用共聚焦显微镜观察ACh及ATP对豚鼠耳蜗外毛细胞Ca^2＋的调控

用激光扫描共聚焦显微镜研究了一般公认的耳蜗传出神经递质乙酰胆碱（ＡＣｈ）和三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对豚鼠耳蜗外毛细胞（ＯＨＣｓ）胞内游离Ｃａ＾２＋浓度（Ｃａ＾２＋）的作用,ＯＨＣｓ用Ｃａ＾２＋敏感荧光染料Ｆｌｕｏ－３着色,胞内Ｃａ＾２＋的分布以细胞底部稍强。ＡＣｈ在ＯＨＣ底部引起Ｃａ＾２＋的缓慢上长并维持在一个较高水平。ＡＴＰ在整个ＯＨＣ引起一个急剧的Ｃａ＾２＋升高,升高幅度在ＯＨＣ顶部最大。随着ＡＴ     

豚鼠耳蜗外毛细胞外向钾电流的研究

哺乳动物耳蜗具有超常的敏感性和频率分析能力 ,这依赖于感觉细胞基底膜的微机械反应。豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜存在电压依赖性Ｋ 通道、Ｃａ2 激活Ｋ 通道和内向钙通道等。文献报道牛蛙壶腹嵴毛细胞有瞬息Ｋ 电流 (ＩＡ) ,然而豚鼠耳蜗外毛细胞是否存在ＩＡ,迄今未见报道。来自脑干的内侧橄榄耳蜗束传出神经纤维大量分布于外毛细胞 ,调控着外毛细胞的功能 ,一般认为乙酰胆碱是耳蜗传出神经递质 ,此外三磷酸腺苷 (ＡＴＰ)对外毛细胞具有神经递质和神经调质双重作用 ,那么是否还有其他的递质发挥作用呢 ?我们应用全细胞膜片钳技术观察了豚鼠…     

MicroRNA调控耳蜗毛细胞发育的分子机制

耳聋是严重影响人类生活质量的全球重大健康问题之一。目前,因耳蜗毛细胞损伤而导致的耳聋疾病尚未有成功的治疗方法。MicroRNA (miRNA)作为一类高度保守的内源性非编码小RNA,在耳蜗以及毛细胞发育过程中发挥着重要作用。本文介绍了miRNA在耳蜗毛细胞产生过程中的时空表达,揭示了其不可或缺的重要作用;同时阐述了miRNA参与调控耳蜗毛细胞发育中相关转录因子的分子机制,为耳聋的毛细胞移植治疗和毛细胞再生研究提供理论参考。     

P物质、脑啡肽在豚鼠耳蜗的分布——免疫组织化学观察

本研究应用免疫组织化学方法系统地观察了P物质(SP)、亮氨酸脑啡肽(L-ENK)在豚鼠耳蜗的分布以及SP、L-ENK免疫反应阳性神经纤维与Corti's器毛细胞之间的关系,结果表明:SP的免疫反应活性(SP-IR)存在于耳蜗螺旋神经节的部分神经细胞及传入神经纤维中,在Corti's器的毛细胞下方亦可见SP免疫反应阳性纤维;L-ENK的免疫反应活性(ENK-IR)存在于耳蜗的传出神经纤维中。节内螺旋束、内螺旋束、隧道螺旋束、横贯纤维均含有大量的L-ENK免疫反应阳性纤维,Cort's器中的L-ENK免疫反应阳性终末与毛细胞之间具有密切接触,由此提示,SP可能为听觉初级传入神经递质之一;L-ENK作为传出神经递质或调质对听觉传入起调控作用。     

豚鼠耳蜗电图慢成分的研究

选用0.8-150Hz的带通滤波,从豚鼠圆窗记录出一负一正相慢电位.实验结果表明.其对0.5kHz短音的反应阈为729dB nHL.较耳蜗电图快成分低38.27dB nHL.通过离断听觉传导径路不同水平对该电位的观察,表明它是毛细胞及听神经电反应的慢成分.而且可能受听觉传出神经的调控.     

豚鼠耳蜗离体外毛细胞的膜电位和离子电流

利用膜片钳技术对分离的豚鼠耳蜗外毛细胞进行了研究,结果表明：（１）新分离的正常ＯＨＣ呈术状,胞膜光滑,胞核位于底部,静纤毛由顶端表皮板伸出,４小时内形态无明显变化。（２）全细胞电压钳记录结合通道阻断剂实验表明,ＯＨＣ膜电流主要由电压依赖性钾离子流组成。（３）利用全细胞记录方式得到的ＯＨＣ静息电位值为－２６±９ｍＶ．     

反义寡核苷酸对丙型肝炎病毒调控基因表达的体外抑制活性研究

为探讨反义寡核苷酸对丙型肝炎病毒的抑制活性,研究和开发新型抗ＨＣＶ药物。采用ＨＣＶ５’ＮＣＲ调控荧光素酶基因的稳定表达细胞株ＨｅｐＧ２．９７０６,评价了３条针对ＨＣＶ调控基因的ＡＳＯＤＮ,即ＨＣＶ３６３,ＨＣＶ３４９及ＨＣＶ２７９。将Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ包封的ＡＳＯＤＮ与ＨｅｐＧ２．９７０６细胞株每天作用５小时,连续３天后检测荧光素酶活性。     

成年与老年大鼠耳蜗核胆碱乙酰化酶免疫组织化学研究

采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法,对成年（２～３月龄）和老年（２０～３６月龄）Ｗｉｓｔａｒ大鼠耳蜗核组织进行ＣｈＡＴ免疫组织化学显色,并利用计算机图像分析系统对免疫反应阳性细胞进行计数。观察老年大鼠耳蜗核组织胆碱乙酰化酶（ＣｈＡＴ）免疫反应的变化,研究其与老年性聋的发病关系。结果发现ＣｈＡＴ免疫反应阳性神经元主要散在分布于背侧核（ＤＣＮ）的梭型细胞层,老年大鼠耳蜗背侧核ＣｈＡＴ阳性细胞数目少于成年组（Ｐ＜０．００１）。实验结果提示,耳蜗核ＣｈＡＴ阳性细胞数目的减少可能与老年性聋的发病有关。     

酸性磷酸酶在豚鼠耳蜗中的显示

采用组织化学方法,与耳蜗膜迷路铺片技术和耳蜗冰冻切片技术相结合。对豚鼠耳蜗进行了观察。正常耳蜗中的酸性磷酸酶主要集中分布在内、外毛细胞的表皮板下,血管纹细胞和Boettcher氏细胞。并对酸性磷酸酶与溶酶体的关系以及毛细胞富含酸性磷酸酶的生理学意义进行了讨论。     

人体耳蜗扫描 电镜观察图像

人体耳蜗是听觉系统的末梢部位,它深藏于颞骨岩部之中,由于颞骨岩部异常坚硬和耳蜗形态特别复杂,因此解剖比较困难。人体耳蜗底部直径约3—4毫米、高约2—3毫米,整个耳蜗为两圈半螺旋。在耳蜗骨螺旋板的边缘分布着许多感觉细胞,其中内毛细胞有一排约3500个,外毛细胞3—4排共约12000个。在骨螺旋板中共有螺旋神经节细胞约     

提高外淋巴钙浓度对耳蜗电位的影响

本实验以人工外淋巴灌流方式,提高豚鼠耳蜗外淋巴液钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ＰＬ）,观察蜗内直流电位（ＥＰ）和耳蜗电图（ＥＣｏｃｈＧ）的变化,ＥＣｏｃｈＧ包括听神经复合动作电位（ＣＡＰ）、耳蜗微音电位（ＣＭ）。结果可见：高钙灌流明显抑制ＣＡＰ幅值,延长同一声强下（９０ｄＢＳＰＬ）Ｎ１－峰潜伏期,但不改变ＣＭ的幅值及总和ＥＰ（Ｇ－ＥＰ）。高钙灌流降低了ＥＰ对噪声的给－撤声反应（ＥＰ－ＯＮ,ＥＰ－ＯＦＦ）和缺氧所得到的最大负ＥＰ（Ｎ－ＥＰ）绝对值。本文分析了外淋巴高钙影响耳蜗电位的可能机制。     

哺乳动物耳蜗外毛细胞的马达蛋白:Prestin

近几年的研究发现,在耳蜗基底膜的外毛细胞膜上有一种新奇的蛋白质:prestin(马达蛋白),它能感受细胞膜电位的变化,进而发生构象改变,引发外毛细胞的形状和表面积的改变.Prestin作为一种独特的马达蛋白,能驱动耳蜗外毛细胞的电能动性(electromotility),产生耳蜗的放大器作用,因而使哺乳动物的听觉具有高度的敏感性,广阔的听觉域,敏锐的频率选择性.这种蛋白质的缺失或基因的突变会导致听觉功能严重受损,对于prestin的深入细致的研究,也许可以使人们进一步认识和理解哺乳动物的听觉调谐机制,通过对这种蛋白质基因的表达的调控,是否能够防治一些与之相关的疾病?这或许将是今后听觉研究领域的一个重要课题.     

耳蜗外毛细胞的几种分离方法的比较及形态学观察

目的:比较几种耳蜗外毛细胞的分离方法及其形态学观察.方法:分别采用三种方法分离耳蜗外毛细胞,并进行了光镜下及耳蜗铺片硝酸银染色下的形态学观察.结果:三种分离方法均可分离出活性良好的耳蜗外毛细胞(OHC); 耳蜗铺片硝酸银染色观察到耳蜗外毛细胞的形态和分布状况.结论:成功地分离出单离的活性良好的耳蜗外毛细胞,这对于深入研究它们的正常生理功能及某些病理状态下的功能及形态变化意义重大.     

回声定位蝙蝠耳蜗毛细胞静纤毛的长度特征

描电子显微镜下观察爪哇大足鼠耳蝠(Myotis adversus)、白腹管鼻蝠(Murina leucogaster)、山蝠(Nyctalus plancyi)和马铁菊头蝠(Rhinolophus ferrumequinum)耳蜗毛细胞静纤毛, 测量其长度, 并与五种非回声定位哺乳动物耳蜗静纤毛长度进行比较. 研究发现: 回声定位蝙蝠耳蜗外毛细胞静纤毛较非回声定位哺乳动物相应位置的短; 回声定位蝙蝠耳蜗内毛细胞静纤毛长于其外毛细胞静纤毛, 而非回声定位哺乳动物内毛细胞静纤毛长度并无此规律. 我们认为, 回声定位蝙蝠耳蜗听毛细胞静纤毛长度的特点可能是对高频声波和回声定位适应的结果.     

昼夜节律调节耳蜗对噪声敏感性研究进展

强烈的噪声会损伤耳蜗毛细胞、听神经、耳蜗毛细胞与听神经之间的突触连接,造成噪声性听力损失(noise-induced hearingloss,NIHL)。近年来的研究显示,动物耳蜗具有昼夜节律性,使得它们对昼夜噪声的敏感性不同。耳蜗昼夜节律与脑源性神经营养因子以及糖皮质激素水平之间存在着一定的关系,从而影响动物噪声暴露后听力损失的程度。本文综述了昼夜节律调节耳蜗对噪声敏感性研究进展,并对未来的研究方向进行了展望。     

快蛋白--耳蜗外毛细胞的一种新型马达蛋白

哺乳动物耳蜗外毛细胞(out hair cell,0HC)在机械刺激引起的膜电位改变的条件下,其胞体本身能发生与声音刺激相同步的伸长与收缩反应,即膜电位去极化时收缩,超极化时伸长,称为电能动性。它能反馈能量到振动的基底膜,对声音刺激起更精细的放大作用。这一发现使耳蜗对声音放大有了主动性的一面。目前发现一种新型的马达蛋白——快蛋白(prestin)是外毛细胞电能动性的分子基础。从而为在分子水平揭示耳蜗的主动功能提供了依据。     

降低外淋巴钙浓度对耳蜗电位的影响

本实验在人工灌流条件下降低鼓阶外淋巴钙的浓度,观察其对听神经动作电位（ＣＡＰ）、耳蜗微音器电位（ＣＭ）以及蜗内直流电位（ＥＰ）的影响,以分析钙离子的作用机制。无钙液鼓阶灌流使ＣＡＰ、ＣＭ幅度可逆地下降,但不明显地改变ＣＡＰＩ／Ｏ曲线的非线性特征。无钙外淋巴灌流并不改变ＥＰ以及用缺氧法得到的负相ＥＰ（Ｎ－ＥＰ）,但使ＥＰ对强声给－撤时的快速变化趋于消失。本文讨论了这些耳蜗生物电改变所提示的钙离子作用的可能机制。     

乙型肝炎病人重叠感染丙型肝炎的评价

应用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ法检测５０２例乙肝病人血清,４０１例ＨＢｓＡｇ阳性血清中,有１１４例（２８．４％）抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ双项阳性,２５例（６．２％）ＨＣＶＲＮＡ单项阳性;２１例（５．２％）抗－ＨＣＶ单项阳性。将ＨＢｓＡｇ乙肝病人分成ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阳性组和ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阴性组。前者抗－ＨＣＶ阳性率为１１．６％～２０．５％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为１６．２％～２０．５％。后者抗－ＨＣＶ阳性率为２０．２％～５５．６％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为２３％～６０．３％。结果说明长期携带ＨＢＶ者和慢性乙肝病人均可重叠ＨＣＶ感染。ＨＢＶＤＮＡ阳性组抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性率明显高于ＨＢＶＤＮＡ阳性组     

丁胺卡那霉素对耳蜗外毛细胞运动及胞内游离钙的影响

本文运用连续录像手段和荧光测钙技术研究丁胺卡那霉素对离体耳蜗外毛细胞运动及胞内游离钙浓度的影响。结果显示：（１）正常状态下外毛细胞内游离钙的荧光比值为１．３９±０．０９（ｘ±ｓｘ,ｎ＝１５）;从等渗环境进入低渗环境外毛细胞变短变粗（Ｐ＜０．０５,ｎ＝７。（２）丁胺卡那霉素（６．６７ｍｇ／ｍｌ）可使外毛细胞胞膜皱缩内陷,局部直径明显变细（Ｐ＜０．０１,ｎ＝１９）,即使在低渗环境中也难以恢复原状。（３）丁胺卡那霉素（３．２３ｍｇ／ｍｌ）可瞬间降低细胞内钙离子浓度,使荧光比值降低１４．６８±２．０５％（Ｐ＜０．０１,ｎ＝１２）。提示丁胺卡那霉素的耳毒性作用机制可能通过降低细胞内游离钙浓度,进而影响外毛细胞钙依赖性的“慢能动性”运动     

庆大霉素对豚鼠耳蜗一氧化氮合酶活性的影响

目的：研究庆大霉素（ＧＭ） 致聋豚鼠耳蜗一氧化氮合酶（ＮＯＳ） 的分布及其变化,探讨一氧化氮（ＮＯ） 与ＧＭ 耳毒机制的关系。方法：ＮＡＤＰＨｄ 酶组化方法及显微图像分析技术。结果：ＧＭ 致聋后,ＮＯＳ 阳性反应物密度在血管纹、内毛细胞、外毛细胞、螺旋神经节、听神经纤维的分布均比对照组明显增高（ Ｐ＜ ０ ．００１）;上述部位的ＮＯＳ平均灰度值降低与对照组相比有显著差异（ Ｐ＜ ０ ．００１）;ＡＢＲ 听阈变化与ＮＯＳ平均密度及灰度值变化高度相关（ 上述各部位ｒ 值范围,ｒ密度听阈：０ ．９１４０～０．８６９８;ｒ灰度听阈：－０ ．７８９２ ～－ ０．９３４７;Ｐ＜ ０．０１）。结论：①ＮＯ 可能与ＧＭ的耳毒作用机制有关,是耳毒作用的重要因素之一;②ＧＭ 耳毒作用部位不仅发生在血管纹和外毛细胞,而且还涉及到内毛细胞、螺旋神经节及听神经纤维