里氏木霉与米根霉混合固态发酵产纤维素酶

以里氏木霉及米根霉单菌固态发酵为对象,考察不同混合发酵形式对里氏木霉与米根霉混合固态发酵产纤维素酶的影响。结果表明:同时接种里氏木霉与米根霉,试验考察的两菌种接种量比1∶1(以孢子个数计)及5∶1条件下,两菌未产生明显协同产酶作用。米根霉延时(24 h)接种且菌种量比5∶1以及米根霉延时(48 h)接种且菌种量比1∶1,2种发酵形式产酶情况类似,滤纸酶活(FPA)及羧甲基纤维素酶(CMCase)酶活相对米根霉单菌发酵有所提高,而β-葡萄糖苷酶(β-GA)酶活相对里氏木霉单菌固态发酵结束时分别增加4.66及4.40倍,可以发现两菌产生一定协同作用。在米根霉延时(48 h)接种且菌种量比5∶1的发酵形式下,FPA及CMCase在发酵第7天酶活分别达到44.04 IU/g、627.14 U/g(以1 g干曲计),分别是里氏木霉固态单菌发酵产酶达到稳定期时酶活的1.36和1.63倍,两菌产生了有效的协同作用。     

康宁木霉液体深层发酵生产纤维素酶

以康宁木霉（ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉｉ） Ｔ２１５为生产菌,在 ３０ｔ气升式发酵罐中进行了液体深层发酵生产纤维素酶的扩大试验。一、二级罐种子培养基由８％麦麸组成,种龄２４ｈ。产酶培养基由６％稻草粉,１％麦麸和１％蛋白胨组成,起始ｐＨ５．０。每罐装２２ｔ培养基,１０％接种量,通气量０．４ｖｖｍ,罐压０．０８ＭＰａ,２９℃±１℃培养 ９６ｈ。连续试验 ５批,平均发酵液酶活力： ＣＭＣ－Ｎａ活力 ７８．３ＩＵ／ｍＬ,脱脂棉活力 １.３ＩＵ／ｍＬ,水杨苷活力１.４ＩＵ／ｍＬ,滤纸活力     

筛选最佳生物质材料诱导里氏木霉生产纤维素酶

本研究用小麦、芒草、水稻这三种低木质素突变株材料作为新型诱导物筛选的对象,对三种木质纤维素材料进行成分分析,然后利用它们分别作为诱导物诱导里氏木霉生产纤维素酶,对其诱导产生的酶活力,胞外蛋白含量,糖化能力进行比较。结果表明,对里氏木霉产纤维素酶诱导效果最好的是水稻H*14、芒草W56、小麦Q142。相比于玉米秸秆作为诱导物,水稻H*14单独诱导里氏木霉β-葡萄糖苷酶效果最好,β-葡萄糖苷酶酶活提高了75.2%,滤纸酶活提高了86.6%。相比玉米秸秆作为诱导物,芒草W56单独诱导里氏木霉木聚糖酶的效果最好,木聚糖酶酶活力提高了9.93%,内切葡聚糖酶酶活也提高了30.8%。相比玉米秸秆作为诱导物,小麦Q142诱导里氏木霉的外切葡聚糖酶酶活效果最好,里氏木霉的外切葡聚糖酶酶活提高了88.6%。本研究发现低木质素的木质纤维素材料作为诱导物对里氏木霉诱导产酶效果较好,并且促进真菌胞外蛋白的分泌,诱导纤维素酶酶系平衡分泌,使得纤维素酶糖化水解能力的提高。该研究为今后纤维素酶工业化生产提供参考和帮助。     

里氏木霉产纤维素酶研究进展

木质纤维素类生物质被认为是重要且可持续的可再生能源,其主要组成部分是纤维素.纤维素酶是一种能将纤维素分解为葡萄糖的复合酶,能有效地降解木质纤维素生物质.真菌、细菌、放线菌、酵母等多种微生物均可以产生纤维素酶,其中里氏木霉具有完整的纤维素酶系结构,常作为生物技术领域中一个重要菌株,广泛应用于纤维素酶的商业生产.介绍了纤维...     

里氏木霉与黑曲霉混合发酵产纤维素酶及其水解特性

研究了利用里氏木霉和黑曲霉混合培养产纤维素酶,以黑曲霉孢子悬浮液的不同活化浓度及不同的活化时间来寻找2个菌种发挥最大协同作用的结合点以及所产纤维素酶的水解特性。以里氏木霉单一培养和黑曲霉单一培养为参照进行对比研究。底物为农林废弃物之一的玉米秸秆,经过蒸气爆破预处理后,用作产酶C源。结果表明:黑曲霉孢子悬浮液活化浓度为10个/mL,活化时间为12 h时,滤纸酶比酶活最高,达3.32 U/mL,高于里氏木霉单一培养的2.25 U/mL,β-葡萄糖苷酶比酶活达1.32 U/mL,高于里氏木霉单一培养的0.57 U/mL。为进一步验证混合菌产纤维素酶的水解效果,利用混合菌产纤维酶的酶液及里氏木霉产纤维素酶的酶液进行酶水解实验,当酶用量为20 U/g绝干纤维素,底物质量浓度为100 g/L条件下水解48 h,混合菌所产酶液酶解得率达70.00%,高于里氏木霉所产酶液的酶解得率63.05%。实验表明里氏木霉与黑曲霉混合培养产酶是可行的,并优于单一菌种培养。     

人工锌指蛋白介导调控的里氏木霉纤维素酶生产

里氏木霉Trichoderma reesei Rut-C30是目前研究最广泛的纤维素酶生产菌,选育高产纤维素酶的里氏木霉菌株有助于提高木质纤维素资源生物炼制的经济性。利用人工锌指蛋白文库转化T.reeseiRut-C30,筛选获得了两株高产纤维素酶的突变株T. reesei M1和M2,与出发菌株比较,突变株M1和M2滤纸酶活分别提高100%和53%,且M1突变株外泌蛋白量提高69%,M2内切纤维素酶活提高64%。实时定量PCR分析结果表明,与对照菌株相比,突变株M1和M2中主要纤维素酶基因转录均上调,但不同酶基因在两株菌中有不同的变化特征。此外,纤维素酶抑制转录因子基因ace1在两株突变株中都转录下调,而纤维素酶正调控转录因子基因xyr1仅在M1突变株中上调。以上结果表明,不同人工锌指蛋白对纤维素酶活性的影响具有多样性。对这些突变体中人工锌指蛋白靶基因进行深入分析,为进一步深入探究里氏木霉纤维素酶合成调控的机理,以及利用代谢工程选育更高效的产酶菌株提供了基础。     

用木素木霉与凤尾菇菌两菌交替发酵法提高纤维素酶活力研究

用木素木霉和凤尾菇菌研究了它们的交替发酵的酶活力,发现它们交替发酵的酶活力明显比单一菌种培养时为高,两者的差异高的竟达15倍以上,这为提高纤维素酶的产量和酶活性开辟了一条新的酶发酵工艺途径。     

绿色木霉纤维素酶高产突变型的诱变和筛选

1.通过各种化学和物理因素的复合处理,诱发T.viride 285的变异,得到9株较好的突变型。其中典型的是绿色突变型408-2,其纤维素酶活较高、稳定,平均CMC酶活为101毫克/毫升,滤纸酶活为9.3毫克/毫升,比亲本菌株提高3倍。 2.在所使用的诱变剂中以紫外光和亚硝酸为好,特别是将它们进行复合处理时效果更佳。诱变时,降低诱变剂的相对剂量,即缩短处理时间,正变率大幅度提高。     

绿色木霉纤维素酶高产突变型的诱变和筛选

    1．通过各种化学和物理因素的复合处理，诱发T. vi,ide 2” 的变异，得到9株较好的突变型。其中典型的是绿色突变型403-2，其纤维素酶活较高、稳定，平均CMC酶活为101毫克／毫升，滤纸酶活为9.3毫克／毫升，比亲本菌株提高3倍。    2．在所使用的诱变剂中以紫外光和亚硝酸为好，特别是将它们进行复合处理时效果更佳。诱变时，降低诱变剂的相对剂量,即缩短处理时间，正变率大幅度提高。    3.诱变之前采用限量培养液使抱子萌动，可以降低相对剂量，增加抱子对诱变剂的敏感性，提高突变率，增加正变效果。    4.经诱变后得到的突变型遗传性不易稳定，往往发生退化。试验证明，用连续优势选择方法可以选育出种性纯、产量高而稳定的突变型。     5. C 酶是降解夭然纤维素必不可少的成分，因而，用C,酶活表示纤维素酶的离低，菌种的好坏是合理的。测C,酶的底物最好是滤纸。     

用木素木霉与凤尾菇菌两菌交替发酵法提高纤维素酶活力研究

用木素木霉和凤尾菇菌研究了它们的交替发酵的酶活力,发现它们交替发酵的酶活力明显比单一菌种培养时为高,两者的差异高的竟达１５倍以上,这为提高纤维素酶的产量和酶活性开辟了一条新的酶发酵工艺途径。     

里氏木霉半纤维素酶基因的克隆

通过PCR技术从里氏木霉基因组中扩增出基因xyn I,把基因与大肠杆菌质粒相连接,再把重组的质粒转入到感受态的Top10大肠杆菌中,待Top10大肠杆菌产生大量的重组质粒后,用中量制备质粒DNA方法把重组的质粒提取出来,再用双酶切方法检验重组质粒。实验结果显示,已经得到含有重组质粒的大肠杆菌菌落,完成了xyn I基因的克隆。     

里氏木霉纤维素酶产生条件的研究

通过对培养基、水份含量、氮源、培养时间、培养基的起始PH以及培养温度的研究,测定TrichodermareeseiGAB纤维素酶的C₁酶和Cx酶的酶活,找到了一个最佳的条件,即：稻草粉：花生壳=4：1,物料：水份=2：3,以NH₄Cl、（NH₄）₂SO₄、NH₄H₂PO₄为氮源,起始pH为自然pH（约5．8）,在28℃     

培养条件对木霉形成纤维素酶的影响和两种形成纤维素酶的促进剂的初步观察

用液体培养法研究了木霉EA_3-867菌株纤维素酶形成的条件。在所测试的各种粗纤维材料中,稻草粉和黄豆皮的混合物(比例是4:6)是菌株纤维素酶形成的最好基质。若同时加入一些糖类,能显著促进纤维素酶形成。其中半乳糖效果最好,能使酶形成数量提高一倍或更多,葡萄糖和果糖也有一定效果。培养液的初始pH 6～7最有利于纤维素酶形成。稻草中存在着两种天然的纤维素酶形成的促进剂。一种是水溶性的,能和半乳糖起协同作用,共同促进纤维素酶形成。另一种是酯溶性的,不需加入糖类能单独促进纤维素酶形成。     

葡孢霉属(丝孢纲)的重新评价

葡孢霉属的模式种已无从查找,连一张好的绘图也不曾留下。因而,由模式种所代表的属的含意无法考察清楚。但是多年来已形成了一个关于此属的明确概念,且已被真菌学家们所广泛接受。在这种概念下已描述了四个种。鉴于这种情况,我们认为最好的解决办法是承认现状。赞成以绚丽葡孢霉(Botryosporium pulchrum Corda)为本属的补选模式种。考虑到其中两个种在文献中常被混淆,本文首次将关于全部已确认的四个种的描绘放在一起。四个种的简明检索表如下：1)分生孢子梗作双叉式分枝……………………绚丽葡孢霉(Botryosporium pulchrum)1)分生孢子梗不分枝,或偶有分枝,但绝不作双又状……………………22)侧分枝下垂,产孢膨大体简单…………………马德葡孢霉(B. madrasense) 2)侧分枝不作下垂状,每一产孢膨大体裂作数瓣………………………33) 每侧枝端部泡囊生4—6个产孢膨大体,泡囊呈双锥状…………………………长枝葡孢霉(B．Longibrachiatum)3)每侧枝端部通常生2个(极少3个)产孢膨大体,泡囊球状……………………休斯葡孢霉(B．Hughesli)     

里氏木霉VPS13基因缺失对菌丝分支、生孢和纤维素酶产量的影响

【目的】丝状真菌里氏木霉是纤维素酶生产的主要工业真菌。纤维素酶分泌过程中的蛋白运输途径是控制大量纤维素酶成功输出的重要环节,因此,研究蛋白分泌途径的特定靶标基因功能将有助于鉴定纤维素酶运输分泌过程的关键调控因子。本研究借助基因敲除方法将里氏木霉液泡蛋白分选相关基因VPS13缺失,分析了该基因缺失对菌株生长、生孢尤其是纤维素酶分泌的影响。【方法】利用Double-joint PCR技术和同源重组策略构建里氏木霉VPS13基因缺失突变株,通过菌丝培养、显微观察、生孢检测、蛋白与酶活测定,系统比较VPS13基因敲除前后菌株的生长特征、菌丝形态、孢子形成、蛋白分泌以及纤维素酶活等。【结果】成功获得两株VPS13基因缺失株。与出发菌株相比,该基因突变后菌丝蔓延速率明显减慢,但菌体生物量在对数生长期后显著增多。通过显微观察,发现该基因缺失株菌丝更加密集,分支明显增多。此外,该基因缺失也导致菌株生孢延迟。纤维素底物平板分析发现VPS13基因缺失株菌落周围透明圈更加清晰,且透明圈圈径比是出发菌株的4倍,说明降解纤维素的能力有明显提高。进一步的液体发酵实验结果显示,该基因缺失导致蛋白产量及纤维素酶活力分别提高16.4%和21.9%。【结论】里氏木霉VPS13基因在菌丝生长、生孢、蛋白分泌等不同生物学过程中具有功能多样性,且该基因在菌种改良上可以作为提高纤维素酶产量的重要靶点。     

三孢布拉氏霉生产合成β—胡萝卜素的研究：Ⅰ.三孢布拉氏霉负菌优？…

采用紫外照射、亚硝基胍（ＮＴＧ）和离子束综合诱变处理,获得汪株三孢布拉氏霉菌负菌优良菌株ＳＣＢ２０１。在优化了的培养条件下,它与三孢布拉氏霉菌正菌ＳＣＢ２００接合培养产β－胡萝卜素达到２ｇ／１,较其亲株０．２ｇ／１的水平提高１０倍。