兔阑尾中一种新的21kD的钙结合蛋白的纯化与鉴定

纯化与鉴定了Ｂ淋巴细胞中一种新的分子量为２１ｋＤ的钙结合蛋白（ＣａＢＰ２１）。兔阑尾淋巴细胞匀浆经热变性,Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ与ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析,自每１ｋｇ细胞沉积物中获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的ＣａＢＰ２１５．３ｍｇ。ＨＣｌ水解后的酸性氨基酸（Ａｓｐ＋Ｇｌｕ）含量为２６％。如同大多数钙结合蛋白一样,Ｎ末端封闭阻止其进行Ｅｄｍａｎ降解。ＣａＢＰ２１中疏水性氨基酸（计Ｇｌｙ,不计Ｔｒｐ）约占４６％,碱性氨基酸１０％,酸性氨基酸与极性氨基酸约４４％。ＣａＢＰ２１有较高的Ｓｅｒ、Ｔｙｒ含量。肽谱分析等确证ＣａＢＰ２１为２个相同或相似亚基二聚体。以ＡｒｓｅｎａｚｏⅢ作Ｃａ２＋结合分析表明每分子ＣａＢＰ２１可结合４分子Ｃａ２＋,对Ｃａ２＋的结合常数约为１０－５ｍｏｌ／Ｌ。各种性质表明ＣａＢＰ２１是一种不同于其他已知钙结合蛋白的新钙结合蛋白。     

江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2抑制制血小板作用的机理

江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２（ＡＰＬＡ２）对多种致聚剂引起的血小析具有抑制作用,这种抑制并非是由于ＡＰＬＡ２与血小板膜结合,引起膜流动性降低造成。ＡＰＬＡ２不裂解血小板,电镜观察表明它能抑制血小析部颗粒的中心化,使之不易被激活。进一步研究显示ＡＰＬＡ２是作用在骨架上,使致聚剂引肌动蛋白单体聚合难以进行,ＡＰＬＡ２导致的ｃＡＭＰ浓度的升高正说明了这点。结果提示ＡＰＬＡ２首先作用于轿小板细胞膜,引起ｃＡＭ     

短尾蝮蛇毒磷脂酶A2的分离纯化及抗血小板聚集作用

目的研究短尾蝮蛇毒磷脂酶A2的分离纯化及其抗血小板聚集作用。方法磷脂酶A2的分离纯化采用CM-SephadexC-25、DEAE-SepharoseCL-6B、SephacrylS-200、SephadexG-75柱层析法,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白分子质量,以磷脂酶Az测定方法测定其酶活性,用比浊法测定其对二磷酸腺苷（ADP）引起的血小板聚集的影响。结果从短尾蝮蛇毒中纯化所得磷脂酶A2的相对分子质量为16．0×10^3（非还原）、17．6×10^3（还原）,它具有磷脂酶A2活性,能明显抑制ADP引起的血小板聚集并呈剂量-效应关系。结论此方法成功地从短尾蝮蛇毒中分离纯化出磷脂酶A2,并能抑制血小板聚集。     

磷脂酶A2的应用

磷脂酶Ａ2 (ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ2 ,ＰＬＡ2 ,ＥＣ 3 .1 .1 .4)即磷脂 2 酰基水解酶 ,是专一催化 3 Ｓｎ 磷酸甘油脂Ｃ 2位酯键的水解反应的酶 ,酶解产物为溶血磷脂和脂肪酸。ＰＬＡ2 不仅在生物体内具有很重要的生理功能 ,而且具有很高的应用价值 ,可广泛地应用在科学研究、磷脂改性、油脂精练、饲料添加剂、医疗等诸多方面。1 .用ＰＬＡ2 研究酶学、脂代谢和生物膜结构与功能ＰＬＡ2 (尤其是外分泌型的ＰＬＡ2 )的分子量较小 ,一般在 1 0～ 2 0ｋＤ之间 ,相对而言 ,结构较为简单。在蛇毒中 ,存在许多ＰＬＡ2 的同工酶 ,它们之…     

蝮蛇毒酸性磷脂酶A2高含钙量的晶体结构研究

钙离子是磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）经必需的辅因子,以蝮蛇生磷脂酶Ａ２为材料,在晶体生长过程中加入ＣａＣｌ２培养了高含钙量的ＰＬＡ２晶体,Ｘ射互衍鉴定该晶体与天然酶同晶。民集了１．６埃分辩率的同步辐射衍射数据,经晶这修正所得高含钙酶的结构与天然酶结构要近,但钙结合部位与Ｃ端肽段有细微判别与钙配位的七个氧原子所形成的五角双锥构型比天然酶的完美。钙离了对磷脂酶Ａ２整个分子构象的影响较小,下离子的作用主要是通     

磷脂酶A2活性对中性粒细胞凋亡的影响

细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种机体保持内环境稳定的特殊方式。正常情况下,中性粒细胞（ＰＭＮ）绝大部分通过凋亡而被清除,避免因坏死而造成组织损伤。我们在研究磷脂酶２（ＰＬＡ２）激活介导创伤和感染的机理时,发现其活性介导ＴＮＦ对ＰＭＮ的激发作用。其它证据也显示ＰＬＡ２及其代谢产物在细胞凋亡过程中发挥作用,我们推测ＰＬＡ２活性对ＰＭＮ凋亡或坏死的影响,可能是控制炎症反应的主要途径。这方面的工作尚少见,本文初步报告如下。１　材料和方法（１）材料和主要试剂　雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠由本院动物中心提供。Ｐ…     

蜂毒过敏原磷脂酶A2

蜂毒 (ｂｅｅｖｅｎｏｍ)是由工蜂毒腺和副腺分泌的、具有芳香气味的一种透明液体 ,贮藏在毒囊中 ,在蜜蜂蛰刺时由蛰针排出[1] 。蜂毒具有抗菌、消炎、镇痛、降血压、抗辐射、预防癌症等药理作用 ,可用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、神经痛等多种疑难杂症。目前世界上许多国家都已开展蜂针疗法 ,并有各种类型的蜂毒软膏和针剂生产。但由于蜂毒易使人产生过敏反应 ,致使蜂针疗法不能得到广泛推广。鉴于这一点 ,国内外许多学者对主要引起人类过敏的蜂毒组分———磷脂酶Ａ2 (ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ2 )进行了研究 ,并且取…     

广东眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2的分离纯化及抗血小板聚集作用

目的 研究眼镜王蛇毒中酸性磷酸脂酶Ａ２对血小板的作用。方法 采用ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｓｘ Ｃ－２５Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐ「ｈａｄｅｘＡ－２５,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５多步柱层析法,聚丙烯酰胺产胶电泳,酸性磷脂酶Ａ２酶活性测定;血小板聚集实验。累进要从粗中分离纯化出一酸性磷脂酶Ａ２单体,分子量为１４ＫＤ;等电点ＰＩ３．８;ＰＬＡ２比值２０μｍｏｌ．ｍｇ＾－１．ｍｉｎ＾－１;小     

磷脂酶A2的生理机能新说

磷脂酶Ａ２的生理机能新说杜晓燕周元聪（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词磷脂酶Ａ２生理机能磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２,ＥＣ３．１．１．４）,简称ＰＬＡ２。它能水解甘油磷脂的第二位酯酰键,生成溶血磷脂和脂肪酸,如下式...     

金属离子对湖南产五步蛇蛇毒磷脂酶A2活性的影响

测定结果示,对湖南产五步蛇蛇毒磷脂酶Ａ２,Ｋ＋可使酶活性增加,而Ｆｅ３＋等则不同程度地抑制酶活性     

若干化学修饰剂对PLA2酶活力的影响

利用化学修饰的方法研究了修饰后的ＰＬＡ２与其酶活力之间的关系。结果表明色氨酸、精氨酸及氨基酸被修饰后ＰＬＡ２酶活力均有不同程度的下降。     

大豆适应SO_2过程中出现的15kD蛋白

大豆受SO_2熏气过程中,在一定剂量作用下对SO_2抗性有提高的现象,与此同时,在叶子中出现了一个15kD蛋白,其蛋白量经一定时间增加后不再继续增加,熏气结束后即逐渐降低。纯化的15kD蛋白经SDS-PAGE和IEF检测,证明是均一的,它在280nm处的吸收很低,pH变化对紫外差吸收谱无影响,并且不含糖基;氨基酸组成分析显示,它所含脂肪族氨基酸比例很高,几乎不含芳香族氨基酸,没有发现甲硫氨酸。     

若干化学修饰剂对PLA2酶活力的影响（续）

本文给出在ＰＬＡ２分子中色氨基酸精氨酸残基及氨基被修饰的同时,紫外光谱的变化。     

植物28kD蛋白的纯化及部分性质研究

经丙酮粉、硫酸铵分级沉淀和阴离子交换层析等方法,首次从玉米花粉细胞质粗提物中纯化了一种具有ＡＴＰａｓｅ活性的可溶性蛋白。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量为２８ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点为８．３。免疫印迹鉴定结果表明该酶蛋白与抗牛脑动蛋白或动力蛋白的抗体无免疫交叉反应。最大紫外吸收波长为２７８ｎｍ,并作了ＣＤ谱分析。底物特异性研究表明：ＡＴＰａｓｅ水解活性最高。药理学研究表明：该酶蛋白可被矾酸钠强烈抑制,但对ＮＥＭ基本不敏感,氟化钠可使酶活力丧失５０％左右,寡霉素、硝酸钾及乌本苷对酶活力没有抑制作用．     

Effect of Water Stress on Expression of a 20 kD Cyclophilin-like Protein in Drought Susceptible and Tolerant Cultivars of Sorghum

Immunodetection studies revealed the presence of a 20 kD cyclophilin-like protein (designated as SorgCyp20) in leaves and seeds of sorghum (Sorghum bicolor L Moench). The expression of SorgCyp20 was temporally regulated in the leaves and after attaining maximum levels at either 60 or 70 days after sowing it declined after flowering. The effect of drought stress on SorgCyp20 levels in the leaves and seeds of sorghum was stage and cultivar dependent. The drought stress-induced enhancement in SorgCyp20 levels was many times higher in the leaves (3-fold increase at 30 days after sowing) and seeds (2.5-fold increase at 9 days post anthesis) of drought tolerant cv ICSV-272 than in the drought susceptible cv SPRU-94008B. The intercultivar differences in drought stress-induced changes in SorgCyp20 expression were not related to the difference in water potential thus suggesting differential regulation of SorgCyp20 in response to stress in the two sorghum cultivars.     

The Effect of Exercise on Platelet Aggregability and Lipid Peroxidation

The effects of single bicycle ergometric exercises of a moderate or high intensity on platelet ADP-dependent aggregation, content of malonic dialdehyde (MDA), and activity of catalase were studied in young men with relatively high working capacities. Platelet aggregability either increased or decreased in response to the exercise. Hyperaggregation was recorded in about two-thirds of the subjects and hypoaggregation, in one-third. Changes in the aggregation parameters correlated with their basal values at rest. Muscular activity raised the aggregability of platelets when it was initially low and lowered it when it was initially high. An increased intensity of exercise made these correlations stronger. The exercise-caused changes in the MDA content in platelets also correlated with its basal level. A low MDA content at rest increased, and an initially high MDA content decreased. The response of hypoaggregation was associated with moderate and strong correlations between the basal content of MDA and catalase activity in platelets and the exercise-induced changes in the MDA content and platelet aggregability. It was concluded that a high basal level of MDA in platelets is a factor decreasing platelet aggregability during muscular activity.