缢蛏碱性磷酸酶胍溶液中分子折叠与活力变化研究

报道了缢蛏碱性磷酸酶（简称ＡＬＰ）经不同浓度盐酸胍处理时酶的分子构象发生的变化以及酶变化和失活的动力学过程。在胍中酶荧光发谢峰强度下降,紫外差光谱在２４６ｎｍ和２８５ｎｍ处出现２个负峰,ＣＤ谱中酶的α螺旋度下降,且随浓度增大,变化程度也加大。动力学研究表明,酶在０．５ｍｏｌ／Ｌ、１．０ｍｏｌ／Ｌ、２．０ｍｏｌ／Ｌ、３．０ｍｏｌ／Ｌ、４．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍中的变性速度常数分别为３．２１×１０＾－４ｓ     

不同变性条件下肌酸激酶活力和构象变化的比较

以盐酸胍,十烷基硫酸钠和溴化十烷基三甲铵为变性剂,测定它们对肌酸激酶（ＣＫ）活力和构象之影响。结果发现：ＣＫ活力的丧失明显早于分子整体构象的变化;Ｃ１０Ｓ和Ｃ１０ＮＭ３对ＣＫ的变性有一定的饱和性;而ＧｕＨＣｌ对ＣＫ的变性则没有;溶液ＰＨ增加时,在一定范围内,ＧｕＨＣｌ,Ｃ１０Ｓ和Ｃ１０ＮＭ３对ＣＫ的变性能力都增加,在ＰＨ变化时,利用ＤＴＮＢ测定ＣＫ内埋巯基的暴露来反映构象的变化是成功的。     

几种变性剂对无花果蛋白酶分子去折叠与活力的影响

用不同浓度的变性剂盐酸胍、脲、十二烷基硫酸锂（ＬＤＳ）对无花果蛋白酶（Ｆｉｃｉｎ）变性,用荧光光谱及圆二色谱（ＣＤ谱）监测无花果蛋白酶去折叠过程中的构象变化并与活力变化比较,发现在１－２ｍｏｌ／Ｌ胍浓度及９．２×１０－４ｍｏｌ／ＬＬＤＳ浓度条件下,ＣＤ谱显示的二级结构含量较高,荧光谱的发射峰位刚开始红移,活力的变化则较为显著,表现为胍溶液中激活,ＬＤＳ溶液中失活,揭示酶的这二种变性剂的这二个浓度范围内,可能存在变性中间态。     

盐酸胍对人类胎盘碱性磷酸酶构象与活力的影响

研究人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ,Ｅ．Ｃ．３．１．３．１）在胍变性过程中构象与活力的变化;测定胍存在时酶的表观米氏常数（Ｋｍ）。结果表明,低浓度的盐酸胍（＜０．５ｍｏｌ／Ｌ）使变性平衡态酶的发射荧光强度略有下降,酶活力增强;随盐酸胍浓度的增加,其荧光强度不仅不再下降,反而升高,酶逐渐失活;当盐酸胍浓度为１．５ｍｏｌ／Ｌ时,其荧光光谱的最大峰位红移,酶活力迅速下降;当盐酸胍浓度为３ｍｏｌ／Ｌ时,峰位由３３３．５ｎｍ红移至３５７．１ｎｍ,此时酶活力丧失;当盐酸胍浓度为４ｍｏｌ／Ｌ时,峰位不再红移,但其荧光强度继续增加。测得变性初态酶的表观Ｋｍ值随盐酸胍浓度的增加而增大。结果说明,荧光强度的增加和最大发射峰位的红移是该酶变性失活的一个灵敏指标;酶活力的变化明显快于酶分子整体构象的变化;低浓度的盐酸胍微扰了酶活性部位的构象,而对其整体构象无显著影响。提示酶活性部位具有柔性。     

金黄色葡萄球菌核酸酶及其类似物盐酸胍变性的活力与构象变化的比较

金黄色葡萄球菌核酸酶（ＳｔａｐｈｌｏｃｏｃｃａｌＮｕｃｌｅａｓｅ,ＳＮａｓｅ）与其类似物（ＳＮａｓｅＲ）的平衡态盐酸胍变性与复性曲线及比活力值均无明显差别。两者变性与复性的构象变化是可逆的,但活力恢复滞后于失活。低浓度盐酸胍对ＳＮａｓｅＲ有２０％左右的激活,而低浓度（０．１２５ｍｏｌ／Ｌ）的ＮａＣｌ可使ＳＮａｓｅＲ的活力提高近一倍。ＳＮａｓｅＲ盐酸胍变性的失活先于构象变化。比较加入底物竞争抑制剂脱氧胸腺嘧啶核苷３＇－５＇－二磷酸（ｐｄＴｐ）后得到的（ＳＮａｓｅＲ＋ｐｄＴｐ＋Ｃａ２＋）三元络合物平衡态盐酸胍变性的Ｔｒｐ与Ｔｙｒ内源荧光的变化,观测到该酶的活性部位先于整体构象发生变化,结果导致ｐｄＴｐ解离常数Ｋｄ增大．     

金黄色葡萄球菌核酸酶及其类似物盐酸胍变性的活力与构象变化的比较

金黄色葡萄球菌核酸酶（ＳｔａｐｈｌｏｃｏｃｃａｌＮｕｃｌｅａｓｅ,ＳＮａｓｅ）与其类似物（ＳＮａｓｅＲ）的平衡态盐酸胍变性与复性曲线及比活力值均无明显差别。两者变性与复性的构象变化是可逆的,但活力恢复滞后于失活。低浓度盐酸胍对ＳＮａｓｅＲ有２０％左右的激活,而低浓度（０．１２５ｍｏｌ／Ｌ）的ＮａＣｌ可使ＳＮａｓｅＲ的活力提高近一倍。ＳＮａｓｅＲ盐酸胍变性的失活先于构象变化。比较加入底物竞争抑制剂脱氧胸腺嘧啶核苷３＇－５＇－二磷酸（ｐｄＴｐ）后得到的（ＳＮａｓｅＲ＋ｐｄＴｐ＋Ｃａ２＋）三元络合物平衡态盐酸胍变性的Ｔｒｐ与Ｔｙｒ内源荧光的变化,观测到该酶的活性部位先于整体构象发生变化,结果导致ｐｄＴｐ解离常数Ｋｄ增大．     

以FITC作为荧光探针研究金属硫蛋白的构象变化

本文以异硫氰基荧光素（ＦＩＴＣ）作为荧光探针标记于金属硫蛋白分子上,用荧光光谱研究了Ｃｄ＾２＋及Ａｇ＾＋离子与ＺｎＭＴ２－ＦＩＴＣ进行金属交换及与ＡｐｏＭＴ２－ＦＩＴＣ进行金属重组时的构象变化。结果表明,标记后ＭＴ与Ｃｄ＾２＋离子进行金属交换及金属重组时不具有明显的结构域特征,而Ａｇ＾＋离子进行金属交换及金属重组时,分别在Ａｇ６ＭＴ、Ａｇ１２ＭＴ及Ａｇ１８ＭＴ处具有明显的结构域形成特征。此外高温下     

Ca^＋＋Na^＋离子对湖南产五步蛇蛇毒PLA2酶活力的影响

Ｃａ＾＋＋离子能极大地激活五步蛇蛇毒ＰＬＡ２的酶活力，Ｎａ＾＋离子只能在一定程度上激活，作者推测在测定ＰＬＡ２酶活力的底物溶液中可以不加Ｎａ＾＋离子。     

钙的光释入技术及其在细胞研究中的应用

Ｃａ＾２＋的光释放技术通过光解作用使预先引入细胞内的光敏感性螯合剂对Ｃａ＾２＋的亲和性改造从而实现细胞内游离钙离子浓度的调控,有助于阐明Ｃａ＾２＋作为第二信使对电兴奋性、肌肉收缩等细胞功能的调制作用。     

火焰原子吸收光谱法对葡萄汁,葡萄酒中的微量元素分析

采用火焰原子吸收光谱法对中国长城葡萄公司所采用的葡萄汁和生产的葡萄酒中的微量元素进行分析,结果表明Ｋ＾＋,ｍｇ＾＋＋较高,其次是Ｃａ＾＋＋ｆ,Ｎａ＾＋,而Ｆｅ＾＋＋Ｃｕ＾＋＋,Ｚｎ＾＋＋含量较少,同时,经过降酸处理后,Ｋ＾＋,Ｎａ＾＋等一价金属离子含量不降低而Ｃａ＾＋＋,Ｍｇ＾＋＋,Ｃｕ＾＋＋,Ｚｎ＾＋＋等二价离子降低。     

甘肃马衔山平车前叶片δ^13C的海拔和时间差异

以甘肃马衔山自然生长的平车前为材料,比较了不同海拔高度和不同月份下叶片δ＾１３Ｃ的变化结果表明,随海拔的升高,叶片δ＾１３Ｃ值增大,生长实期叶片δ１３Ｃ也高于生长后期叶片δ＾１３Ｃ值,并且叶片δ＾１３Ｃ具有年间差异。叶片δ＾１３Ｃ的这种变化也许与植物对环境的适应有关。     

脱Ca~（2＋）与结合Ca~（2＋）蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2晶体的培养和X射线衍射数据

钙离子是磷脂酶Ａ２催化必须的铺因子,以蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２为材料,采用在晶体培养液中加入ＥＤＴＡ或ＥＧＴＡ螯合剂络合法除去ＰＬＡ２中可能有的Ｃａ＾２＋离子和加入ＣａＣｌ２以确保ＰＬＡ２能克分结合上钙离子的方法培养充分结合Ｃａ＾２＋和脱Ｃａ＾２＋的ＰＬＡ２晶体。加了螯合剂后长出的晶体为长棒状六方柱,加Ｃａ＾２＋离子后长出的晶体则为短粗的六方柱。经Ｘ射线鉴定两种晶体为同晶型,空间群为Ｐ６１,晶胞参数很     

剪切力诱导微血管内皮细胞K~+通道的开放

利用膜片针及内皮细胞流动小室方法对大鼠脑微血管内皮细胞在剪切力作用下内上细胞壁Ｋ＾＋通道的开放进行了初步研究。结果提示脑微务人皮细胞膜上存在剪切力敏感的Ｔ＾＋通道,剪切方作用后,内皮丰Ｋ＾＋电流明显增大,此电流有明显的短智延迟现象也可以被胞外施抑制,符合ＩＫＶ特征。流动剪切力可以影响内皮细胞膜上的Ｋ＾＋通道的开放引身 离子通透性的增加,进而引起细胞内Ｃａ６２＋的变化,在Ｋ＾＋、Ｃａ＾２＋等离子浓度     

单羧酸类Cl-通道阻断剂对心室肌CFTR Cl-通道的影响

本文采用全细胞膜片箝与细胞内灌注技术,观察了单羧酸类Ｃｌ＾－通道阻断剂对豚鼠心室肌囊性纤维变性膜透性调节蛋白（ＣＦＴＲ）Ｃｌ＾－电流的影响,细胞包９－ＡＣ以可逆方式增强异丙肾上腺素（ＩＳＯ）激发的ＣＦＴＲＣｌ＾－的外向电流成分,５－ｎｉｔｒｏ－２－（３－ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｏ）－ｂｅｎｚｏａｔｅ（ＮＰＰＢ）和二苯胺羧酸（ＤＰＣ）对ＩＳＯ发的ＣＦＴＲＣｌ＾－电流的作用呈现先增强后抑制的双     

Cu^2＋对蓝藻Spirulina maxima光合作用的抑制机理

Ｃｕ＾２＋Ｓｍａｘｉｍａ的生长和光合放氧均有抑制作用;高浓度Ｃｕ＾２＋使藻细胞中藻胆体产生的特征光吸收和荥光显著下降,表明藻胆体是Ｃｕ＾２＋作用位点之一。Ｃｕ＾２＋可促使离体的藻蓝蛋白变性,使其光吸收和荧光减弱、荧光偏振度减小,而别藻蓝蛋白对Ｃｕ＾２＋可能通过对藻胆体中的藻蓝蛋白的作用,抑制藻胆体的光收传递。     

α-淀粉酶在盐酸胍和碳酸胍变性中有关胍基作用的研究

利用紫外差谱、荧光光谱和园二色谱法对比地研究了α-淀粉酶盐酸胍和碳酸胍变性,分析了两种胍变性明显差异的原因。通过等同的胍基浓度下,α-淀粉酶两种胍变性的构象变化与活性关系的实验,表明同等摩尔浓度的两种胍盐变性能力上的明显差异并不主要是由于它们胍基含量上的不同。将盐酸胍从中性pH(6.5)调至碱性pH(10.4),其变性能力大增,紫外差谱与碳酸胍变性相似,出现了290nm的正肩和296nm的正峰,与此同时,酶的荧光强度大大降低,大部分酶活性丧失。由此推论,两种胍变性能力的明显差异的重要原因之一是在碱性介质中胍基的变性能力明显增强,并分析了其增强的原因。     

人红细胞膜上阴离子交换蛋白和葡萄糖运输蛋白的相互…

用细胞松弛素Ｂ抑制红细胞膜上葡萄糖运输蛋白对葡萄糖的运输,观察到对阴离子运输有促进作用。当ＧｌｕＴ－１结合其底物分子－葡萄糖后同样加快了阴离子运输速率。另一方面,实际亦给出了葡萄糖跨膜运输特性和Ｃｌ＾－离子浓度的关系,表明随着Ｃｌ＾－离子浓度的加大葡萄糖运输过程中Ｋｍ减小,Ｖｍａｘ增大。     

离子注入加速棉花陆海杂种农艺性状遗传稳定性的研究

利用３０ＫｅＶ的Ｎ＾＋离子束注入陆地棉和海岛棉的花粉及杂交Ｆ１种子,分析了杂种后代农艺性状遗传稳定性的变化。结果表明：Ｎ＾＋离子辐照能显著地加速杂种后代的遗传稳定性,Ｆ４Ｍ４代性状稳定度可达９０％左右。Ｆ１种子辐照后代农艺性状多偏向陆地棉,而且花粉辐照杂交后代农艺性状表现出偏母遗传。同时以＾６０Ｃｏγ射线效应为对照,初步探讨了Ｎ＾＋离主入加速遗传稳定的机制。     

Cd^2＋对离体的鲤鱼脑垂体分泌促性腺激素的影响

采用离体的鲤鱼脑垂体灌流孵育系统,研究重金属镉离子对脑垂体分泌促性腺激素的害影响。发现Ｃｄ＾２＋既能直接刺激ＧｔＨ分泌,又抑制鲑鱼促性腺激素类似物释放激素刺激脑垂体分泌ＧｔＨ作用。实验结果提示,Ｃｄ＾２＋对鲤鱼脑垂体ＧｔＨ分泌细胞的毒定机制之一可能是它干扰了Ｃａ＾２＋的正常生理作用。     

心肌细胞内pH调节

心肌细胞具有自身的酸碱缓冲能力,并且通过Ｎａ＾＋／Ｈ＾＋交换蛋白、Ｎａ＾＋／ＨＣＯ＾－３同向转运和乳酸的跨膜运转使Ｈ＾＋外向转运,通过Ｃｌ＾－／ＨＣＯ＾－３交换使Ｈ＾＋内向转运等途径以维持细胞内生理ＰＨ,心肌细胞内Ｃａ＾２＋浓度受ＰＨ变化的影响。