肺腺癌干细胞表达小细胞肺癌相关抗原的实验研究

肿瘤干细胞（cancerstem cells,csc）是指一类具有自我更新（self-renewal）能力的未分化细胞。在肺腺癌中,csc的自我更新调控机制类似胚胎干细胞,即高表达OCT4、Nanog和Sox2}潜能基因,但目前对其表型特征尚存争议。该文采用成球试验（sphere—formingassay）AkSPC—A1细胞株中富集CSC后进行分子表型分析。结果显示,此类肺球体细胞（pulmospheres）同时表达肺脏近端和远端呼吸上皮的多个谱系（1ineage）标志,包括纤毛柱状细胞标志FoxJl、非纤毛柱状细胞（即Clara细胞）标志CCSP、肺神经肉分泌细胞标志GRP、II型肺泡细胞标志SP-C及其转录调控因子TTF-1。这些肺球体细胞也能够被3株小细胞肺癌特异性单抗（2F7、483和E6）所识别。通过基因沉默技术使得肺球体细胞中OCT4表达转阴后,上述标志（除E6P外）均消失。研究结果揭示,肺癌CSC具有肺脏呼吸上皮多潜能细胞的表型特征。此外,初步研究结果发现,中药冬虫夏草（Hirsutella Hepialid of Cordyceps Sinensis）的被毛孢菌丝体中含有新颖抗癌成分,能够显著遏制肺球体细胞增殖,提示对其进行分离鉴定,将是研制开发肺癌CSC靶向药物的一个发展方向。     

肺癌相关肿瘤抗原基因的分离及鉴定

通过分离肺癌肿瘤抗原 ,为肺癌早期诊断提供血清学标志物 ,并为研制肺癌疫苗提供候选抗原 ,成功构建了库容为 0 .8× 10 6个重组子的肺癌原发病灶组织的cDNA表达文库。采用SEREX技术对该cDNA表达文库进行筛选 ,获得了 33个阳性克隆 ,包括黑色素瘤抗原基因 (MAGE)、白斑相关蛋白基因、纤连蛋白基因、钠钾ATP酶基因等已知基因或EST ,另外有 18个基因或EST在GenBank数据库中没有同源性 ,可能是新的基因或EST。选取其中 3个克隆进行肺癌患者及正常人群血清的检测 ,结果显示肺癌患者的阳性率明显高于正常人群     

非小细胞肺癌中检测肿瘤新生血管的方法学探讨

为了探讨Ⅷ因子相关抗原（Ｆ８ＲＡ／ｖＷＦ）显示肿瘤新生血管的可靠性及方法学。我们对８５例非小细胞肺癌（ｎｏｎｓｍａｌｃｅｌｌｕｎｇｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＮＳＣＬＣ）的石蜡组织切片进行Ｆ８ＲＡ／ｖＷＦ免疫组化染色,结果显示：Ｆ８ＲＡ／ｖＷＦ免疫组化清楚地选择性地显示血管内皮细胞,肿瘤细胞和其它正常组织不着色,肿瘤内有高密度微血管区。微血管数目均值为７１±３９,Ⅰ期ＮＳＣＬＣ微血管数目均数为６５２±３４８,腺癌为７６６±３９２。本结果与其他研究结果比较：Ｆ８ＲＡ／ｖＷＦ免疫组化显示肿瘤新生血管有一定的可靠性,但必须建立标准的免疫组化技术和重复性好的估计微血管密度的方法     

肿瘤抗原基因转导树突状细胞的研究进展

树突状细胞 (Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ ,ＤＣ)是体内功能最强的抗原提呈细胞 ,它们的表面表达主要组织相容性复合物 (ＭａｊｏｒＨｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙＣｏｍｐｌｅｘ ,ＭＨＣ)分子和共刺激分子 ,为淋巴细胞的活化提供双信号。ＤＣ活化后分泌ＩＬ - 12、ＩＬ - 18及干扰素等细胞因子刺激辅助型Ｔ细胞 (ＨｅｌｐｅｒＴｃｅｌｌｓ ,ＴＨ)增殖 ,促使ＴＨ0 和ＴＨ2 细胞向ＴＨ1细胞分化 ,并强烈激发ＴＨ1型免疫应答[1] ,从而增强机体的抗肿瘤、抗感染、自身免疫性疾病和移植排斥等细胞免疫反应。应用ＤＣ的抗肿瘤实验主要是…     

肿瘤干细胞对非小细胞肺癌放疗效果机制的研究进展

肿瘤干细胞 (CSC)是一类具有肿瘤起始、自我更新及无限增殖潜能的细胞亚群,与肿瘤的局部复发与远处转移密切相关,是肿瘤放射治疗抵抗的根源。非小细胞肺癌是目前发病率及致死率较高的恶性肿瘤,已证实非小细胞肺癌中具有干细胞特性的CSC亚群,目前通过分离CD133等一系列已知免疫表型阳性细胞是获得非小细胞肺癌CSC的主要手段。研究证实CSC主要是通过DNA损伤、细胞自噬和缺氧肿瘤微环境等机制介导非小细胞肺癌的放疗抵抗效应。本文主要对非小细胞肺癌CSC的生物学特性、免疫表型表达及放疗抵抗的分子机制进行综述,以期为提高非小细胞肺癌放射疗效提供线索和依据。     

肿瘤相关成纤维细胞对非小细胞肺癌恶性生物学行为影响

目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(Tancer Associated Fibroblast,TAF)对非小细胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)恶性生物学行为的影响。方法:选取在本院肿瘤科住院手术的非小细胞肺癌患者,收集术后肺癌标本,马松三色染色(Masson Trichrome Stain)和天狼星红染色(Sirius Red Stain)观察肺癌组织(Lung Cancer Tissue,LCT)、癌旁组织(Pericarcinomatous Tissue,PCT)和正常组织(Normal Tissue,NT)中TAF的表达情况;体外将非小细胞肺癌细胞A549与非小细胞肺癌成纤维细胞P-gp共培养,CCK-8检测共培养前后A549细胞增殖能力;细胞划痕和Trans-well实验分别检测A549细胞迁移和侵袭能力;q RT-PCR和Western blot检测A549细胞上皮间质转化(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)标志蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。结果:Masson和Sirius染色结果显示:肺癌组织中纤维的表达明显高于癌旁组织;与P-gp共培养的A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力及上皮间质转化相关蛋白N-cadherin和Vimentin表达均明显高于阴性对照组(P0.05),而E-cadherin的表达明显降低(P0.05)。结论:TAF可能通过诱导非小细胞肺癌细胞EMT的发生从而促进非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。     

血清肿瘤标志物检测对晚期非小细胞肺癌靶向治疗的预后分析

目的：探究检测血清肿瘤标志物对预测晚期非小细胞肺癌靶向治疗预后的影响。方法：选取2010年4月至2012年12我院收治的晚期非小细胞肺癌患者70例,均予以吉非替尼进行治疗,检测治疗前及治疗后2个月肿瘤标志物癌胚抗原CEA、角蛋白19的可溶性片段（CYFRA21—1）、癌抗原125（CA125）的表达水平,观察其表达水平与患者疗效之间的关系。结果：治疗后,患者完全缓解1例,部分缓解37例,疾病稳定19例,疾病进展13例,有效率为54．3％。治疗后,治疗有效的患者CEA、CA125明显比治疗前降低,结果具有统计学意义（P〈0．05）;而疾病稳定、疾病进展的患者治疗后CEA、CA125与治疗前比却无明显差异（P〉0．05）。治疗有效与疾病稳定的患者治疗后CYFRA21．1有明显降低,但与治疗前比却无明显差异（P〉0．05）;而疾病进展患者的CYFRA21—1却明显升高,与治疗前比有显著差异（P〈0．05）。而治疗前,治疗有效的患者血清中CEA、CA125比疾病稳定、疾病进展的患者明显较高,结果具有统计学意义（P〈0．05）;疾病稳定患者的CEA、CA125与疾病进展患者的相比,治疗有效的患者CYFRA21-1与疾病稳定、疾病进展的相比,结果均不具有统计学意义（P〉0．05）。结论：治疗前CEA、CA125浓度较高则治疗效果不错．治疗后效果较好则CEA、CA125浓度较低,效果不好则CYFRA21-1浓度较高。利用血清肿瘤标志物可显著反映肿瘤靶向药物治疗的预后情况,为临床判断其治疗效果提供依据。     

基于生物信息学分析的非小细胞肺癌诊断预后相关基因的筛选

为了从基因层面探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)发生发展的内在机制,筛选与NSCLC诊断、预后相关的基因,为NSCLC分子机制的进一步研究提供生物信息学依据,利用生物信息学方法对GEO数据库和TCGA数据库的数据集进行合并分析,筛选NSCLC组织与正常肺组织之间的差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs),并对所取交集的DEGs进行基因集富集分析(gene set enrichment analysis, GSEA)、基因本体论(gene ontology, GO)分析、KEGG (kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析、蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)分析、ROC曲线诊断效能分析及LASSO生存分析。文中共筛选出240个DEGs,主要涉及核分裂、染色体分离等生物学过程。GSEA分析结果显示,富集的通路主要涉及DNA修复和细胞周期。从PPI网络中筛选出20个hub基因, ROC结果显示, UBE2C (AUC=0.939)、TOP2A(AUC=0.927)、RRM2 (AUC=0.927)、CCNB1 (AUC=0.928)、MKI67 (AUC=0.930)、AURKA (AUC=0.931)、MELK(AUC=0.950)相对具有较高的诊断价值, LASSO COX回归结果则显示IL6、KIAA0101、MKI67、TPX2、AURKA、CDKN3及CDCA5与NSCLC患者的预后强相关。本研究结果表明, ZWINT、KIF2C、MELK、CDCA5可能在NSCLC中发挥着重要的作用,为阐明NSCLC的分子机制提供了新思路。     

survivin和caspase-3在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

目的：研究survivin和caspase-3蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况,分析二者的作用机制及相关性。方法：采用免疫组化KIT染色法,检测survivin和caspase-3在60例NSCLC组织和20例正常肺组织中的表达情况。结果：肺癌组织中的survivin阳性表达率（61．67％）明显高于正常肺组织（5％）;Ⅲ期的survivin阳性表达率（76．92％）明显高于Ⅰ＋Ⅱ期（50％）;均有显著性差异（P〈0．05）;而与年龄,病理类型,组织分化程度,淋巴结转移情况无关。肺癌组织中caspase-3阳性表达率（43．33％）明显低于正常组织（85％）;高＋中分化组的caspase-3阳性表达率（58．06％）明显高于低分化的（27．59％）;鳞癌组织中的caspase-3阳性表达率（56．25％）高于腺癌组织（28．57％）;均有显著性差异（P〈0．05）;而与年龄,TNM分期,淋巴结转移情况无关。结论：survivin在非小细胞肺癌中表达上调,而caspase-3却下降,且二者的表达呈负相关,提示survivin可能参与肺癌的发生发展,且抑制caspase-3的激活而抑制凋亡;caspase-3的失活可能导致肿瘤细胞的增殖。     

小细胞肺癌分子标记物研究进展

肺癌仍然是现在最常见的恶性肿瘤之一。小细胞肺癌(Smallcelllungcancer,SCLC)是肺癌中恶性程度最高的一种类型,与吸烟密切相关,其较早发生远处转移和播散导致预后差,目前的主要治疗手段有手术、化学治疗、放射治疗。但其具有初始化放疗敏感,却很快耐受的特点,导致了它总体预后不良,生存期短。如何寻求一种有效的疾病预后、疗效判断标记物,显得尤为重要。本文主要介绍近年来在小细胞肺癌中分子标记物的研究进展,包括神经内分泌的相关蛋白、凋亡蛋白抑制剂(Survivin)、相关酶类及膜蛋白,这些分子标记物与小细胞肺癌疾病的进展、预后密切相关,能够为临床的疾病治疗评估提供潜在可行的方法。但是,这些标记物仍存在特异性不高的问题,最终应用于临床实践,仍需要更多的临床研究。     

肿瘤抗原基因转染的DC疫苗研究进展

树突状细胞是机体内最重要、功能最强的专职抗原递呈细胞,是抗肿瘤免疫的最好佐剂。将不同形式肿瘤抗原负载的DC制成疫苗,可以在体内诱导特异性杀伤性T细胞（CTL）的生成,激发人体有效的特异性抗肿瘤免疫功能。其中肿瘤抗原原因转当的DC疫苗具有很多独特的优点,可望作为一种新型肿瘤疫苗用于肿瘤的防治。本文主要就其作用特点、体内应用的可行性及抗肿瘤作用效果的实验研究进展等方面作一综述。     

肿瘤抗原相关自身抗体的产生机制及其在肿瘤中的作用

肿瘤抗原相关自身抗体在肿瘤诊断、临床应用方面的价值是目前研究的重点。它不仅可以作为肿瘤早期诊断的生物标记,也可监测治疗效果、判断预后,但目前关于肿瘤抗原相关自身抗体产生机制的研究较少,深入研究其产生机制是阐明肿瘤抗原相关自身抗体促肿瘤或抑肿瘤作用的前提,也是今后研究的重点之一。本文就近年来肿瘤抗原相关自身抗体的产生机制、肿瘤早期诊断及其在肿瘤发生发展和预后中的应用进行总结,为积极寻找特异性强、灵敏度高的肿瘤抗原相关自身抗体及检测组合,明确肿瘤抗原相关自身抗体在不同肿瘤中的意义提供一定的理论参考。     

扣除杂交法筛选与非小细胞性肺癌转移相关的基因

非小细胞性肺癌病人的术后死亡率很高 ,其原因是该病易发生转移。收集了肺癌早期患者的样品 ,并根据患者资料分成转移型 (n =4)和非转移型 (n =5 ) ,采用扣除杂交法筛选与非小细胞性肺癌转移相关的基因。扣除后的cDNA文库中得到了 2 2 5个有效克隆。对这些克隆进行了测序 ,在基因文库中比较了核苷酸同源性 ,初步确定了这些克隆对应的基因 ,并根据基因可能涉及的功能加以分类。通过实时 (realtime)RT PCR鉴定 ,发现 10种基因在用于扣除试验的转移病人样品中的平均表达量比非转移病人高。进一步对 70位患非小细胞性肺癌病人 (I至IIIA期 )的样品进行了检测。根据统计分析 ,在I和II期病人中 ,2种基因MALA1和EIF4A1在发生转移的病人样品中的表达与在非转移的病人中有显著差异性。这些结果将有助于分析非小细胞性肺癌病变发生转移的可能性     

肿瘤相关抗原基因HCA519在昆虫细胞中的表达和纯化

为进行肿瘤细胞免疫应答的研究及制备肿瘤诊断用抗体 ,利用昆虫细胞表达系统表达了肿瘤相关性抗原HCA5 19的重组蛋白 ,并进行了纯化 .所表达的重组蛋白分子量约 10 0kD ,含 75 5个氨基酸残基 ,在HCA5 19cDNA3′端接入FLAG序列 ,则在重组蛋白C端接入 1个 8肽的FLAG尾 .利用其特异性抗体可以有效地纯化重组蛋白 .该FLAGTAG不影响整个重组蛋白的免疫反应性 .纯化的重组蛋白与天然蛋白具有相同或相似的免疫反应性 .它可与识别天然蛋白的血清抗体发生同样的阳性反应 .HCA5 19的足量提供 ,可以免疫动物 ,制备抗体 ;可作为抗原 ,分析其诱导肿瘤病人CTL的特异应答 ,从而评估其作为临床肿瘤疫苗的可能性     

非小细胞肺癌免疫治疗的研究进展

肺癌(lung cancer)是全球发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占肺癌的85%,其五年生存率只有15%,传统的抗肿瘤治疗方法(手术、放疗和化疗等)在抑制肿瘤进展中的作用有限,即使有手术机会,也有40%以上患者出现局部复发或远处转移。目前多学科治疗较大程度提高了晚期NSCLC的生存期,研究表明,免疫治疗(immunotherapy)可改善肺癌的预后,有望成为肺癌的重要辅助治疗方式。其中,治疗性肿瘤疫苗(vaccination)如MAGE-A3、L-BLP25、Belagenpum atucel-L等、免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibition)如ipilimumab、nivolumab、pembrolizumab等得到广泛关注。一系列临床试验表明免疫治疗可以使非小细胞肺癌的死亡率得到缓解,本文就其原理、临床试验、不良反应及有待解决问题的临床研究作系统综述。     

小细胞肺癌药物治疗的研究进展

小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)约占肺癌患者总数的15%-20%,与吸烟关系密切,约60%-70%的患者就诊时已处于广泛期,预后很差,内科药物治疗仍然为其主要的治疗手段。由于其细胞生物学行为复杂,恶性程度高,易出现复发及耐药,通过多药联合、优化给药顺序、改变用药方法及调整药物剂量强度并没有获得预期的疗效,且毒副反应较多,其死亡率依然高居各种肿瘤之首,寻求有效的治疗方案变得迫切而棘手。近年来,随着SCLC内科治疗药物研究的不断深入,一些研究热点药物如bcl-2抑制剂、Hedgehog信号通路抑制剂、ipilimumab、贝伐单抗等已在Ⅱ期或Ⅲ期试验中显示出良好的抗肿瘤活性,为SCLC的药物治疗提供了新的方向。本文就目前针对SCLC的药物治疗进展情况作一综述。     

非小细胞肺癌CD166+干细胞的分离和鉴定

目的:分选人非小细胞肺癌中的CD166+细胞,并验证其肿瘤干细胞的特性。方法:收集手术切除的15例非小细胞癌组织标本以及患者的临床资料,并通过流式细胞术对组织中CD166+的表达水平进行检测,对CD166+细胞进行原代培养,对比CD166+细胞和CD166-细胞的成球能力和集落形成能力;并将CD166+细胞和CD166-细胞注射到小鼠体内,比较其体内肿瘤形成能力。结果:在15例临床样本中均检测到CD166+细胞,CD166阳性表达率最高为12.1%,最低为0.3%。CD166的高表达与肿瘤TNM分期、肿瘤转移、以及肿瘤分型密切相关(P均0.05)。CD166+细胞的成球形成能力和集落形成能力显著的高于CD166-细胞,且CD166+细胞在裸鼠体内肿瘤形成能力显著高于CD166-细胞(P均0.05)。结论:非小细胞肺癌CD166+细胞具有肿瘤干细胞的特征,CD166在非小细胞肺癌的发生发展中可能具有重要的作用。     

小细胞肺癌化疗和放疗进展

近年来,小细胞肺癌(small cell lung carcer,SCLC)的发病率呈上升趋势,现已占肺癌总数的20%~30%[1]。SCLC病程短,发展快,对化疗和放疗敏感,因此,化疗和放疗已成为SCLC治疗的主要手段[2]。现将近年来SCLC化疗和放疗的治疗进展概述如下。1局限期SCLC治疗1·1化疗SCLC对化疗敏感的特点早已被发现,许多化疗方案被应用于SCLC,中位生存期约12个月,2年生存率为10%~15%,化疗持续时间4~6个月,长期维持化疗对生存没有影响[3]。文献[4]指出,85%~90%局限期SCLC患者经化疗后获得缓解,50%~60%的患者能达到完全缓解。尽管几种药物单独或联合使…     

基因突变检测技术在非小细胞肺癌EGFR与临床病理特征的关系研究中的作用

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况及其与临床病理的关系。方法选取我院2010年1月至2014年1月收集的159份非小细胞肺癌手术切除标本为研究对象,利用基因测序方法检测标本中的EGFR基因突变情况,并分析其与临床病理的关系。结果 159例样本中,EGFR基因突变检出率为12.6%(20/159),突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变。女性患者基因突变检出率明显高于男性患者(P﹤0.01)。腺癌及细支气管肺泡癌患者基因突变检出率明显高于其他组织学分型(P﹤0.01)。高分化患者基因突变检出率高于中-低分化检出率(P0.05)。EGFR基因突变与年龄及淋巴结转移与否无关(P0.05)。结论非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与性别、组织学分型及分化程度密切相关。