酶母K.cicerisporus基因组中有启动子功能的DNA片段的克隆

利用以３′－氨基糖苷磷酸转移酶基因（ＡＰＨＩ）为报道基因的一套启动子探针质粒ｐＳＫ－ｋａｎ４０１、ｐＳＫ－ｋａｎ１１０５、ｐＳＫ－ｋａｎ１２３８,从酵母Ｋｌｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｃｉｃｅｒｉｓｐｏｒｕｓ基因组中克隆到８个有较强启动功能的ＤＮＡ片段,分析出３′端ＤＮＡ序列,并在酵母Ｋｌｕｙｖｅｒｏ８ｍｙｃｅｓｅ ｌａｃｔｉｓ中通过检测报告基因与３－磷酸甘油醛脱氢酶基因（ＡＰＤＨ）的ｍＲＮＡ表达量的比     

猪胰岛素前体在酵母Kluyveromyces lactis中的分泌…

通过对包括猪胰岛素前体（ＰＩＰ）基因在内的表达框架克隆至质粒ｐＫＤ１衍生的两种载体上而在酵母Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ中分泌表达猪胰岛素前体。根据放射免疫测定结果,猪胰岛素前体的表达水平为２０－３０ｍｇ／Ｌ,猪胰素胶体经过胰肽被转变基因工程人胰岛素,分析结果表明,来自Ｋ．ｌａｃｔｉｓ的人胰岛素,其氨基酸组成、晶体形状和生物活力天然胰岛素相同。     

酵母K.cicerisporus基因组中有启动子功能的DNA片段的克隆

利用以３′－氨基糖苷磷酸转移酶基因（ＡＰＨＩ）为报告基因的一套启动子探针质粒ｐＳＫ－ｋａｎ４０１、ｐＳＫ－ｋａｎ１１０５、ｐＳＫ－ｋａｎ１２３８,从酵母Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｃｉｃｅｒｉｓｐｏｒｕｓ基因组中克隆到８个有较强启动功能的ＤＮＡ片段,分析出３′端ＤＮＡ序列,并在酵母Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓ中通过检测报告基因与３－磷酸甘油醛脱氢酶基因（ＧＡＰＤＨ）的ｍＲＮＡ表达量的比值,确定它们的功能强度,其中ｐＳＫ－ｋａｎ４０１－４１和ｐＳＫ－ｋａｎ１１０５－５１两个克隆的插入片段具有较强的启动子功能,并证明这两个片段在酵母Ｋ．ｃｉｃｅｒｉｓｐｏｒｕｓ中也有启动子功能。     

马铃薯Patatin class—I启动子及信号肽基因的克隆和序列分析

为利用ｐａｔａｔｉｎ ｃｌａｓｓ－Ｉ启动子的块茎表达专一性以达到马苓薯的目的,利用ＰＣＲ技术从马铃薯总ＤＮＡ中扩增出Ｐａｔａｉｔｎ ｃｌａｓｓ－Ｉ启动子及信号肽基因,并将其克隆;序列分析发现该基因片段与已发表ｃＤＮＡ相应片段约９４％同源。     

猪胰岛素前体在酵母Kluyveromyces lactis中的分泌表达及其转化为人胰岛素

通过将包括猪胰岛素前体（ＰＩＰ）基因在内的表达框架克隆至质粒ｐＫＤ１衍生的两种载体上而在酵母Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓ中分泌表达猪胰岛素前体。根据放射免疫测定结果,猪胰岛素前体的表达水平为２０～３０ｍｇ／Ｌ。猪胰岛素前体经过转肽被转变为基因工程人胰岛素。分析结果表明,来自Ｋ．ｌａｃｔｉｓ的人胰岛素,其氨基酸组成、晶体形状和生物活力与天然胰岛素相同。     

12株酵母菌的亲缘关系分析

克隆了９株假线酵母和１株克鲁维酵母的２５ＳｒＤＮＡ片段,测定其５′端部分苷酸序列与报道的Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ及Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ２５ＳｒＤＮＡ相应区域的核苷酸序列比较,采用ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ和ｂｏｏｔ－ｓｔｒａｐ法分析并绘制系统树,结果提示ＣａｎｄｉｄａｋｅｆｙｒＣＢＳ８３４与Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｃｉｃｅｒｉｓｐｏｒｕｓＣＢＳ４８５７亲缘     

乳酸克鲁维酵母LAC4启动子的克隆及UASⅡ功能的研究

用ＰＣＲ方法取得乳酸克鲁维酵母ＣＢＳ１４１和ＬＡＣ４基因从－６６１到＝２１ｂｐ区段与大肠杆菌ｌａｃＺ基因融合构建成表达载体ＹＦＤ１１４并转化Ｋ．ｌａｃｔｉｓＹ１６７。通过半乳糖,乳糖,山梨醇或ＩＰＴＧ诱导,我们研究了所克隆的ＡＬＣ４启动子的功能。     

草鱼出血病病毒基因组的cDNA合成、克隆及部分序列分析

采用差速离心的方法纯化感染草鱼出血病病毒的细胞悬液。提纯的病毒粒子经蛋白酶Ｋ处理和酚氯仿抽提,在１％琼脂糖凝胶电泳条件下分离得到１１条ｄｓＲＮＡ,利用柱离心式胶回收试剂盒纯化各基因片段。纯化的ｄｓＲＮＡ溶于９０％的ＤＭＳＯ中,７０℃变性１５ｍｉｎ,然后采用随机引物法反转录合成各基因片段的ｃＤＮＡ,并平头连接于ｐＺＥｒＯ２．０载体的ＥｃｏＲＶ位点,电转化ＴＯＰ１０感受态细胞。重组质粒经酶切、ＰＣＲ扩增得到大小不等的插入片段,ｃＤＮＡＲＮＡ斑点杂交的结果进一步证实其插入为目的基因片段。采用循环ＰＣＲ测序的方法,对其插入片段进行了序列测定,对其中第１１片段的部分序列作了报道。     

马铃薯Patatinclass－Ⅰ启动子及信号肽基因的克隆和序列分析

为利用Ｐａｔａｔｉｎｃｌａｓｓ－Ⅰ启动子的块茎表达专一性以达到改良马铃薯的目的,利用ＰＣＲ技术从马铃薯总ＤＮＡ中扩增出Ｐａｔａｔｉｎｃｌａｓｓ－Ⅰ启动子及信号肽基因,并将其克隆：序列分析发现该基因片段与已发表的ＣＮＤＡ相应片段约９４％同源。     

人肝金属硫蛋白突变体β基因通过同源重组在蓝藻中的克隆与表达

将人肝金属硫蛋白（ＭＴ）突变体β基因插入到中间载体ｐＲＬ－４３９上的强启动子ＰｐｓｂＡ 下游,利用载体ｐＲＬ－β上的ＰｐｓｂＡ 和β基因与ｐｈａｓｍ ｉｄ ｐＴＺ１８－８上整合平台ＰｓｂＢ,构建整合表达载体ｐＴＺ－β．整合平台ＰｓｂＢ与集胞藻（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓｓｐ．ＰＣＣ６８０３）染色体ＤＮＡ 上ｐｓｂＢ基因下游片段为同源序列．为了发生单交换同源重组,将外源基因β插入到整合平台ＰｓｂＢ下游的克隆位点．利用自然转化方法将表达载体ｐＴＺ－β整合到Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｔｓｐ．ＰＣＣ６８０３的染色体上．经氨苄青霉素筛选得到遗传性状稳定的转基因蓝藻．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 证明β基因已整合到Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．ＰＣＣ６８０３的染色体上;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 表明β基因已在蓝藻中表达．ＥＬＩＳＡ 测定在Ｚｎ２＋ 浓度为１５０ μｍ ｌ／Ｌ时表达量最高,为５９０ μｇ／ｇ 鲜藻;原子吸收表明转β基因的藻对Ｚｎ２＋ 的富集能力约为野生型的２倍．     

探讨rDNA ITS区作为果蝇Drosophila nasuta分子系统发育研究的价值

测定了果蝇ｎａｓｕｔａ亚群７个分类元和外群Ｄ．ｉｍｍｉｇｒａｎｓ的核糖体基因转录间隔区（ＩＴＳ,ｉｎｔｅｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ）,包括５．８ＳｒＤＮＡ和２ＳｒＤＮＡ长约１．１ｋｂ的ＤＮＡ片段序列。结果表明：Ｄ．ｐａｌｌｉｄｉｆｒｏｎｓ、Ｔａｘｏｎ Ｉ、Ｔａｘｏｎ Ｊ享有共同的序列;Ｄ．ａｌｂｏｍｉｃａｎｓ则与Ｄ．ｓ．ｎｅｏｎａｓｕｔａ共享１个序列。序列之间存在少量的插入缺失和碱基替代。     

枯草芽孢杆菌bgIS基因在酵母染色体上整合

将枯草杆菌β－１,３－１,４－葡聚糖酶基因（ｂｇＩＳ）２．７ｋｂＥｃｏＲＩ片段和酵母染色体ｒＤＮＡ片段克隆到整合型不含酵母自主复制序列（Ａｕｔｏｎｏｍｕｓｌｙ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）的大肠杆菌／酵母菌穿梭质粒ＹＩＰ５上,构建成ＹＩＰ５－ｂｇＩＳ－ｒＤＮＡ的杂种质粒ＰＣＺＨ,转化Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ并得到表达。稳定性测定表明,Ｙ３３（ＰＣＺＨ１０１）和Ｙ３３（ＰＣＺＨ１０４）     

马铃薯class I patatin基因家族的一个新亚型

马铃薯ｃｌａｓｓⅠ与ｃｌａｓｓⅡｐａｔａｔｉｎ基因是具有不同组织表达专一性的一个多基因家族。用马铃薯ｃｌａｓｓⅡｐａｔａｔｉｎ启动子为探针,从中国马铃薯栽培品种“东农３０３”基因文库中筛选到一个ｃｌａｓｓⅠｐａｔａｔｉｎ基因。测定其ＤＮＡ顺序１．８ｋｂ;它包括ｐａｔａｔｉｎ基因５＇侧翼区１４０７ｂｐ、结构基因３６３ｂｐ。根据５＇端非翻译区顺序,它属ｃｌａｓｓⅠｐａｔａｔｉｎ基因。该基因的５＇侧翼区     

二种淡水微囊藻rDNA16S-23S基因间隔区的序列测定与分析

本研究采用ＰＣＲ及序列测定的方法,对我国淡水铜绿微囊藻有毒株和另一低毒的种类惠氏微囊藻（Ｍ５７４）ｒＤＮＡ１６Ｓ－２３Ｓ基因间隔区进行了序列的测定和分析,结果表明：ｒＤＮＡ１６Ｓ－２３Ｓ基因间隔区可以作为一个精细且稳定的指标,用一微囊藻的分类和鉴定。并从分子水平提出了同囊藻与惠氏微囊藻在种系有较近缘的关系,本文首次对微落属ＭｉｃｒｏｃｙｓｔｉｓｒＤＮＡ基因间隔区全序列作了报道。为微囊藻属的鉴定及系     

MHC Class Ib grc—G／C基因的研究进展

ＭＨＣ的ｃｌａｓｓ基因,可分为经典的ｃｌａｓｓ Ｉ和非经典的ｃｌａｓｓＩ,后者称ｃｌａｓｓ Ｉｂ。ｃｌｓｓ Ｉ与β／β Ｔ细胞相关在细胞表面高密度表达,ｃｌａｓｓ Ｉｂ在细胞表面弱表达,其功能尚不清楚,ｃｌａｓｓ Ｉｂ的基因区域中含有一个ｇｒｃ区域,ｇｒｃ基因的ｒｃｃ,ｆｔ,ｄｗ－３三组基因组成。     

17个新的C2H2型锌指基因片段的分离与克隆

按照Ｃ２Ｈ２型锌指基因保守结构域的ＤＮＡ序列设计一对简并引物,以人基因组ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ同源扩增,将由此获得的锌指基因片段为探针,从人胎肾、骨骼肌、骨骼组织的ｃＤＮＡ分子库中筛选到２２个Ｃ２Ｈ２型锌指蛋白ｃＤＮＡ片段,经国际ＮＣＢＩ数据库查询检索,其中１７个为新的锌指基因片段。对从胎肾ｃＤＮＡ分子库中分离到的Ｋ３－４和Ｋ５－１２克隆进行了表达谱分析,发现Ｋ３－４在肾脏中的表达量明显高于其他几     

固氮酶结构基因在联合固氮菌Klebsiellaplanticola19—1细胞中的定位

用Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍ ｏｎｉａｅｎｉｆＨＤＫ 为探针与Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｌａｎｔｉｃｏｌａ １９－１ ＤＮＡ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交表明,Ｋ．ｐｌａｎｔｉｃｏｌａ １９－１ 中存在与ｎｉｆＨＤＫ 同源的片段。用凝胶内溶菌及电场倒转技术检测在Ｋ．ｐｌａｎｔｉｃｏｌａ １９－１ 中存在一大质粒。用Ｋ．ｐｎｅｕｍ ｏｎｉａｅ ｎｉｆ ＨＤＫ 探针与大质粒ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ 杂交证明固氮酶结构基因定位于大质粒     

环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因的克隆

环状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）Ｃ２总ＤＮＡ经ＰｓｔＩ部分酶切后分离２～１０ｋｂ的片段,插入质粒ｐＵＣ１９的ＰｓｔＩ位点,转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）,利用几丁质平板从约８０００个重组子中筛选到一个几丁酶基因阳性克隆（命名为ｐＣＨＴ１）。用１２种限制酶对重组质粒进行的酶切分析表明,重组质粒中的插入片段长３０ｋｂ,其中各有一个ＫｐｎＩ,ＳａｃＩ和ＳｓｐＩ位点。把该克隆片段反向插入ｐＵＣ１９的ＰｓｔＩ位点所得到的重组子同样具有几丁酶基因表达活性,说明此片段含有一个完整的几丁酶基因,其自身的启动子能被大肠杆菌转录系统所识别。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实了该片段来自于Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓＣ２基因组,且以单拷贝形式存在,它不能与来自于其它７株几丁酶产生菌的总ＤＮＡ杂交。     

酵母K.fragilis甘油醛—3—磷酸脱氢酶基因的克隆

根据已克隆的马克斯克鲁维酵母（Ｋ．ｍａｒｘｉａｕｓ）,乳酸克鲁维酵母（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）与酿酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｅｉａｅ）甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰ）基因的核苷酸序列同源性分析设计ＧＡＰ探针,以该探针与脆壁克鲁维酵母（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）ＣＢＳ３９７基因文库进行原位杂交,得到一阳性克隆ｐＧ１并通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交实验得以证实。该克隆所携带的ＧＡＰ１基因的部分序列也已被测定。利用     

氧化诱导K_(562)细胞凋亡机制的初步探讨

以过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）诱导人慢性髓细胞白血病（Ｋ５６２）细胞为凋亡模型,采用流式细胞仪（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ,ＦＣＭ）和激光共聚焦扫描显微镜（ｌａｓｅｒｃｏｎｆｏｃａｌｓｃａｎｎｉｎｇｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ,ＬＣＳＭ）研究细胞凋亡,形态观察出现核固缩,核碎裂及凋亡小体等典型凋亡特征．ＤＮＡ电泳图谱出现“Ｌａｄｄｅｒ”．ＦＣＭ检测在Ｇ０／Ｇ１峰前出现一低ＤＮＡ含量的凋亡峰．ＬＣＳＭ显示凋亡细胞ｃ－Ｆｏｓ．ｃ－Ｊｕｎ和ＮＦκＢ表达量均有不同程度的增加．该结果提示上述三种转录因子可能参与氧化诱导凋亡过程中基因的调控作用．