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1.
人们对原核细胞ＤＮＡ复制机制早已有较深入的了解 ,但对真核细胞ＤＮＡ复制机制的认识 ,直到 90年代中期才比较清楚。ＳＶ40ＤＮＡ复制系统是研究真核染色体ＤＮＡ复制的理想体系。在ＳＶ40ＤＮＡ复制系统中由病毒编码的唯一的复制因子是Ｔ抗原 ,其余的复制因子全依赖于宿主细胞。利用纯化的蛋白质或人细胞抽提物在体外重新构建ＳＶ40ＤＮＡ复制体系 ,可以细致、深入地研究真核ＤＮＡ复制的起始、延伸和滞后链的成熟。1 .在ＤＮＡ复制的起始至延伸阶段发生ＤＮＡ聚合酶α/δ转换哺乳动物细胞有 5种ＤＮＡ聚合酶 (α、β、γ、δ、ε、)。由… 相似文献
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真核细胞DNA聚合酶 总被引：1，自引：0，他引：1
冯朝晖 《国外医学:分子生物学分册》1998,20(5):227-231
近年来,真核细胞ＤＮＡ体外复制模型的建立及蛋白纯化技术的提高,ＤＮＡ聚合酶基因的克隆,真核细胞ＤＮＡ聚合酶研究取得了很大进展。 相似文献
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在真核生物染色体DNA复制过程中主要涉及三种DNA聚合酶:α(Polα),δ(Polδ)和ε(Polε)。人源DNA聚合酶δ是p125,p68,p50,p12四个亚基构成的异源四聚体,属于DNA聚合酶B家族,具有5’-3’聚合酶催化活性和3’-5’核酸外切酶活性,是染色体DNA复制过程中最主要的复制酶,同时还参与多种形式的损伤修复,在保证基因组结构的完整性和遗传稳定性方面具有重要的意义。由于其重要的生物学功能,目前引起人们更多的关注和重视。对人源DNA聚合酶δ的分离纯化方法及涉及DNA复制和损伤修复过程中酶学功能等方面的最新研究进展进行综述。 相似文献
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ＤＮＡ拓扑异构酶的分型郑晓飞孙志贤（军事医学科学院放射医学研究所,北京１００８５０）关键词ＤＮＡ拓扑异构酶ＤＮＡ拓扑异构酶是真核细胞和原核细胞中的基本酶。ＤＮＡ拓扑异构酶在细胞生命过程中起着重要作用,如在ＤＮＡ复制、修复、转录、重组中解开在复制和重组... 相似文献
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增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的ＤＮＡ聚合酶δ、ε的辅助蛋白,在ＤＮＡ复制修复中起重要作用。用ＰＣＲ方法对人的ＰＣＮＡ启动子的１７个位点进行了８ｂｐ替代突变,并组装到荧光素酶报告基因载体中。通过瞬时转染ＨｅＬａ,ＨｅｐＧ２,Ｌ－０２,ＭＣＦ７细胞株和体外转录方法,发现一些位点是４种细胞都使用的顺式作用元件,一些位点是细胞特异的顺式作用元件。 相似文献
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用ribozyme抑制增殖细胞核抗原的表达对HeLa细胞增殖的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
增殖细胞核抗的（ＰＣＮＡ）是ＤＮＡ聚合酶δ的辅助蛋白,它是细胞染色体ＤＮＡ复制所必需的。人工设计的ｒｉｂｏｚｙｍｅ具有可特异地切割ＰＣＮＡｍＲＮＡ的性质,将此ｒｉｂｏｚｙｍｅ的自剪体内表达质粒导入ＨｅＬａ细胞,从细胞决ＲＮＡ中分离相应部分能在体外切割靶ＲＮＡ片段,证明此表达质粒在细胞内能表达出有活性的ｒｉｂｏｚｙｍｅ分子。与对照相比,导入ｒｉｂｏｚｙｍｅ表达质粒的ＨｅＬａ细胞进入Ｓ期的时间从１２ｈ 相似文献
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栖热菌属热稳定DNA聚合酶 总被引：7，自引：2，他引：5
ＤＮＡ聚合酶是能够以ＤＮＡ或ＲＮＡ为模板 ,在寡核苷酸或蛋白质引物的引导下催化合成ＤＮＡ的一类酶 ,已经分离纯化的有上百种 ,其中有半数已经被克隆和测序。它们之间在ＤＮＡ序列、氨基酸序列、二、三级结构方面有较高的同源性 ,且与ＲＮＡ聚合酶和反转录酶之间也有不同程度的同源性[1～ 4] 。1 ＤＮＡ聚合酶的分类ＤＮＡ聚合酶有许多不同的类群 ,如很小的 (3 9ｋＤａ) ,来自哺乳动物的修复性单亚基ＤＮＡ聚合酶 ,巨大的 (可高达 90 0ｋＤａ)、多亚基(可达 2 0多个亚基 )的复制性ＤＮＡ聚合酶 (如Ｅｃｏ聚合酶Ⅲ )。有些ＤＮＡ聚合酶则… 相似文献
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用脉冲电场凝胶电泳和双标记基因质粒ＤＮＡ转染技术研究辐射敏感的毛细血管扩张性共济失调症患者皮肤成纤维细胞（ＡＴ５ＢＩＶＡ）和正常辐射抗性的人宫颈癌细胞（ＨｅＬａＳ３）ＤＮＡ双链断裂重接修复率及其忠实性。结果表明γ射线照射诱发ＤＮＡ双链断裂的产额和重接修复率,在两株细胞间无差别．而ＡＴ细胞对导入的限制性内切酶ＥｃｏＲＶ产生双链断裂质粒ＤＮＡ的重接修复忠实性显著低于ＨｅｌａＳ３ｔｅ胞,表明ＡＴ细胞易发生ＤＮＡ错误修复,这很可能就是ＡＴ细胞高度辐射敏感性的主要原因。 相似文献
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对生物大分子形状的正确了解有助于对其功能的解析。事实上,借助于电子显微镜观察法,使我们在对构成细胞各组分功能的探讨和研究方面收益匪浅。自从生物这家们认识到ＤＮＡ在细胞行使其功能中的重要性以来,电子显微镜便成为一种最重要的技术手段而被用于分析ＤＮＡ的结构,研究ＤＮＡ的复制、重组和转录机制。近年来,这一领域的研究技术又有了非常大的改进,使人们已经能够借助于电子显微镜,观察介入ＤＮＡ复制、重组和转录等过程中的ＤＮＡ－蛋白质复合体的活体状态。今后,在对生物大分子的活体行为进行探讨时,电子显微镜技术将发挥越来越重要的作用。 相似文献
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细胞虽然拥有多种修复途径,但有些ＤＮＡ损伤仍不可避免地会逃避修复而在基因组上保留下来,细胞跨损伤ＤＮＡ的合成的分子机制一直是ＤＡＮ修复中的主要的未解决问题之一,最近通过对一类结构相关性UmuC/DimB蛋白质超家族成员的研究发现它们具有ＤＮＡ聚合酶功能,这类新发现的ＤＮＡ聚合酶不同于经典的复制性ＤＮＡ聚合酶,它们能以易误／突变（error-prone/mutagenic)或无误（error-free)方式进行跨损伤（translesion)ＤＮＡ合成,并且从细胞到人在进化上功能保守。 相似文献
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原核生物ＤＮＡ的程序性复制薛建华明镇寰（杭州大学生命科学学院,杭州３１００１２）关键词聚合酶Ⅲ全酶复制叉程序性ＤＮＡ的复制是一个复杂的过程,需要各种蛋白质、酶之间及蛋白质与ＤＮＡ之间的相互作用,才能顺利完成。原核生物（如Ｅ．ｃｏｌｉ）是以ＤＮＡ聚合酶... 相似文献
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线粒体DNA及其表达的研究进展 总被引：8，自引：0，他引：8
线粒体属于半自主性细胞器 ,含有环状ＤＮＡ ,能进行自我复制 (重组和修复机制也包括在内 )。但线粒体ＤＮＡ(ｍｔＤＮＡ)的复制仍受细胞核的控制 ,因为不仅构成线粒体的蛋白质几乎都受核基因编码、在细胞质中合成 ,而且与ｍｔＤＮＡ有关的特定蛋白质(如ＤＮＡ聚合酶、重组与修复所需的酶、ＲＮＡ聚合酶、ＲＮＡ加工酶 )也都是由核基因编码的。ｍｔＤＮＡ的复制、转录、翻译及蛋白质的输入有其特殊规律 ,阐明线粒体的分子遗传规律既有助于理解线粒体在凋亡或程序性细胞死亡中发挥的作用 ,因而可更深入地对发育生物学、癌症、老化及机体死亡… 相似文献
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在ＤＮＡ合成中 ,合成方向为 5′→ 3′ ,即一条链上是连续复制的 ,而另一条链的复制是不连续的 ,必须先合成岗崎片段 (真核细胞的岗崎片段为 10 0ｂｐ ,原核细胞的为 10 0 0ｂｐ)。ＤＮＡ连接酶的作用就是催化岗崎片段的连接以完成ＤＮＡ的合成。另外 ,ＤＮＡ连接酶在ＤＮＡ修复过程中也起重要作用 ,如在切除修复中 ,切除损伤的ＤＮＡ片段 ,以未受损伤的链作为模板合成一条新的ＤＮＡ链后 ,ＤＮＡ连接酶将新合成的ＤＮＡ链与原来的ＤＮＡ链之间的缺口封闭完成ＤＮＡ的修复。ＤＮＡ链未封闭的缺口对细胞具有潜在的危险性 ,所以 ,ＤＮＡ连接… 相似文献
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陆长德 《中国生物工程杂志》1994,14(1):41-44
细胞周期中ＤＮＡ复制的控制陆长德（中国科学院上海生物化学研究所２０００３１）真核细胞ＤＮＡ复制发生在细胞周期的Ｓ期,细胞ＤＮＡ复制的控制从狭义上看发生在ＤＮＡ复制的起始上;从广义上看,也发生在参与ＤＮＡ复制的酶和蛋白质因子的基因表达调控上。关于这些调控机制虽然远还没搞清,但也取得了一些进展,与近来细胞生物学,以及肿瘤研究的一些进展结合起来,可以说已初露端倪。进一步研究真核细胞ＤＮＡ复制的控制进一步研究真核细胞DNA复制的控制无疑对于搞清细胞周期在G1\S 期的控制机制具有重要意义。 要意义。 相似文献
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农杆菌能够将其环状质粒上的一段转移ＤＮＡ(ｔｒａｎｓｆｅｒＤＮＡ ,Ｔ ＤＮＡ)转移并整合到受体细胞的基因组中 ,并使之携带的基因在受体细胞中表达。利用这种天然载体转化系统 ,除了可以在细菌间进行接合转移外 ,还可以向真菌、放线菌等低等真核生物和许多高等植物基因组转移[1] 。利用人工构建的转移复合物可以将ＤＮＡ转运到哺乳动物的细胞核中[2 ] 。虽然不同农杆菌质粒ＤＮＡ同源性有较大差异 ,但仍有一些共有的保守区段 ,如Ｔ ＤＮＡ区、Ｖｉｒ区、质粒复制起始区、质粒接合转移毒性区等。其中Ｔ ＤＮＡ区和Ｖｉｒ区是与Ｔ ＤＮＡ… 相似文献
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杆状病毒DNA解旋酶 总被引：3，自引：0，他引：3
ＤＮＡ解旋酶 (ｈｅｌｉｃａｓｅ)是ＤＮＡ复制过程中一类重要的酶 ,负责打开ＤＮＡ双链 ,并参与新生链的合成 ,在ＤＮＡ修复和重组过程中都发挥着必不可少的作用。杆状病毒ＤＮＡ解旋酶除了参与ＤＮＡ复制外 ,对于晚期基因的转录、关闭宿主蛋白质合成及决定杆状病毒宿主域方面都有重要的作用。1.杆状病毒解旋酶的结构目前已有 5种杆状病毒的ＤＮＡ解旋酶基因得到克隆并测序 ,分别是苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(ＡｃＭＮＰＶ) ,黄杉毒蛾核多角体病毒 (ＯｐＭＮＰＶ) ,家蚕核多角体病毒 (ＢｍＮＰＶ) ,甜菜夜蛾核多角体病毒(ＳｅＭＮＰＶ)及粉… 相似文献
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真核生物的DNA甲基转移酶与DNA甲基化 总被引：1，自引：0，他引：1
真核生物的ＤＮＡ甲基化就是在ＤＮＡ的ＣｐＧ二核苷酸胞嘧啶的第 5位碳原子上加上甲基 ,催化这一过程的是ＤＮＡ甲基转移酶 (Ｄｎｍｔ)。ＤＮＡ的甲基化修饰参与基因表达调控、胚胎发育、细胞分化、基因组印迹、Ｘ染色体灭活和细胞记忆等诸多重要生物学过程[1,2 ] 。在不同组织或同一类型细胞的不同发育阶段 ,基因组ＤＮＡ上各ＣｐＧ位点甲基化状态的差异即构成基因组的ＤＮＡ甲基化谱。根据催化反应类型。可以将ＤＮＡ甲基转移酶分为三类 :第一类将腺嘌呤转化成Ｎ6 甲基腺嘌呤 ;第二类将胞嘧啶转化成Ｎ4 甲基胞嘧啶 ;第三类将胞嘧啶转化成… 相似文献
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细胞在长期的进化过程中发展出了一套保证细胞周期中ＤＮＡ复制和染色体分配质量的检查机制,通常被称为细胞周期检查点。当细胞周期进程中出现异常事件,这类调节机制就被激活,及时地中断细胞周期的运行,待细胞修复或排除了故障后,细胞周期才能恢复运转。根据“质量控制”的内容,可将细胞周期检查点分为三种。第一种负责查看ＤＮＡ有无损伤,称为ＤＮＡ损伤检查点;第二种负责ＤＮＡ复制的进度,称为ＤＮＡ复制检查点;第二种负 相似文献
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合成了３′末端三个磷酸二酯键硫代修饰的针对ＤＮＡ聚合酶α的反义核苷酸ＡＳα,利用［３Ｈ］ＴｄＲ参入方法测定了ＡＳα对于ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ复制的抑制效力。结果表明,这种修饰明显增强了寡核苷酸在含血清的细胞培养液中的稳定性。Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ能够促进ＡＳα的入胞并且增强其抑制效力。ＤＥＡＥＤｅｘｔｒａｎ也能提高ＡＳα的效力 相似文献