G蛋白偶联受体激活丝裂原活化蛋白激酶的机理

多种Ｇ蛋白偶联受体的均能激活丝裂原活化蛋白激酶。Ｇｉ蛋白偶联受体主要通过其βγ亚基,依赖Ｒａｓ蛋白途径;在大多数哺乳类细胞中Ｇｓ蛋白偶联受体通过ＰＫＡ途径抑制Ｒａｓ依赖的ＭＡＰＫ活化,但在ＣＯＳ－７细胞,Ｇｓ蛋白偶联受体通过ＰＫＡ途径使表达的ＭＡＰＫ活化;Ｇｑ蛋白偶联受体主要通过ＰＫＣ途径依赖或非依赖于Ｒａｓ使ＭＡＰＫ活化。ＭＡＰＫ信号途径中ＥＧＦ受体,酪氨酸激酶及调节蛋白Ｓｈｃ等联级反应蛋白可能     

丝裂素活化蛋白激酶参与内皮素刺激的兔主动脉平滑肌细胞增生

内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ,ＥＴ）是已知的体内活性最强的缩血管物质,其缩血管作用由Ｇ蛋白偶联受体所介导。但ＥＴ强大的促血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增生效应的机理尚未完全阐明。本研究选用培养的兔胸主动脉ＶＳＭＣ,探讨丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）在ＥＴ促细胞增生中的作用。结果表明：ＥＴ－１呈时间和浓度依赖性地促进细胞摄取￣３Ｈ－ＴｄＲ和激活ＭＡＰＫ,此作用可被蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ,ＰＫＣ）抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）,Ｈ－７和ＥＴ＿Ａ受体拮抗剂ＢＱ１２３所抑制,但不被酪氨酸激酶抑制剂ＨｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ（Ｈｅｒｂ）所抑制,用ＰＫＣ激动剂ＰＭＡ（Ｐｈｏｒｂｏｌｍｙｒｉｓｔａｔｅａｃｅｔａｔｅ）预处理ＶＳＭＣ,使其ＰＫＣ活性下调,可显著减弱ＥＴ－１对ＭＡＰＫ的激活能力。本结果提示：（１）ＭＡＰＫ参与ＥＴ－１所致的ＶＳＭＣ增生;（２）ＥＴ－１促细胞增生与激活ＭＡＰＫ的作用是由ＥＴ＿Ａ受体和ＰＫＣ介导的。     

蛋白激酶C对酪氨酸蛋白激酶系统的调节

本文论述了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）对生长因子受体激活的Ｒａｓ／ＭＡＰＫ途径的多种调节,其中,有直接的也有间接的,有激活也有抑制。这些不同水平不同性质的调节使细胞对外来刺激作出相应的反应。由于ＰＫＣ和Ｃａ＾２＋是肌醇磷脂系统中十分重要的两个组分,本文所论述的也是目前所知的肌醇磷脂系统对酪氨酸蛋白激酶系统调节的主要过程。     

佛波酯引起蛋白激酶C下降调节的专一性

探讨了佛波酯（ＰＭＡ）对蛋白激酶的下降调节是否有激酶专一性及亚型专一性．用组蛋白Ｈ１作为蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）的受体底物,加入ＰＫＣ和ＰＫＡ的特异性激活剂区分ＰＫＣ和ＰＫＡ,用聚谷酪（４１）为酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）的专一性受体底物,以３２Ｐ－ＡＴＰ为３２Ｐ共同供体底物测定三种蛋白激酶的活力,并用免疫组化法测定ＰＫＣ亚型．结果发现ＰＭＡ对人７７２１肝癌细胞只引起ＰＫＣ而不引起ＰＫＡ和ＴＰＫ的下降调节,ＰＫＣ的非特异性抑制剂槲皮素和特异性抑制剂Ｄ－鞘氨醇能大部分取消ＰＭＡ对ＰＫＣ的下降调节,但ＴＰＫ抑制剂ｇｅｎｅｓｔｅｉｎ则没有阻断下降调节的作用．用ＨＬ－６０细胞还证明ＰＭＡ只对含量丰富的ＰＫＣα和ＰＫＣβⅡ亚型而不对含量很少的ＰＫＣβⅠ亚型发生下降调节．上述结果说明ＰＭＡ对蛋白激酶的下降调节有激酶和亚型专一性．     

蛋白激酶C-θ选择性调节T细胞活化

蛋白激酶Ｃ┐θ选择性调节Ｔ细胞活化已知，丝／苏氨酸蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）家族与Ｔ细胞活化有关，但不知ＰＫＣ家族中的哪个成员调节Ｔ细胞对外来抗原的反应。ＭｏｎｋｓＣＲＦ等根据抗原递呈细胞（ＡＰＣ）对Ｔ细胞的活化局限于二者的接触点，在接触点处Ｔ细胞的受体与...     

MKP—1在血管紧张素Ⅱ导致心肌肥大反应中的调控作用

本研究主要从丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶－１（ＭＫＰ－１）角度,研究丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）信号途径在血管紧张素Ⅱ介导的新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用及调控机制。实验以心肌细胞蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积作为心肌肥大反应的指标,以凝胶内ＭＢＰ原位磷酸化测定ＭＡＰＫ活性,以免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｏｌｔｔｉｎｇ）分别测定ＭＫＰ－１及磷酸化ｐ４４ＭＡＰＫ、ｐ４２ＭＡＰＫ蛋白表达。结果发     

5-HT和NA增强大鼠骶髓后连合核神经元甘氨酸门控Cl~-通道电流由蛋白激酶介导

用制霉菌素穿孔膜片钳方法研究５－ＨＴ和ＮＡ对急性分离的大鼠骶髓后连合核神经元甘氨酸门控氯离子通道电流（ＩＧｌｙ）的调控作用及其胞内机制。发现：（１）５－ＨＴ激活与非胰岛激活蛋白（ＩＡＰ）敏感型Ｇ蛋白偶联的５－ＨＴ２受体亚型,激活磷脂酶Ｃ（ＰＬＣ）,增加甘油二酯（ＤＡＧ）的生成。ＤＡＧ增强不依赖Ｃａ２＋的新型ＰＫＣ（ｎＰＫＣ）的活性,从而增强ＩＧｌｙ;（２）ＮＡ激活与ＩＡＰ敏感型Ｇ蛋白偶联的α２受体,抑制腺苷酸环化酶（ＡＣ）,减少ｃＡＭＰ的生成,使ＰＫＡ活性降低,从而增强ＩＧｌｙ。     

蛋白激酶C的激活转位和它介导的信号通路

蛋白激酶Ｃ是一系列丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶家族,已发现了至少十二种同功酶。在静止细胞中,它主要以非活化形式存在于胞浆中,由受体－Ｇ蛋白耦联的ＰＬＣβ激活便裂细胞膜上的磷脂而释放ＤＡＧ;与ＰＫＣ的结合引起了ＰＫＣ的别构激活;而通过其它信号途径激活的ＰＬＤ水解胞膜的磷脂酰胆碱（ＰＣ）产生的磷脂酸经磷脂酸酯酶产生的ＤＡＧ可能是ＰＫＣ持续激活的必要条件。在体外实验中,ＰＫＣ的持续激活是一些细胞分化所必须的。蛋白激酶Ｃ的激活首先引起了它转位到膜,有时转位到核,并在转位后继续保持磷酸化活性,同时对它的下游底物进行磷酸化导致它们的活化。ＰＫＣ可活化ＲａｆＳｅｒ／Ｔｈｒ蛋白激酶及ＮＦ－ｋＢ,介导细胞对外界的反应,包括对核基因表达的调节,引起细胞生长或分化等。由于Ｒａｆ可与活化的Ｒａｓ—ＧＴＰ结合从而定位到胞膜,说明蛋白激酶Ｃ与Ｒａｓ介导的Ｒａｆ－１／ＭＥＫ／ＭＡＰＫ信号通路间存在着“对话”。     

蛋白激酶C对大鼠缺血海马突触体谷氨酸摄取的调控作用

采用大鼠海马脑片体外缺血模型,观察海马突触体内蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性的变化,以及这种变化对突触体谷氨酸（ＧＬＵ）摄取的影响。结果显示：海马脑片体外“缺血”１０ｍｉｎ,其突触体内ＰＫＣ活性基本不变,而缺血３０ｍｉｎ,突触体内ＰＫＣ活性显著上升（Ｐ＜０．０１,ｎ＝６）;非Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体拮抗剂ＤＮＱＸ有效地抑制ＰＫＣ活性的同时,可降低胞外ＧＬＵ的堆积,而ＮＭＤＡ受体阻断剂ＡＰ＿５无作用。进一步实验证明,ＰＫＣ激动剂ＰＤＢ浓度依赖性地抑制突触体对３Ｈ－ＧＬＵ的摄取（ＩＣ５０＝１３１±１０μｍｏｌ／Ｌ）,此抑制作用可由ＰＫＣ抑制剂Ｈ－７（１００μｍｏｌ／Ｌ）抵消。提示脑缺血诱发ＧＬＵ堆积的作用机理可能是：脑缺血引发钙内流导致ＧＬＵ过量释放,ＧＬＵ又通过突触前非ＮＭＤＡ受体激活ＰＫＣ,抑制其自身摄取,正反馈性加重胞外ＧＬＵ的堆积。     

丝裂素活化蛋白激酶参与骨骼肌细胞分化的调节

丝裂素活化蛋白激酶参与骨骼肌细胞分化的调节丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫｓ）途径被认为是细胞外信号引起细胞增殖、分化等核反应的共同通路。最近,美国冷泉港实验室Ｂｅｎｎｅｔ等人用培养的Ｃ２Ｃ１２成肌细胞株研究ＭＡＰＫｓ在肌细胞分化不同阶段中的作用。作者发...     

蛋白激酶抑制剂噬菌体的构建和功能研究

人工合成编码ｃＡＭＰ信赖蛋白激酶（ｃＡＰＫ）的热稳定抑制剂第５－２４位氨基酸「ＰＫＩ（５－２４）」的ＤＮＡ片段,并将之克隆到ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ载体ｆｄ－ｔｅｔ－ＤＯＧ１使中,使ＰＫＩ（５－２４）以融合于ｇ３ｐ蛋白的形式展示了噬菌体是到了ＰＫＩ噬菌体,蛋白激酶抑制活性测定表达ＰＫＩ噬菌体可有铲地抑制ＣＡＰＫ的活性。结合实验结果显示ＰＫＩ噬菌体能与固相化小鼠ＣＡＰＫ催化亚基α（Ｈｉｓ６－ｍＣα     

鸡骨骼肌发育过程生肌素的表达

ＭｙｏＤ家族生肌因子ＭｙｏＤ,生肌素（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）ｍｙｆ－５和ｍｙｆ－６／ｈｅｒｃｕｌｉｎ对脊椎动物肌细胞分化和骨骼肌系统的发育成熟具有重要意义,其中生肌素的作用尤为突出,是肌细胞终末分化的关键因素,采用Ｎｏｒｈｔｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术检测鸡胚骨骼肌发育过程中生肌素在转录水平的表达动力学,发现在胚胎发育第９ｄ已有鸡肢体骨骼肌生肌素ｍＲＮＡ表达,第１３ｄ达到高峰,第１５ｄ开始下降,第１     

钙调素高表达对NRK细胞中DG-PKC和cAMP-PKA水平的影响

钙调素（ＣａＭ）作为Ｃａ２＋的主要受体,对细胞增殖起重要调节作用,而且在转化细胞中ＣａＭ的水平明显高于正常细胞．ｃＡＭＰ作为一种第二信使,起着将细胞外刺激信号转化为细胞内各种生理活动的媒介作用．蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）则是这种转化过程中的关键激酶．蛋白激...     

酪氨酸蛋白激酶和蛋白激酶C对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V的双重调控

在人肝癌细胞７７２１中研究了酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的激活剂［分别为表皮生长因子（ＥＧＦ）和佛波酯（ＰＭＡ）］和各种蛋白激酶抑制剂对Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ｖ（ＧｎＴ－Ｖ）活力的影响,以探讨ＴＰＫ和ＰＫＣ对ＧｎＴ－Ｖ的调节。结果发现,ＥＧＦ或ＰＭＡ处理细胞４８ｈ后,ＧｎＴ－Ｖ的活力明显增高;蛋白激酶的非特异性抑制剂槲皮素和染料木黄酮（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）在抑制ＴＰＫ和ＰＫＣ的同时,抑制ＧｎＴ－Ｖ的基础活力,并完全阻断ＥＧＦ或ＰＭＡ对ＧｎＴ－Ｖ的增高作用;ＴＰＫ的特异性抑制剂Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ－２５和ＰＫＣ的特异性抑制剂Ｄ－鞘氨醇分别应用时,各自只能部分地取消ＥＧＦ或ＰＭＡ对ＧｎＴ－Ｖ的诱导。但当Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ－２５和Ｄ－鞘氨醇同时加入培养基中则可完全阻断ＥＧＦ或ＰＭＡ对ＧｎＴ－Ｖ的诱导激活。蛋白质合成抑制剂环己亚胺和蛋白激酶抑制剂作用相仿,不但可抑制ＧｎＴ－Ｖ的基础活力,也可完全消除ＥＧＦ或ＰＭＡ对ＧｎＴ－Ｖ的激活。以上结果提示ＥＧＦ或ＰＭＡ通过蛋白激酶调节ＧｎＴ－Ｖ的酶蛋白合成,并且ＧｎＴ－Ｖ受到膜性ＴＰＫ和ＰＫＣ的双重调节,其中ｍ－ＴＰＫ较ｍ－ＰＫＣ更为重要。     

败血症大鼠心肌钙通道分布的变化

本研究用结扎盲肠及穿刺（ＣＬＰ）引起败血症。结果证明：大鼠心肌钙通道在早期败血症（ＥＳ,ＣＬＰ后９ｈ）时由心肌轻型囊泡向心肌肌膜转运增多;在晚期败血症（ＬＳ,ＣＬＰ后１８ｈ）时由心肌肌膜向心肌轻型囊泡转运增多。败血症时大鼠心肌肌膜和心肌轻型囊泡钙通道的再分布与ｃＡＭＰ依赖性蛋白激酶（ＰＫＡ）,Ｃａ（２＋）／钙调素依赖性蛋白激酶（ＰＫＭ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）磷酸化作用无关。败血症时大鼠心肌肌膜和心肌轻型囊泡上肾上腺能β－受体、Ｍ－胆碱受体和Ｎａ＋／Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ的变化规律和钙通道的一样,它们可能是败血症时的一种非特异性变化。     

肾上腺髓质素受体及其信号转导

肾上腺髓质素（Ａｄｍ）是新近发现的一种生物活性多肽,在体内有着广泛的分布,参与机体多种生理功能的调节。Ａｄｍ可与两种受体结合：ＣＧＲＰ受体和Ａｄｍ特异受体。Ａｄｍ与体结合后,通过ｃＡＭＰ－ＰＫＡ等信号转导通路发挥舒长血管、降低血压、利尿利钠和抑制细胞增殖等作用。     

蛋白激酶C对鼻咽癌细胞P21~(ras)表达的影响

使用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂与抗Ｐ２１Ｈ－ｒａｓ单抗,通过免疫细胞化学,双参数流式细胞仪等方法,探讨鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ中ＰＫＣ与Ｈ－ｒａｓ表达的关系。结果：１）Ｐ２１ｒａｓ蛋白在ＣＮＥ－２Ｚ细胞主要在胞膜（２７％）与胞浆（９３．７％）表达。作用于ＰＫＣ调节区的抑制剂ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）（２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）与作用于催化区的ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）（２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ）在明显抑制细胞生长的浓度使Ｐ２１ｒａｓ表达程度均减弱,胞膜阳性率明显降低,分别为５．６％与１．６％。２）蛋白质－ＤＮＡ双参数流式细胞法测定发现在Ｇ１期细胞群Ｒａｓ蛋白表达差异较大,提示Ｒａｓ蛋白主要在Ｇ１期合成逐渐增多;经ＰＫＣ抑制剂ＳＳ与ＳＴ处理后,Ｇ１期细胞表达的差异减小,说明ＰＫＣ抑制剂抑制了Ｇ１期Ｒａｓ蛋白合成。本研究结果提示：ＰＫＣ对Ｒａｓ蛋白向发挥作用的部位胞膜的转移具有一定的调控作用。Ｒａｓ蛋白的表达可能与ＣＮＥ－２Ｚ细胞Ｇ１／Ｓ期的过渡有关。     

平滑肌收缩调节的信号转导

平滑肌细胞内信号转导主要有肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）途径。前者通过肌浆内Ｃａ＾２＋浓度升高,激活钙调蛋白（ＣａＭ）依赖性ＭＬＣＫ,催化肌球蛋白轻链丝氨酸（Ｓｅｒ）－１９磷酸化,肌球蛋白ＡＴＰ酶活性增加,肌丝滑行,肌肉收缩。肌浆内Ｃａ＾２＋浓度的恢复使ＭＬＣＫ失活,肌球蛋白轻链磷酸酶（ＭＬＣＰ）使肌球蛋白脱磷酸化,肌肉舒张。近来有证据表明ＰＫＣ信号转导途径通过影响细肌丝相关蛋     

p38MAPK信号通路

细胞表面受体到核的信号通路是现代生物学研究的主题之一。细胞外各种刺激通过和膜受体偶联的Ｇ蛋白和酪氨酸激酶介导了一系列丝氨酸／苏氨酸激酶介导的级联反应,即分裂原激活蛋白激酶（ＭＡＰＫ）级联反应。ＭＡＰＫ级联反应把细胞外信号传递到核,并汇总了各种信号通路来的传息,因此研究细胞内ＭＡＰＫ的信号通路是十分重要的．本文简要介绍了ＥＲＫ,ＪＮＫ和ｐ３８三种ＭＡＰＫ途径,着重叙述了ｐ３８ＭＡＰＫ信号途径的性质和功能以及在免疫细胞中的作用和某些疾病的临床关系。     

PKC、PKA和TPK在血小板激活中的作用

利用~（３２）Ｐ－ＮａＨ_２ＰＯ_４标记猪血小板,然后以ＰＭＡ、凝血酶、ＰＧＥ_１、腺苷等处理,结果表明,随着ＰＭＡ激活ＰＫＣ,血小板发生聚集。３５μｍｏｌ／ＬＰＧＥ_１或１ｍｍｏｌ／ＬｄｂｃＡＭＰ不能抑制５０ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的血小板聚集,腺苷却能抑制ＰＭＡ诱导的血小板聚集（ＥＣ_（５０）＝０．１ｍｍｏｌ／Ｌ）,ｄｂ－ｃＡＭＰ、腺苷都不能抑制１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的４０ｋＤ蛋白磷酸化。ＰＫＡ激活不能抑制ＰＭＡ激活的ＰＫＣ。在ＰＭＡ、凝血酶激活的血小板中,ＰＫＣ、ＴＰＫ都发生激活,４０ｋＤ底物既是ＰＫＣ的底物又是ＴＰＫ的底物,ＰＫＣ和ＴＰＫ在血小板聚集中起着重要的调节作用。