞BEL-7402和胃癌细胞BGC-823的G0/G1、S和G2/M期细胞比例有极显著差异,其中G0/G1和S期细胞比例降低,G2/M期细胞比例上升。本文为抗肿瘤放线菌的筛选及活性成分的跟踪分离提供了一个快速简便的有效方法。     

NGX6基因对人结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响

NGX6基因是新克隆的候选抑瘤基因,研究表明NGX6重表达可抑制结肠癌细胞的增殖.为进一步研究NGX6对细胞周期的影响,采用流式细胞仪检测NGX6重表达对结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响,发现NGX6重表达可增加HT-29细胞在G0/G1期的分布比例,减少了S,G2,M期细胞数.利用蛋白质印迹和流式细胞术分析NGX6转染前后HT-29细胞周期素(cyclins)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor,CKI)的表达变化,发现NGX6可下调HT-29细胞中cyclinE、cyclinD1的表达及上调p27的表达,对cyclinA和cyclinB的表达无明显影响,p16在三组结肠癌细胞中均无表达.研究结果表明,NGX6在HT-29细胞中通过下调cyclinE、cyclinD1和上调p27的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,从而发挥其在结肠癌中的抑瘤作用.     

肿瘤抑素抗肿瘤相关肽对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

肿瘤抑素抗肿瘤相关肽-19肽是由肿瘤抑素185~203位氨基酸组成, 具有直接抑制黑色素瘤细胞生长作用, 但其对肝癌细胞增殖和凋亡是否有影响, 对肝癌是否具有治疗作用还需进一步研究。本研究中采用基因工程技术将合成19肽基因与载体pTYB2重组后进行蛋白表达、纯化获得19肽。通过MTT法、生长曲线观察19肽对人肝癌细胞生长抑制作用; TUNEL标记法、流式细胞仪细胞周期检测法、透射电镜观察19肽对肝癌细胞凋亡的影响; 小鼠H22腹水型转移型肝癌实体瘤抑瘤实验证明其体内的抑瘤作用。MTT实验和生长曲线实验表明随着19肽浓度的增加肝癌细胞的存活率下降。在相同19肽浓度下, 随着作用时间延长存活细胞逐渐减少。电镜观察治疗组细胞出现明显凋亡, 流式细胞仪可检测到前G1峰, TUNEL标记法也证实治疗组可见明显的凋亡细胞, 体内19肽作用的小鼠H22腹水型转移型肝癌的抑瘤率达48.46%。可见, 肿瘤抑素19肽可抑制肝癌细胞生长, 促进肝癌细胞凋亡, 对肝癌具有一定的治疗作用。     

雌激素受体在人舌鳞癌中的表达及β-雌二醇对其增殖的影响

目的：观察雌激素受体（ER）在人舌鳞癌Tca8113细胞系细胞上的表达,研究β－雌二醇（estrabiol,E2)对培养的舌癌细胞增殖的影响。方法：用免疫细胞化学方法和RT－PCR方法检测雌激素受体在人舌鳞癌细胞上的表达,将β－雌二醇（β－E2）作用于体外培养的人舌鳞癌细胞,测定^3H-TdR掺入量,并用流式细胞仪测定细胞周期。结果：经免疫细胞化学和RT－PCR方法可检测到ER－α和ER－β在人舌鳞癌细胞上均有表达,其中ER－β表哒相对较弱。不同浓度的β－E2可增加^3H-TdR掺入量,并存在着剂量效应。106-6mol/L的β－E2能使人舌鳞癌细胞处于G1期的细胞比例从对照组的76．5％下降至62．3％,而处于S期和G2期的细胞比例从23．5％上升至37．7％,细胞的DNA合成增加,促进细胞的增殖。β－E2对舌癌细胞的促增殖作用可被Tamoxifen阻断。结论：在人舌鳞癌细胞上有雌激素受体的表达,且β－E2在体外能明显促进培养的人舌鳞癌细胞的增殖。     

地参多糖对实验肿瘤细胞体内外增殖的影响

旨在研究地参多糖对小鼠体内S180A肿瘤细胞增殖的影响及体外对人肝癌BEL-7402细胞生长的影响.体内实验采用皮下接种小鼠S180A肿瘤细胞,以生理盐水为阴性对照,环磷酰胺为阳性对照,腹腔给药(ip给药)不同剂量地参多糖7d,称取小鼠瘤质量并计算抑瘤率.体外实验采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定地参多糖对体外BEL-7402细胞抗肿瘤活性;倒置荧光显微镜观察地参多糖对BEL-7402细胞形态学的影响;流式细胞术检测地参多糖对人肝癌BEL-7402细胞周期的影响.体内实验结果表明:随着地参多糖浓度的增加,体内对小鼠S180A肿瘤的抑制率逐渐提高,最高抑瘤率可达41.29％ (P＜0.01).体外实验结果表明:随着地参多糖浓度和培养时间的增加,体外培养的BEL-7402细胞存活率逐渐降低,抑制率逐渐增加,细胞出现明显的形态学改变,且能诱导细胞凋亡;流式细胞术证实地参多糖使体外培养的BEL-7402细胞发生G0/G1期阻滞.体内外实验均证实地参多糖具有抗肿瘤作用,值得进一步开发利用.     

木黄酮对人催乳素瘤细胞增殖及其凋亡影响的实验研究

目的：观察木黄酮（genistein,GST)对培养的人垂体催乳素瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法：将CST、β-雌二醇（E2）作用于体外培养的人催乳素瘤细胞,测定MTT值及^3H-TdR掺入量,流式细胞仪测定细胞周期,并用TUNEL法观察细胞凋亡情况。结果：不同浓度的GST可抑制催乳素瘤细胞的增殖,并存在着剂量效应,10^-5mol.L^-1GST可使G1期的细胞比例从对照组的55.3%上升为90.3%;不同浓度的E2以剂量依赖方式刺激催乳素瘤细胞的增殖,并使G2期的细胞比例从对照组的15.6%上升为41.8%,GST和E2的共同作用仍可抑制催乳素瘤细胞的增殖,但抑制程度降低,不同浓度的GST均明显促进催乳素瘤细胞的凋亡,E2对GST的促凋亡作用无明显影响。结论：GST在体外能明显抑制培养人催乳素瘤细胞的增殖,并促进其凋亡,E2可部分拮抗GST的抑制增殖作用,但对其促凋亡作用无明显影响。     

木黄酮对人催乳素瘤细胞增殖及其凋亡影响的实验研究

目的观察木黄酮(genistein,GST)对培养的人垂体催乳素瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法将GST、β-雌二醇(E2)作用于体外培养的人催乳素瘤细胞,测定MTT值及3H-TdR掺入量,流式细胞仪测定细胞周期,并用TUNEL法观察细胞凋亡情况。结果不同浓度的GST可抑制催乳素瘤细胞的增殖,并存在着剂量效应,10-5mol*L-1GST可使G1期的细胞比例从对照组的55.3%上升为90.3%;不同浓度的E2以剂量依赖方式刺激催乳素瘤细胞的增殖,并使G2期的细胞比例从对照组的15.6%上升为41.8%。GST和E2的共同作用仍可抑制催乳素瘤细胞的增殖,但抑制程度降低。不同浓度的GST均明显促进催乳素瘤细胞的凋亡,E2对GST的促凋亡作用无明显影响。结论GST在体外能明显抑制培养人催乳素瘤细胞的增殖,并促进其凋亡。E2可部分拮抗GST的抑制增殖作用,但对其促凋亡作用无明显影响。     

芫菁斑蝥素对喉癌细胞和胃癌细胞的抑制作用

【目的】 研究提取自眼斑芫菁Mylabris cichorii (Linnaeus)体内的斑蝥素对人喉癌HEP-2细胞和人胃癌BGC-823细胞的抑制、以及对细胞周期分布的影响。【方法】 将斑蝥素作用于经体外培养的人喉癌HEP-2细胞和人胃癌BGC-823细胞, 采用MTT法进行体外细胞抑制实验, 测定斑蝥素对这2种癌细胞生长的抑制率与剂量效应;采用流式细胞术测定斑蝥素处理的人喉癌HEP-2细胞的细胞周期;并通过光学显微镜观察其细胞形态学改变。【结果】 斑蝥素浓度为1.28 μmol/L时, 对HEP-2细胞有显著抑制作用, 且随药物浓度升高其抑制作用增强, 呈剂量效应关系, 抑制中浓度为2.88 μmol/L;斑蝥素浓度为20.4 μmol/L时, 对BGC-823细胞有显著抑制作用, 且随药物浓度升高其抑制作用增强, 呈剂量效应关系, 抑制中浓度为54.85 μmol/L。用浓度1.44和2.88 μmol/L的斑蝥素处理HEP-2细胞24 h后, G2-M期分布从8.21%增加到22.29%, S期细胞分布从14.33%增加到21.61%, 且随药物浓度升高其阻滞作用增加, 呈剂量效应关系。G0-G1期细胞分布都有所降低, 从77.45%降低到56.10%, G0-G1期峰前无显著的亚二倍体峰出现, 说明斑蝥素未能够诱导HEP-2细胞发生凋亡。光镜检查显示：HEP-2细胞可出现细胞收缩、胞膜突出、核碎裂等现象。【结论】 斑蝥素对治疗喉癌的效果可能较为理想, 而对胃癌的作用则不明显。     

重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究

目的：通过体外实验,研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响。方法：实验分为空白组,重组人类生长激素组,奥沙利铂组和重组人类生长激素＋奥沙利铂组。用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC．7901细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率,细胞周期和DNA抑制率。结果：体外实验结果表明,重组人类生长激素对SGC．7901细胞株增殖没有明显的促进作用,重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素＋奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性（P〉0．05）,细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-G1期明显增加（P〈0．01）,同时重组人类生长激素＋奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期,细胞数依次下降,DNA抑制率依次增加。重组人类生长激素＋奥沙利铂组与奥沙利铂组相比,细胞抑制率有明显上升趋势。结论：体外实验表明,重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖,与抗癌药物一同使用时,有增加治疗功效的作用。     

桦木酸对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响*

目的:利用不同浓度的桦木酸对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法:桦木酸设4个不同浓度(0、10、20、30 μg/ml),并采用常规化疗药物5-Fu处理作为阳性对照,以探究其对细胞增殖的影响。采用台盼蓝拒染法和吉姆萨染色法分别检测桦木酸对人胃癌SGC-7901细胞生长抑制率及克隆形成率;EdU法检测SGC-7901的细胞增殖;利用流式细胞术检测细胞周期, 应用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞周期蛋白cyclin D1,cyclin B1的mRNA和蛋白表达水平。结果:不同浓度的桦木酸处理人胃癌SGC-7901细胞48 h后,其细胞生长抑制率显著升高(P＜0.05),克隆形成率和细胞增殖率均明显降低(P＜0.01),且呈剂量和时间依赖性;人胃癌SGC-7901细胞被阻滞在G1/G0期,细胞周期蛋白cyclin D1和cyclin B1的mRNA和蛋白表达量也随桦木酸浓度升高而显著降低(P＜0.01)。且与5-Fu对照组相比,桦木酸浓度为20 μg/ml和30 μg/ml时,细胞增殖能力明显降低,细胞周期被抑制,细胞周期蛋白表达量均明显降低(P ＜0.05)。结论:桦木酸通过下调cyclin B1和cyclin D1基因表达,将人胃癌SGC-7901细胞阻滞在G1/G0期,从而抑制细胞增殖。     

罗格列酮抑制人胃腺癌SGC7901增殖机制的研究

目的：探讨在体外不同浓度的过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮（ROZ）对人胃癌细胞系SGC7901的生长及细胞周期的影响。方法：采用MTT法比色实验、集落形成实验、电子显微镜,透射电镜,流式细胞仪分别观察不同浓度罗格列酮0.08μmol/L,0.4μmol/L,2μmol/L,10μmol/L,50μmol/L,作用于SGC7901细胞,对细胞增殖,细胞形态和细胞周期的影响。结果：ROZ可抑制SGC7901细胞的生长以及SGC7901细胞集落的形成,并呈现剂量依赖性,其半数抑制浓度（IC50）约为50μmol/L。透射电镜低倍镜以及高倍下可见凋亡细胞。流式细胞仪结果显示,ROZ可抑制SGC7901细胞,引起G0/G1期细胞大量增加,S期细胞减少,且细胞周期停滞于G1期。结论：ROZ具有抗肿瘤作用,能够抑制SGC7901细胞的增殖并诱导凋亡,这种作用与其诱导细胞周期G0/G1期的停滞和诱导凋亡作用有关。因此,ROZ有望成为胃癌治疗的辅助用药亦或治疗药,PPARγ有潜力成为肿瘤治疗的新靶点。     

低氘环境对胃癌细胞生长影响的体外实验

目的：研究低氘环境对人胃癌细胞（SGC-7901）增殖的影响并初步探讨其相关机制。方法：用含不同氘浓度的蒸馏水（实验组：25 ppm;对照组：150 ppm）配制的RPMI-1640培养基培养胃癌细胞SGC-7901。分别在不同的时间点对两组细胞的增殖率、细胞周期及凋亡情况进行检测,用Western blot法对两组细胞的增殖细胞核抗原蛋白（PCNA）的表达进行检测。结果：低氘环境下SGC-7901细胞的增殖率比对照组低10%左右。低氘环境对细胞的划痕愈合能力及集落形成能力也有显著抑制作用（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,低氘组的细胞G1期细胞的比例增加（P<0.01）,而其所处S期细胞的比例下降（P<0.05）,两组细胞间早凋及晚凋比率差异无统计学意义。Western blot的结果显示低氘环境下培养的胃癌细胞的PCNA的表达明显下降。结论：低氘环境能够抑制胃癌细胞的生长,这可能与低氘环境下胃癌细胞阻滞于G1期及下调其PCNA的表达有关。     

重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究

目的:通过体外实验,研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响。方法:实验分为空白组,重组人类生长激素组,奥沙利铂组和重组人类生长激素+奥沙利铂组。用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC-7901细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率,细胞周期和DNA抑制率。结果:体外实验结果表明,重组人类生长激素对SGC-7901细胞株增殖没有明显的促进作用,重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素+奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性(P>0.05),细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-G1期明显增加(P<0.01),同时重组人类生长激素+奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期,细胞数依次下降,DNA抑制率依次增加。重组人类生长激素+奥沙利铂组与奥沙利铂组相比,细胞抑制率有明显上升趋势。结论:体外实验表明,重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖,与抗癌药物一同使用时,有增加治疗功效的作用。     

不同方法处理的九香虫对人胃癌SGC-7901细胞体外作用比较及其抑癌组分分布

本实验探讨冷冻和传统中药炮制方法处理的九香虫对胃癌细胞增殖的影响及九香虫抑癌活性组分的体内分布。体外培养人胃癌SGC-7901细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察不同方法处理的九香虫各组分水溶液对SGC-7901细胞的体外抑制作用。结果发现,炮制九香虫蛋白浓度为50和100mg·L~(-1)时作用48h对SGC-7901细胞生长具有抑制作用,抑制率分别为13.45%和14.68%,而浓度达到200和400mg·L~(-1)时对SGC-7901细胞生长具有促进作用,抑制率为-7.94%和-82.50%;冷冻处理下九香虫不同浓度对SGC-7901细胞生长具有显著的抑制作用,该处理组蛋白浓度为50、100、200和400mg·L-1时抑制率分别为0.49%,3.82%,4.42%,39.33%。选取九香虫整虫及分解后的各部位处理组最大作用浓度比较,增殖抑制率为血淋巴腹部整虫头部。因此,冷冻处理的九香虫对胃癌细胞抑制率更高,且在该条件下九香虫的抑癌活性组分主要分布于血淋巴和腹部。     

Targeted killing effects of double CD and TK suicide genes controlled by survivin promoter on gastric cancer cell

Suicide genes such as cytosine deaminase (CD) and herpes simplex virus thymidine kinase (TK) encode products that convert nontoxic substances (prodrugs) into toxic metabolites. Studies in recent years indicated that survivin(sur) expression was associated with the biological behaviors of gastric carcinoma. In the present study, targeted killing effects of double CD and TK suicide genes controlled by survivin promoter on gastric cancer cell were investigated, the recombinant pSCT vector containing CD and TK genes driven by sur promoter was constructed and transfected into SGC-7901 cells. After adding the CCV and 5-FC, the effects of double suicide genes on cell growth, cell cycle and proliferation were determined by MTT assay and flow cytometry (FCM). The results showed that sur promoter could specifically drive the expression of double CD/TK gene in SGC-7901 cells, whereas not in the normal GES-1 cell. After using CCV and 5-FC, the growth of SGC-7901 cells was inhibited. G1 phase proportion was significantly higher in SGC-7901 cells transfected with double suicide genes than the untransfected cells. These results suggest that CD and TK double suicide genes driven by sur promoter could provide a new approach for enhancing selective suicide gene therapy of CD/5-FC for the treatment of advanced gastric carcinoma.     

gamma-Tocotrienol induces mitochondria-mediated apoptosis in human gastric adenocarcinoma SGC-7901 cells

Tocotrienols are naturally occurring isoprenoid compounds highly enriched in palm oil, rice bran, oat, wheat germ, barley and rye. Tocotrienols have antioxidant properties as well as potent anticancer properties. In this study, the mechanisms underlying the apoptosis of gamma-tocotrienol on human gastric adenocarcinoma SGC-7901 cells were further studied, especially in correlation with the involvement of the apoptotic pathway. gamma-Tocotrienol inhibited SGC-7901 cell growth in a concentration- and time-dependent manner. The inhibitory effects of SGC-7901 cells were correlated with the DNA damage and arresting cell cycle at G(0)/G(1) phase in a time-dependent manner at 60 mumol/L concentration of gamma-tocotrienol. gamma-Tocotrienol induced activation of caspase-3 and increased the cleavage of the downstream substrate poly(ADP-ribose) polymerase. Furthermore, gamma-tocotrienol-induced apoptosis on SGC-7901 cells was mediated by activation of caspase-9. The data in this study suggested that gamma-tocotrienol could induce the apoptosis on human gastric cancer SGC-7901 cells via mitochondria-dependent apoptosis pathway. Thus, our findings revealed gamma-tocotrienol as a potential, new chemopreventive agent for human gastric cancer.     

白扁豆多糖对人胃癌细胞凋亡的作用及其机制

目的：探讨白扁豆多糖对人胃癌细胞凋亡的作用及其相关机制。方法：胃癌细胞HGC-27和SGC-7901经终浓度为16、8、4、2、1和0 μg/ml的白扁豆多糖作用24、48和72h,各设3个复孔。MTS法检测其增殖活性;分别取经4、0 μg/ml白扁豆多糖作用24h的HGC-27和SGC-7901细胞（各3个复孔）,JC-1染色观察线粒体膜电位,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率,QPCR法探讨Bcl-2、caspase-3和Bax基因的mRNA转录水平。结果：白扁豆多糖作用后,HGC-27和SGC-7901细胞线粒体膜电位降低;细胞增殖显著受抑制（P<0.01）,且效果与药物作用浓度和时间有关;细胞凋亡率分别为53.15%和38.77%,均较PBS处理组（8.07%和6.03%）明显增加（P<0.01）,而细胞周期无显著变化;同时,细胞内Bcl-2基因的转录水平明显受抑制,Bax和caspase-3基因的转录明显上调（P<0.01）。结论：白扁豆多糖可通过调节Bax-Bcl-2-caspase3通路,诱导胃癌细胞HGC-27和SGC-7901凋亡。     

Anti-Proliferation Effect of a Short Peptide on bFGF-Induced Human Gastric Cancer Cells

Gastric cancer is the second cause of the common cancer deaths worldwide. Basic fibroblast growth factor (bFGF) was up-regulated in patients with gastric cancer and was regarded as a potential therapeutic target. We have previously obtained a high-affinity bFGF-binding peptide (named P7) from the phage display random heptapeptide library. In this study, we first proved that P7 peptides inhibited proliferation of gastric cancer cell lines including SGC-7901, AGS, and BGC-823 cells stimulated with bFGF. Further investigations with SGC-7901 cells revealed that the mechanisms of P7 peptides inhibiting bFGF-stimulated cell proliferation in vitro involved cell cycle arrest at the G0/G1 phase, blockade of the activation of Erk and P38 cascades, and suppression of bFGF internalization. The results suggested that the bFGF-binding peptide may have therapeutic potential in gastric cancer therapy.